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高分子三维支架材料通过诱导外周巨噬细胞的极化促进成骨前体细胞分化
1
作者 刘鹬 黄伟琨 梁羽 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期206-213,共8页
目的:考察硫酸软骨素-壳聚糖-羟基磷灰石(SF-CS-HA)三维支架材料对小鼠巨噬细胞极化的影响,并进一步研究骨免疫微环境调控对小鼠颅顶骨前体细胞在骨皮质外骨生成的影响。方法:制备SF-CS-HA三维支架材料,将支架材料与小鼠巨噬细胞RAW264.... 目的:考察硫酸软骨素-壳聚糖-羟基磷灰石(SF-CS-HA)三维支架材料对小鼠巨噬细胞极化的影响,并进一步研究骨免疫微环境调控对小鼠颅顶骨前体细胞在骨皮质外骨生成的影响。方法:制备SF-CS-HA三维支架材料,将支架材料与小鼠巨噬细胞RAW264.7共培养,流式细胞术检测巨噬细胞的M2型分化情况,RT-qPCR检测炎症因子基因的表达,Western blot检测TGF-β蛋白表达的变化。将巨噬细胞与SF-CS-HA三维支架材料共孵育后,制备条件培养基,比较完全培养基和条件培养基对小鼠颅顶骨前体细胞MC3T3-E1(3T3)增殖、迁移、ALP活性及形态变化,并通过Western blot检测骨生成相关蛋白的表达。最后,通过动物模型验证SF-CS-HA材料对于小鼠颅骨骨量增加的影响。结果:扫描电镜观察显示,SF-CS-HA三维支架材料表面和内部都具有均匀的空腔结构。流式细胞术检测结果显示,SF-CS-HA三维支架材料能够促进小鼠外周巨噬细胞向M2型极化。RT-qPCR和Western blot结果显示,SF-CS-HA三维支架材料提高了IL-10基因和TGF-β蛋白的表达量,降低了IL-1β基因的表达量。且SF-CS-HA三维支架能够促进MC3T3-E1细胞的增殖,显著提高ALP活性,增加细胞的迁移能力,提高细胞骨架蛋白Factin的生成。而条件培养基(骨免疫微环境调控下)对于MC3T3-E1细胞增殖和迁移能力的提升更为显著。此外,Western blot结果显示,骨免疫微环境调控下,骨生成蛋白OPN、COLA1、RUNX2、OCN和TGF-β显著增加。动物实验结果显示,SF-CS-HA材料能够在体内促进小鼠颅骨的新骨形成。结论:SF-CS-HA三维支架材料能够促进小鼠外周巨噬细胞的极化,且SF-CS-HA能够调控骨免疫微环境,促进骨细胞生成,在骨皮质外达到骨增量。 展开更多
关键词 三维支架材料 巨噬细胞 极化 共培养 颅顶骨前体细胞
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西门塔尔牛胰腺间充质干细胞分离培养及生物学特性研究
2
作者 王仲发 刘晏辰 +4 位作者 闫炎 李旻娟 何玉楠 关伟军 刘文忠 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第6期2519-2530,共12页
【目的】分离培养西门塔尔牛胰腺间充质干细胞,建立西门塔尔牛胰腺间充质干细胞系,研究其生物学特性,为西门塔尔牛种质资源的保存提供参考。【方法】采集西门塔尔牛胰腺组织,利用酶消法和组织块贴壁法分离培养胰腺间充质干细胞,并对胰... 【目的】分离培养西门塔尔牛胰腺间充质干细胞,建立西门塔尔牛胰腺间充质干细胞系,研究其生物学特性,为西门塔尔牛种质资源的保存提供参考。【方法】采集西门塔尔牛胰腺组织,利用酶消法和组织块贴壁法分离培养胰腺间充质干细胞,并对胰腺间充质干细胞的生物学特性进行鉴定;利用免疫荧光试验和半定量PCR测定细胞表面标记物(CD34、CD73、CD90、CD166)的表达情况;通过绘制P4、P10、P16代细胞生长曲线及计算群体倍增时间测定细胞增殖能力;通过细胞克隆试验测定细胞克隆形成率,通过划痕试验计算细胞迁移率;对纯化后的细胞分别进行成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞诱导分化,检测胰腺间充质干细胞多向分化能力,并通过染色体核型分析试验检测细胞的遗传稳定性。【结果】采用组织块贴壁法培养可得到胰腺间充质干细胞,且传代到第3代基本纯化。半定量PCR结果显示,表面标记物(CD73、CD90、CD166)呈阳性表达,而与造血细胞相关的表面抗原CD34呈阴性表达。西门塔尔牛胰腺间充质干细胞呈现典型的S型生长曲线,P4、P10、P16代细胞群体倍增时间分别为40.22、43.09和44.50 h,细胞克隆形成率分别为26.25%、19.00%和13.50%。划痕试验测定第3代细胞迁移率为44.44%。在体外诱导分化胰腺间充质干细胞后,结果呈现出清晰的脂滴、软骨团和钙结节。核型分析结果判定,西门塔尔牛胰腺间充质干细胞为正常二倍体核型(2n=60,XY),染色体组未发生变异。【结论】从西门塔尔牛胰腺组织分离培养的胰腺间充质干细胞能够稳定遗传,增殖能力强,且具有向成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞分化的潜能。研究结果可为西门塔尔牛组织修复提供新方法,为西门塔尔牛种质资源的保护和保存提供种子细胞。 展开更多
