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LncRNA-ATB在高糖诱导的人腹膜间皮细胞表型转换及增殖中的作用 被引量:11
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作者 车明文 龚翔 +4 位作者 张小金 魏达锋 王晓文 王汉民 巨立中 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期985-991,共7页
目的探讨长链非编码RNA-ATB(Lnc RNA-ATB)在高糖刺激诱导的人腹膜间皮细胞(HPMCs)表型转换及增殖中的作用。方法将HPMCs分为对照组、甘露醇组和高糖组3组。对照组不予任何处理;高糖组和甘露醇组分别采用50mmol/L D型葡萄糖和同等渗透压... 目的探讨长链非编码RNA-ATB(Lnc RNA-ATB)在高糖刺激诱导的人腹膜间皮细胞(HPMCs)表型转换及增殖中的作用。方法将HPMCs分为对照组、甘露醇组和高糖组3组。对照组不予任何处理;高糖组和甘露醇组分别采用50mmol/L D型葡萄糖和同等渗透压的甘露醇刺激72h。采用Real-time PCR检测各组Lnc RNA-ATB、E-钙黏素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)、细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子4(CDK4)、蛋白质p27(p27)及增殖细胞核抗原(PCNA)m RNA的表达,Western blotting检测各组E-cadherin、α-SMA、CTGF、Cyclin D1、CDK4、p27及PCNA蛋白的表达,并采用流式细胞仪检测细胞周期。利用慢病毒转染技术,将Lenti-Lnc RNA-ATB和sh RNA-Lnc RNA-ATB导入HPMCs中,分别上调及下调Lnc RNA-ATB的表达,采用Real-time PCR检测E-cadherin、α-SMA及CTGF m RNA的表达,Western blotting检测E-cadherin、α-SMA、CTGF蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期。结果 Real-time PCR、Western blotting及流式细胞仪检测结果显示,高糖刺激后,Lnc RNA-ATB、α-SMA、CTGF、Cyclin D1、CDK4及PCNA表达增加,E-cadherin及p27表达减少(P<0.05)。上调Lnc RNAATB表达可促进细胞表型转换及增殖,下调Lnc RNA-ATB表达可抑制细胞表型转换及增殖。结论高糖刺激可通过上调Lnc RNA-ATB的表达促进人腹膜间皮细胞表型转换及增殖。 展开更多
关键词 细胞表型转换 LncRNA-ATB 人腹膜间皮细胞
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SRF-miRNA-143-KLF-4信号通路在高糖诱导的人腹膜间皮细胞表型转换中的作用 被引量:7
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作者 车明文 闫计 +4 位作者 龚莉芳 耿秀萍 何丽洁 巨立中 王汉民 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期998-1004,共7页
目的探讨Kruppel样因子4(KLF-4)在高糖刺激诱导的人腹膜间皮细胞(HPMC)表型转换中的作用。方法以50mmol/L葡萄糖刺激HPMC 72h后,分别采用Real-time PCR及Western blotting检测KLF-4、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α... 目的探讨Kruppel样因子4(KLF-4)在高糖刺激诱导的人腹膜间皮细胞(HPMC)表型转换中的作用。方法以50mmol/L葡萄糖刺激HPMC 72h后,分别采用Real-time PCR及Western blotting检测KLF-4、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)及mi RNA-143的表达。以LV-KLF-4及inhibitor转染高糖刺激72h后的HPMC,sh RNA-KLF-4及mimic转染正常的HPMC,采用Real-time PCR及Western blotting检测KLF-4、E-cadherin、α-SMA、CTGF及mi RNA-143的表达。结果高糖刺激HPMC 72h后,Real-time PCR检测结果显示,KLF-4表达无明显变化,E-cadherin表达下降,α-SMA、CTGF及mi RNA-143表达增加。Western blotting检测结果显示,KLF-4、E-cadherin表达下降。上调KLF-4表达后,HPMC中E-cadherin表达增加,而α-SMA、CTGF表达下降;下调KLF-4表达后,HPMC中E-cadherin表达下降,而α-SMA、CTGF表达增加(P<0.05)。结论高糖刺激可以下调KLF-4蛋白的表达,SRF-mi RNA-143-KLF-4信号通路轴参与了高糖刺激诱导的人腹膜间皮细胞表型转换过程。 展开更多
关键词 细胞表型转换 Kruppel样因子4 人腹膜间皮细胞
全文增补中
瑞舒伐他汀抑制同型半胱氨酸诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞表型转化及信号通路 被引量:5