关键词 西门塔尔牛 胰腺间充质干细胞 分离培养 诱导分化
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原花青素和三聚磷酸钠交联提升可食性细胞培养肉支架性能 被引量：1
3
作者 刘泓 段瑞培 +3 位作者 齐立伟 张鸿儒 郭玉杰 张春晖 《农业工程学报》 CSCD 北大核心 2024年第24期283-293,共11页
交联对于提升胶原蛋白基可食性细胞培养肉(cell cultured meat,CCM)支架性能至关重要。为探究交联剂原花青素(proanthocyanidins,PA)及三聚磷酸钠(sodium tripolyphosphate,TPP)及不同交联方式对可食性CCM支架性能精准可控的提升作用,... 交联对于提升胶原蛋白基可食性细胞培养肉(cell cultured meat,CCM)支架性能至关重要。为探究交联剂原花青素(proanthocyanidins,PA)及三聚磷酸钠(sodium tripolyphosphate,TPP)及不同交联方式对可食性CCM支架性能精准可控的提升作用,制备了牛骨胶原蛋白(bovine bone collagen,BBC)/壳聚糖(chitosan,CS)自交联原纤维凝胶,通过PA、TPP及PA+TPP进一步交联获得BBC/CS支架样品(B/C/P、B/C/T、B/C/PT);并分别进行了样品交联前后的分子结构、理化特性和生物相容性的对比研究。结果表明:交联改善支架的结构且不影响BBC三螺旋分子结构的完整性,而B/C/P交联程度和结构有序性更高。交联后的B/C/P(98.3%,136μm)、B/C/PT(96.5%,175μm)和B/C/T(94.8%,203μm)显示更高的孔隙率,但孔径更小。交联改善了BBC/CS支架的热稳定性,但并未发现支架在更大温度范围内的热稳定性明显增强。同时,交联后的BBC/CS支架样品表现出性能提升,包括更低的溶散度,更高的交联度、溶胀率/保水率、酶抗性、机械强度及生物相容性。PA和TPP的潜在交联作用机制可能分别主要依靠其大量的羟基与BBC产生的氢键交联作用和其磷酸根与CS的氨基产生的离子交联作用,因而3种不同的交联方式(PA、TPP、PA+TPP)可基于不同作用机制,以不同成本、不同程度的精准提升BBC/CS支架性能。因此,在不同类型的可食性CCM支架生产实践中可基于支架的具体性能要求、生产成本及交联效率等因素,综合考虑采用适当的交联方式实现精准控制。研究结果可为基于PA和TPP交联构建性质和成本优良可控的可食性CCM支架提供参考。 展开更多
关键词 细胞培养肉支架 胶原蛋白 壳聚糖 原花青素 三聚磷酸钠 交联机制
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非人灵长类多能干细胞体外培养和诱导分化的研究进展
4
作者 沈可成 朱家桥 刘宗平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4278-4289,共12页
干细胞在疾病发生、细胞治疗、药物筛选和临床应用等方面具有巨大价值。自日本科学家Shinya Yamanaka发现诱导多能干细胞以来,相关的研究立即成为研究热点并持续至今。小鼠干细胞的研究为其它动物的相关研究开辟了道路,但在药物筛选和... 干细胞在疾病发生、细胞治疗、药物筛选和临床应用等方面具有巨大价值。自日本科学家Shinya Yamanaka发现诱导多能干细胞以来,相关的研究立即成为研究热点并持续至今。小鼠干细胞的研究为其它动物的相关研究开辟了道路,但在药物筛选和疾病治疗等方面有很大局限性。非人灵长类与人类具有更高的基因同源性,在生理、病理、生殖、药理、神经等多方面与人类高度相似,是研究人类疾病和开发人用药物的理想动物模型。非人灵长类研究也是新药在进入临床实验前必须的一个环节。非人灵长类干细胞的研究在疾病的机理研究和药物开发中越发重要,同时避免了伦理问题。本文从体外培养系统的优化和诱导分化的方法两个方面对非人灵长类多能干细胞的相关研究进行了综述,以期为非人灵长类干细胞进一步深入研究提供参考。 展开更多
关键词 非人灵长类 多能干细胞 体外培养 诱导分化
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桔青霉诱导子对红豆杉培养细胞中紫杉醇生物合成的影响 被引量：24
5
作者 李家儒 刘曼西 +1 位作者 曹孟德 王君健 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期78-82,共5页
在红豆杉培养红胞中，桔青霉诱导子促进紫杉醇的合成。将培养６—７ｄ的桔青霉菌丝体的粗提物，以５０μｇ碳水化合物／ｍｌ培养液的浓度加入到处于指数生长期末期的红豆杉培养细胞中，诱导子促进紫杉醇合成的作用最大。高压灭菌处理２... 在红豆杉培养红胞中，桔青霉诱导子促进紫杉醇的合成。将培养６—７ｄ的桔青霉菌丝体的粗提物，以５０μｇ碳水化合物／ｍｌ培养液的浓度加入到处于指数生长期末期的红豆杉培养细胞中，诱导子促进紫杉醇合成的作用最大。高压灭菌处理２０—９０ｍｉｎ，不影响诱导子的活性。 展开更多
关键词 桔青霉 诱导子 紫杉醇 细胞培养 红豆杉
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人外周血中树突状细胞的诱导、培养及其表面标记的初步研究 被引量：16
6
作者 范萍 武正炎 +2 位作者 王水 查小明 甄林林 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期25-28,共4页
目的 :在人外周血中有效地诱导、培养树突状细胞 (dendriticcells,DC) ,并鉴定其表面分子的表达。方法 :采用密度梯度离心的方法分离人外周血中的单个核细胞 ,在 6孔板上贴壁 2h ,然后吸去悬浮细胞 ,用粒细胞 巨噬细胞集落群体刺激因子... 目的 :在人外周血中有效地诱导、培养树突状细胞 (dendriticcells,DC) ,并鉴定其表面分子的表达。方法 :采用密度梯度离心的方法分离人外周血中的单个核细胞 ,在 6孔板上贴壁 2h ,然后吸去悬浮细胞 ,用粒细胞 巨噬细胞集落群体刺激因子 (GM CSF)、白细胞介素 4(IL 4)、肿瘤坏死因子 α(TNF α)细胞因子组合 ,刺激树突状细胞 (DC)增殖、分化。用标有荧光素的单抗标记培养细胞 ,在激光共聚焦显微镜下拍摄标记有荧光素的细胞 ,在流式细胞仪上分析所培养的细胞。结果 :该细胞直径在 10～ 2 0 μm ,培养 14天后 ,CD1a+ 48% ,CD83+ 97% ,CD40 + 33% ,人体主要组织相容性复合物 (MHC)Ⅱ + 95 % ,CD80 + 98% ,CD86 + 93% ,CD83是DC的成熟标记。结论 :该方法是一种可靠的诱导和培养DC的方法 ,对于乳腺癌患者还可通过动员等措施进一步提高DC的分离率。 展开更多
关键词 树突状细胞 外周血 共刺激分子 诱导 培养 表面标记
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人骨髓间充质干细胞的体外培养及诱导分化 被引量：10
7
作者 沙慧芳 冯久贤 +2 位作者 顾伟勇 谭强 董强刚 《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第3期232-234,F003,共4页
目的建立一株能在体外长期培养并具有多向分化潜能的人骨髓间充质干细胞(HBMSC).方法利用差异贴壁法从人肋骨中分离纯化HBMSC,在体外通过地塞米松、胰岛素诱导分化为脂肪细胞,用VitC、β-磷酸甘油、地塞米松诱导下可分化成骨细胞,裸鼠... 目的建立一株能在体外长期培养并具有多向分化潜能的人骨髓间充质干细胞(HBMSC).方法利用差异贴壁法从人肋骨中分离纯化HBMSC,在体外通过地塞米松、胰岛素诱导分化为脂肪细胞,用VitC、β-磷酸甘油、地塞米松诱导下可分化成骨细胞,裸鼠体内分化为软骨样细胞及成骨样组织,采用流式细胞仪检测细胞表面CD31、CD34、CD45、CD9、CD90、CD105和CD106.以2.5×107细胞接种于裸鼠皮下进行致瘤实验,用DY-NALREU-SSO反向杂交法检测HLA.结果细胞已连续培养超过30代仍能稳定生长,细胞表面特性为CD105、CD106阳性,而CD31、CD34、CD45、CD9、CD90为阴性.在体外能诱导成脂肪细胞、成骨细胞.无致瘤性,在裸鼠体内能形成软骨细胞及骨样组织.结论培养了一株能在体外长期培养及具有多向分化潜能的人骨髓间充质干细胞. 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 体外 CDl0 裸鼠 诱导分化 CD45 细胞表面 长期培养 连续培养 贴壁法
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骨髓间充质干细胞培养及向神经细胞诱导分化的实验研究 被引量：9