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作者 杨博 李平 +1 位作者 孟立平 郭航远 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期506-512,共7页
目的 验证瑞舒伐他汀是否具有抑制同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化的作用及其可能的信号通路。方法 SD大鼠主动脉VSMCs原代细胞培养鉴定,取4~7代细胞用于实验。VSMCs分为空白组、100μmol/L Hcy干预组、... 目的 验证瑞舒伐他汀是否具有抑制同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化的作用及其可能的信号通路。方法 SD大鼠主动脉VSMCs原代细胞培养鉴定,取4~7代细胞用于实验。VSMCs分为空白组、100μmol/L Hcy干预组、Hcy+瑞舒伐他汀干预组、Hcy+雷帕霉素干预组共4组。MTT法测各组VSMCs的增殖;划痕法和Transwell法测各组VSMCs的迁移;ICC法观察各组VSMCs的细胞形态;Western blot检测各组VSMCs中SM-actin、SM-MHC、calponin、OPN、p-P70S6K1的表达。结果 相比于空白组,Hcy组VSMCs增殖和迁移增加;细胞形态变圆;SM-MCH和calponin表达减少(P〈0.01);OPN和p-P70S6K1表达增加(P〈0.01)。相比于Hcy组,瑞舒伐他汀组和雷帕霉素组VSMCs增殖和迁移减少,细胞形态变的细长,SM-MHC和calponin表达增加(P〈0.01);OPN和p-P70S6K1表达减少(P〈0.01)。结论 Hcy可以促进VSMCs表型转化,瑞舒伐他汀可以抑制Hcy的这一作用,其机制可能是通过抑制mTOR/P70S6K1信号通路实现的。 展开更多
关键词 瑞舒伐他汀 雷帕霉素 同型半胱氨酸 平滑肌细胞表型转换
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lnc-MGC对高糖诱导的人腹膜间皮细胞转分化的影响 被引量:7
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作者 李欢 何丽洁 +1 位作者 娄未娟 王汉民 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期189-194,共6页
目的探索长链非编码RNA-MGC(lnc-MGC)在高糖诱导的人腹膜间皮细胞(HPMCs)转分化中的作用。方法使用永生化的HPMCs,设置对照组及高糖组,对照组给予常规培养基培养,高糖组给予含60mmol/L葡萄糖的常规培养液培养72h。采用Real-time PCR检... 目的探索长链非编码RNA-MGC(lnc-MGC)在高糖诱导的人腹膜间皮细胞(HPMCs)转分化中的作用。方法使用永生化的HPMCs,设置对照组及高糖组,对照组给予常规培养基培养,高糖组给予含60mmol/L葡萄糖的常规培养液培养72h。采用Real-time PCR检测两组lnc-MGC的表达变化,并采用Real-time PCR及Western bloting检测两组上皮细胞E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-1)和Ⅲ型胶原蛋白(COL-3)mRNA及蛋白表达的变化。采用慢病毒转染HPMCs,上调和下调lnc-MGC后,分别观察上述指标的变化。结果高糖刺激HPMCs 72h后,Real-time PCR检测结果显示:与对照组相比,高糖组lnc-MGC及α-SMA、CTGF、COL-1、COL-3 mRNA表达水平均明显增加(P<0.05),E-Cadherin mRNA表达水平明显降低(P<0.05);Western blotting检测结果显示其蛋白表达与mRNA表达变化趋势一致,差异均有统计学意义(P<0.05)。此外,Real-time PCR检测结果还显示,与对照组相比,慢病毒转染下调lnc-MGC后,lnc-MGC、α-SMA、CTGF、COL-1、COL-3的表达明显降低(P<0.05),E-Cadherin的表达明显升高(P<0.05);Western blotting检测结果显示其蛋白表达与mRNA表达变化趋势一致,差异均有统计学意义(P<0.05)。而慢病毒转染上调lnc-MGC后,Real-time PCR检测结果显示,与对照组相比,lncMGC、α-SMA、CTGF、COL-1、COL-3的表达增加(P<0.05),E-Cadherin的表达降低(P<0.05);Western blotting检测结果显示其蛋白表达与mRNA表达变化趋势一致,差异均有统计学意义(P<0.05)。采用mi RBase数据库预测所得lncRNA下游靶分子为miRNA126-3p,与对照组相比,高糖刺激后miRNA126-3p表达明显升高(P<0.05),转染下调lnc-MGC的慢病毒后miRNA126-3p表达明显降低(P<0.05),转染上调lnc-MGC的慢病毒后miRNA126-3p表达明显升高(P<0.05)。结论lnc-MGC通过调控miRNA126-3p参与HPMCs的转分化过程,调控lnc-MGC的表达可以改变HPMCs的表型转换,并有可能延缓腹膜纤维化的发展。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 腹膜间皮细胞 细胞表型转换
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