8
作者 朱光荣 周小玉 +2 位作者 周建伟 吴雨洁 汪承亚 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期100-102,F002,共4页
目的:体外培养骨髓间充质干细胞(BM-MSC),诱导BM-MSC向神经细胞分化。方法:采用DMEM培养液加胎牛血清(DMEM/FBS)或无血清培养基体外培养人BM-MSC,测定细胞倍增时间;免疫组织化学法分析BM-MSC的表面标记;纤维母细胞集落形成(CFU-F)试验检... 目的:体外培养骨髓间充质干细胞(BM-MSC),诱导BM-MSC向神经细胞分化。方法:采用DMEM培养液加胎牛血清(DMEM/FBS)或无血清培养基体外培养人BM-MSC,测定细胞倍增时间;免疫组织化学法分析BM-MSC的表面标记;纤维母细胞集落形成(CFU-F)试验检测BM-MSC增殖能力;应用二甲基亚砜/羟丁苯甲酯(DMSO/BHA)化学因子诱导BM-MSC向神经细胞分化。结果:BM-MSC为单层贴壁生长,呈现规则的集束辐射状排列。在对数生长期,细胞倍增时间约为46 h。CFU-F试验表明,体外培养的MSC的集落形成能力为正常骨髓单个核细胞(MNC)的15 000倍以上。免疫组化分析表明,BM-MSC为CD13和CD105阳性,CD34阴性。DMSO/BHA化学因子能诱导BM-MSC分化为神经细胞,但是分化后即失去增殖能力,并于48 h后逐渐死亡。结论:通过体外培养可以获得大量高度均一的BM-MSC。BM-MSC可向神经细胞诱导分化,但尚缺乏实际应用的可能性。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 细胞培养 诱导分化 神经细胞 干细胞移植
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不同培养条件对小鼠诱导性多能干细胞分化为神经元样细胞的影响 被引量：8
9
作者 陈旭东 范文娟 +3 位作者 袁科理 袁磊 王晓兰 王福青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1216-1219,1223,共5页
目的研究小鼠诱导性多能干细胞(i PSC)在不同培养条件诱导下向神经元样细胞分化的能力。方法将小鼠i PSC悬浮培养形成拟胚体,然后随机分为全反式维甲酸(ATRA)组、脑片共培养组和脑组织匀浆上清组,将其诱导分化成神经元样细胞。倒置显微... 目的研究小鼠诱导性多能干细胞(i PSC)在不同培养条件诱导下向神经元样细胞分化的能力。方法将小鼠i PSC悬浮培养形成拟胚体,然后随机分为全反式维甲酸(ATRA)组、脑片共培养组和脑组织匀浆上清组,将其诱导分化成神经元样细胞。倒置显微镜下观察细胞形态变化;免疫荧光染色技术对其进行鉴定分析;Western blot法检测巢蛋白(nestin)、微管相关蛋白2(MAP2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果小鼠i PSC在不同培养条件下都能够向神经元样细胞分化,这些神经元样细胞可以被神经细胞标志物nestin、MAP2标记;ATRA组的nestin、MAP2、GFAP蛋白相对表达量明显高于脑片共培养组和脑匀浆上清诱导组,但脑片共培养组和脑匀浆上清诱导组间无显著性差异。结论脑片微环境和脑组织匀浆上清均可诱导小鼠i PS细胞向神经元样细胞分化,但效果不及ATRA组。 展开更多
关键词 诱导性多能干细胞 脑片培养 脑组织匀浆 神经元样细胞 分化
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莱芜猪前体脂肪细胞的原代培养及诱导分化研究 被引量：6
10
作者 胡艳霞 曾勇庆 +5 位作者 崔志峰 杨伦 陈伟 陈其美 石元 祝洪磊 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1346-1352,共7页
为了建立莱芜猪前体脂肪细胞的体外培养体系,探索猪脂肪组织增生的生物学特征。本研究采集1日龄莱芜猪仔猪颈、背部皮下脂肪组织,采用胶原酶与胰蛋白酶相结合的方法,分离原代前体脂肪细胞,进行前体脂肪细胞的原代和传代培养,以及前体脂... 为了建立莱芜猪前体脂肪细胞的体外培养体系,探索猪脂肪组织增生的生物学特征。本研究采集1日龄莱芜猪仔猪颈、背部皮下脂肪组织,采用胶原酶与胰蛋白酶相结合的方法,分离原代前体脂肪细胞,进行前体脂肪细胞的原代和传代培养,以及前体脂肪细胞诱导分化的研究,并采用Real-time PCR方法检测前体脂肪细胞分化过程中关键基因PPARγ的表达。结果表明,分离的猪原代前体脂肪细胞约8h后开始贴壁,贴壁的细胞呈短梭形或不规则的三角形,第3天多数细胞进入指数生长期,呈成纤维细胞样形态,细胞生长曲线近似S形;诱导培养结果显示,少量细胞在第2天开始出现脂滴,大多数细胞在第3天出现脂滴,第7～8天小脂滴逐渐融合成大脂滴,在第12天左右融合成大脂滴,油红O染色呈橘红色。在前体脂肪细胞分化过程中PPARγ基因mRNA的表达量逐渐增加,在诱导后的48h表达量最高,随后其表达丰度逐渐下降。本试验成功建立了莱芜猪前体脂肪细胞培养体系和体外诱导分化模型,为进一步研究莱芜猪前体脂肪细胞增殖与分化机制和猪体脂肪的沉积奠定基础。 展开更多
关键词 莱芜猪 前体脂肪细胞 细胞培养 诱导分化
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水分胁迫对小麦幼苗及悬浮培养细胞中诱导蛋白表达的影响 被引量：11
11
作者 俞嘉宁 张林生 高俊凤 《西北植物学报》 CAS CSCD 2002年第4期865-870,共6页
丰抗 8号小麦幼苗及成熟胚诱导的悬浮培养细胞在水分胁迫 (- 1 .0 MPa PEG60 0 0 )下 ,可溶性蛋白含量与蛋白组分变化有差异 ;幼苗可溶性蛋白含量高于对照 ,并随生长的延长呈降低趋势 ;悬浮培养细胞可溶性蛋白含量低于对照 ,且略有上升 ... 丰抗 8号小麦幼苗及成熟胚诱导的悬浮培养细胞在水分胁迫 (- 1 .0 MPa PEG60 0 0 )下 ,可溶性蛋白含量与蛋白组分变化有差异 ;幼苗可溶性蛋白含量高于对照 ,并随生长的延长呈降低趋势 ;悬浮培养细胞可溶性蛋白含量低于对照 ,且略有上升 ;复水后均可恢复到对照水平。 SDS- PAGE电泳及薄层扫描分析结果表明 ,幼苗受水分胁迫诱导 ,出现 44.2 k D蛋白亚基 ,该蛋白亚基含量可随胁迫时间延长上升 ,复水后消失 ;在正常条件下悬浮培养细胞中含有44.2 k D蛋白亚基表达 ,轻度胁迫处理时 ,该蛋白亚基含量上升 ,对悬浮培养细胞进行水分胁迫 ,该蛋白则表现下降趋势 。 展开更多
关键词 水分胁迫 小麦 幼苗 悬浮培养细胞 诱导蛋白 表达
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真菌诱导子对悬浮培养西洋参细胞的生理效应 被引量：17
12
作者 刘长军 侯嵩生 +2 位作者 李新明 吴玉兰 李洪林 《武汉植物学研究》 CSCD 1996年第3期240-246,共7页
报道了不同真菌诱导子对悬浮培养的西洋参（Ｐａｎａｘｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ）细胞生长、皂甙和多糖合成，以及细胞内和培养液中过氧化物酶活性的生理效应。悬浮培养的西洋参细胞经刺盘孢菌（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｎｉｃ... 报道了不同真菌诱导子对悬浮培养的西洋参（Ｐａｎａｘｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ）细胞生长、皂甙和多糖合成，以及细胞内和培养液中过氧化物酶活性的生理效应。悬浮培养的西洋参细胞经刺盘孢菌（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｎｉｃｏｌｔｉａｎａｅ）丝体诱导子处理后，总皂甙产率可由对照的２９６ｍｇ／Ｌ增加到６７９ｍｇ／Ｌ（约占细胞干重的（１６．３％），比对照提高约１．３倍，而且总皂甙的８５％排放在培养液中；经黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｒａｎ）诱导子处理后，细胞多糖含量可达到１１．７９％（细胞干重），比对照增加１倍多。初步纯化的刺盘孢菌丝体诱导子和尖孢镰刀菌（Ｆｕｓｕｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）滤液诱导子在诱导处理前期能明显促进西洋参细胞生长，同时细胞内及培养液中过氧化物酶活性显著增加；随时间延长，细胞生长和酶活性逐步受到抑制。 展开更多
关键词 西洋参 真菌诱导子 细胞悬浮培养 生理效应
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人骨髓基质干细胞克隆的培养及其向神经元样细胞的定向诱导分化 被引量：13
13
作者 林竞韧 郭坤元 +1 位作者 李江琪 严定安 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第3期251-253,264,共4页
目的探讨人骨髓基质干细胞克隆的体外长期培养方法及其生物学特性。方法贴壁生长的基质干细胞以套环法消化分离,扩增培养,待细胞融合,传代培养。检测细胞的生长曲线、表面标记、克隆形成能力和向神经元定向诱导分化的潜能。结果克隆培... 目的探讨人骨髓基质干细胞克隆的体外长期培养方法及其生物学特性。方法贴壁生长的基质干细胞以套环法消化分离,扩增培养,待细胞融合,传代培养。检测细胞的生长曲线、表面标记、克隆形成能力和向神经元定向诱导分化的潜能。结果克隆培养的骨髓基质干细胞能传代20代以上,表达CD13、CD29、CD59,不表达CD11、CD14、CD31、CD34、CD45、CD80、CD86、CD117、HLA-DR;传代17代时能诱导分化为神经元样细胞。结论该培养条件能有效扩增骨髓基质干细胞,并保持分化潜能;克隆来源的骨髓基质细胞有相同的生物学特性。 展开更多
关键词 骨髓基质干细胞 细胞 培养的 神经元样细胞 诱导分化
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大鼠成体肝卵圆细胞分离培养及诱导分化的初步研究 被引量：5
14
作者 金世龙 刘宝华 +4 位作者 刘宏鸣 杨俊涛 顾红光 申海军 肖静 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第22期2259-2262,共4页
目的 通过成体大鼠肝卵圆细胞分离培养获取纯净的干细胞并观察诱导分化前后从肝卵圆细胞到肝细胞的形态变化。方法 采用AAF／PH肝干细胞刺激模型，胶原酶Ⅳ消化分离和Percoll梯度离心纯化肝卵圆细胞的方法，用地塞米松、DMSO和EGF、HGF... 目的 通过成体大鼠肝卵圆细胞分离培养获取纯净的干细胞并观察诱导分化前后从肝卵圆细胞到肝细胞的形态变化。方法 采用AAF／PH肝干细胞刺激模型，胶原酶Ⅳ消化分离和Percoll梯度离心纯化肝卵圆细胞的方法，用地塞米松、DMSO和EGF、HGF、SCF、LIF等生长因子联合应用诱导肝卵圆细胞增殖和分化为肝实质细胞。观察肝卵圆细胞到肝细胞形态变化过程，用免疫荧光技术，Western blotting分析检测了干细胞标志c-kit和RT-PCR分析法检测肝干细胞白蛋白和CK19 mRNA表达鉴定卵圆细胞。结果 分离得到的肝卵圆细胞活度达到90％，细胞肜态包括大小和颜色呈不均质，卵圆细胞直径是肝细胞直径的1／4～1／6。诱导后出现大而圆的肝细胞，可见卵圆细胞到肝细胞的中间变化过程，新分离的肝卵圆细胞存生长因子诱导下有向肝细胞分化的特性。经c-kit免疫荧比染色照黄绿色荧光，Western blotting检测肝卵圆细胞有c-kit蛋白条带，而大鼠肝细胞及胆管细胞则未出现条带。PCR分析显示卵圆细胞有CK19和白蛋白mRNA表达。结论 新分离的肝卵圆细胞同时表达c-kit，CK19和白蛋白3种抗原，诱导分化出现一系列从卵圆细胞到肝细胞的形态学变化，这种现象证明分离的肝卵圆细胞就是肝干细胞，经诱导分化可以产生成熟的肝细胞，成为进一步研究肝干细胞生物学特性的基础。 展开更多
关键词 肝卵圆细胞 细胞培养 诱导分化
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牛前体脂肪细胞的分离培养及诱导分化 被引量：18
15
作者 郭红芳 昝林森 孙永刚 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2014年第2期1-6,12,共7页
【目的】建立牛前体脂肪细胞的体外分离培养方法,研究牛前体脂肪细胞的生物学特性和分化特征,为研究牛脂肪发育和脂肪沉积的机制提供一种简便有效的细胞模型。【方法】采用Ⅰ型胶原酶消化法自新生牛脂肪组织中获得前体脂肪细胞,对培养... 【目的】建立牛前体脂肪细胞的体外分离培养方法,研究牛前体脂肪细胞的生物学特性和分化特征,为研究牛脂肪发育和脂肪沉积的机制提供一种简便有效的细胞模型。【方法】采用Ⅰ型胶原酶消化法自新生牛脂肪组织中获得前体脂肪细胞,对培养的牛前体脂肪细胞进行形态学观察、生长曲线测定、油红O染色及脂肪细胞标志基因LPL、PPAR-r和脂联素表达研究。【结果】80%的牛前体脂肪细胞接种后12h开始贴壁,4d后开始向脂肪细胞转化,10d后绝大部分细胞脂滴融合,细胞脂肪含量增加;分离的牛前体脂肪细胞接种后1~2d生长缓慢,3~8d进入对数生长期,9d后进入平台期,之后细胞数目开始下降。经胰岛素诱导分化过程中,LPL在牛前体脂肪细胞分化的早期开始表达,PPAR-γ在分化的中期开始高度表达,而脂联素在牛前体脂肪细胞分化的前期未检测到,在细胞分化后期高度表达。【结论】用Ⅰ型胶原酶消化法可获得大量的牛前体脂肪细胞。培养的牛前体脂肪细胞成分均一、生长旺盛,经胰岛素诱导后能稳定的向脂肪细胞分化。 展开更多
关键词 牛 前体脂肪细胞 生物学特性 诱导分化 分离培养
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成人骨髓间充质干细胞的体外诱导培养及向脂肪细胞的定向分化 被引量：8
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作者 岑航辉 韩春茂 +1 位作者 赖平平 吕庆华 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2003年第2期137-140,共4页
目的 :确定人骨髓的间充质干细胞 (MSCs)体外培养扩增、培养 ,向脂肪细胞表型转化的方法 ,并了解其生物学特性变化。方法 :用 Percoll分离液 (1.0 73g/ ml)分离成人 MSCs,传代培养。流式细胞仪检测表面标记物CD14 ,CD34,CD4 5 ,CD4 4,VL... 目的 :确定人骨髓的间充质干细胞 (MSCs)体外培养扩增、培养 ,向脂肪细胞表型转化的方法 ,并了解其生物学特性变化。方法 :用 Percoll分离液 (1.0 73g/ ml)分离成人 MSCs,传代培养。流式细胞仪检测表面标记物CD14 ,CD34,CD4 5 ,CD4 4,VLA- 1,HLA- DR和细胞周期 ,用 1-甲基 - 3-异丁基 -黄嘌呤、吲哚美辛、牛胰岛素、地塞米松实现向脂肪细胞的定向诱导分化。油红 O染色 ,光镜下观察橙红色脂滴沉着的细胞比例。结果 :分离培养获得贴壁细胞 ,流式细胞仪检测 CD14 ,CD34,CD4 5 ,HL A- DR阴性 ,CD4 4阳性 ,VLA- 1表达微弱。G0 / G1期细胞约为86 %。诱导 72 h后出现脂滴 ,第 3周油红 O染色示 85 %以上细胞转变为脂肪细胞。结论 :从人骨髓分离、体外诱导培养间充质干细胞 ,可定向促进向脂肪细胞表型转化。 展开更多
关键词 成人 骨髓间充质干细胞 体外诱导培养 脂肪细胞 定向分化
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接触式细胞共培养诱导人脐带华通胶间充质干细胞向类髓核细胞分化 被引量：6
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作者 张燕 阮狄克 +6 位作者 张超 王德利 李海峰 吴剑宏 刘玥 王超峰 何勍 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期936-942,共7页
目的:观察接触式细胞共培养条件下,人髓核细胞对脐带华通胶间充质干细胞(Wharton′s jelly-derived mesenchymal stem cells,WJMSCs)的诱导分化效应,为椎间盘退变性疾病的治疗寻找种子细胞来源。方法:取足月产健康新生儿脐带约30cm,分... 目的:观察接触式细胞共培养条件下,人髓核细胞对脐带华通胶间充质干细胞(Wharton′s jelly-derived mesenchymal stem cells,WJMSCs)的诱导分化效应,为椎间盘退变性疾病的治疗寻找种子细胞来源。方法:取足月产健康新生儿脐带约30cm,分离、纯化、培养WJMSCs;取人椎间盘髓核组织,酶消化法分离培养髓核细胞。取第三代稳定增殖的WJMSCs,利用流式细胞方法检测细胞免疫表型CD73/CD90/CD105/CD34/CD45/HLA-ABC/HLA-DR。用羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记WJMSCs,与髓核细胞以1∶1比例进行混合,在6孔板中进行接触式细胞共培养;以单独培养的WJMSCs为对照组。培养7d后利用高速流式细胞仪分选荧光标记阳性的WJMSCs,提取细胞总RNA,进行反转录获得cDNA,利用Real-Time PCR方法检测其Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Ⅵ型胶原、蛋白多糖、SOX-9和多能聚糖基因的相对表达,管家基因GAPDH作为内参,单独培养的WJMSCs作为对照,利用2-ΔΔCt方法计算基因相对表达变化。结果:WJMSCs原代细胞接种24h可见部分细胞贴壁生长,形态为梭形和多角形,1周后形成集落,2周时细胞融合达到90%。流式细胞检测结果显示CD73/CD90/CD105/和HLA-ABC(+),CD34/CD45和HLA-DR(-)。与髓核细胞共培养7d后WJMSCs的Ⅱ型胶原、蛋白多糖和SOX-9基因相对表达较对照组显著性增加(P<0.01),Ⅰ型胶原、Ⅵ型胶原和多能聚糖基因相对表达未见显著性变化(P>0.05)。结论:通过接触式细胞共培养人脐带WJMSCs能够被髓核细胞诱导分化为类髓核细胞,可为组织工程技术和细胞治疗修复退变椎间盘提供种子细胞来源。 展开更多
关键词 华通胶间充质干细胞 共培养 诱导分化 髓核细胞
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无机诱导因子骨组织工程支架材料体外细胞相容性的实验研究 被引量：5
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作者 陈梅梅 叶茂昌 +1 位作者 周来生 汪健 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2005年第5期513-516,共4页
目的:细胞毒性和细胞相容性是生物材料应用于临床首先必须面对的问题。通过对无机诱导因子骨组织工程支架材料的体外实验,来研究其细胞毒性和细胞相容性,为其临床应用作前期准备。方法:将生长状态良好的人骨髓基质细胞与无机诱导因子支... 目的:细胞毒性和细胞相容性是生物材料应用于临床首先必须面对的问题。通过对无机诱导因子骨组织工程支架材料的体外实验,来研究其细胞毒性和细胞相容性,为其临床应用作前期准备。方法:将生长状态良好的人骨髓基质细胞与无机诱导因子支架材料浸提液共同培养,通过镜下观察细胞形态、MTT比色法、流式细胞仪检测法评价生物材料浸提液对人骨髓基质细胞生长和增殖的影响;并将人骨髓基质细胞接种于无机诱导因子支架材料上,扫描电镜观察材料细胞复合物生长状况。结果:人骨髓基质细胞能够在无机诱导因子支架材料上生长,支架材料对体外培养的人骨髓基质细胞的形态不构成损害,对细胞的生长和增殖无明显抑制作用。结论:无机诱导因子支架材料具有良好的细胞生物学相容性,是一良好的组织工程骨构建支架材料。 展开更多
关键词 支架材料 细胞相容性 无机诱导因子
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南方红豆杉细胞培养合成紫杉醇诱导子浓度的优化 被引量：21
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作者 施中东 未作君 元英进 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2000年第4期36-40,共5页
本文利用短期诱导实验考察了几种诱导子的最优诱导浓度。结果表明 ,在南方红豆杉细胞培养体系中分别加入 1.0 mmol/ L 硝酸铈铵、0 .0 1mmol/ L 硝酸银、0 .1mg/ L花生四烯酸、0 .1mg/ L水杨酸以及 10 .0 mg/ L甲基茉莉酮酸最有利于紫... 本文利用短期诱导实验考察了几种诱导子的最优诱导浓度。结果表明 ,在南方红豆杉细胞培养体系中分别加入 1.0 mmol/ L 硝酸铈铵、0 .0 1mmol/ L 硝酸银、0 .1mg/ L花生四烯酸、0 .1mg/ L水杨酸以及 10 .0 mg/ L甲基茉莉酮酸最有利于紫杉醇产量的提高。 展开更多
关键词 植物细胞培养 南方红豆杉 紫杉醇 诱导子 产量
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猪脂肪前体细胞的原代培养及诱导分化 被引量：8
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作者 刘海峰 王翔 +2 位作者 李学伟 张利娟 张煦 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2009年第2期214-217,共4页
以2日龄仔猪皮下脂肪组织为材料，采用胶原酶消化法分离培养出细胞成分均一、增殖旺盛的原代脂肪前体细胞。对所获细胞采用含50nmol／L胰岛素＋100nmol／L地塞米松＋0．25mmol／L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤＋100nmol／L罗格列酮的分化培养... 以2日龄仔猪皮下脂肪组织为材料，采用胶原酶消化法分离培养出细胞成分均一、增殖旺盛的原代脂肪前体细胞。对所获细胞采用含50nmol／L胰岛素＋100nmol／L地塞米松＋0．25mmol／L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤＋100nmol／L罗格列酮的分化培养液进行诱导分化培养，少量细胞第2d开始出现脂滴，大多细胞第3d出现脂滴，分化率达95％以上，第4～7d小脂滴逐步融合为大脂滴。在脂滴出现及汇聚快慢上本实验所采用诱导方法明显快于其他诱导方式。 展开更多
关键词 脂肪前体细胞 细胞培养 诱导分化 罗格列酮 猪
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