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人CYP3A4与POR和cyt b_5的三重共表达及其条件优化
1
作者
谢章明
刘文慧
+1 位作者
徐迎春
陈枢青
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期38-44,共7页
目的:研究人CYP3A4与POR和cyt b5用悬浮细胞共表达时的最佳条件。方法:悬浮培养Sf 9细胞,分别摸索摇床的温度、转速、摇瓶中细胞液的量、表面活性剂的加量、细胞的培养时间,以及3种病毒的加量比例等条件,并进行优化;然后,将表达产物制...
目的:研究人CYP3A4与POR和cyt b5用悬浮细胞共表达时的最佳条件。方法:悬浮培养Sf 9细胞,分别摸索摇床的温度、转速、摇瓶中细胞液的量、表面活性剂的加量、细胞的培养时间,以及3种病毒的加量比例等条件,并进行优化;然后,将表达产物制成微粒体后用于睾酮的代谢,并分别测其代谢活性。结果:当恒温摇床的温度为27℃,转速为90 r/min,每250 ml摇瓶中加入80～120 ml细胞密度为5×105个/ml的细胞液,并加入0.1%的PluronicF-68,细胞培养72 h时,最适合细胞的生长和目的蛋白的表达。此时,当3种病毒的加量比例为1∶1∶1时,表达条件最佳,其对底物睾酮代谢的Km值、Vmax和CLint分别为119.6μmol/L、0.52μmol/(min.g蛋白)和4.34 ml/(min.g蛋白)。结论:通过三重共表达CYP3A4、POR、cyt b5,以及对表达条件的优化,提高了目的蛋白的表达量,得到了较高代谢活性的CYP3A4,从而为新药代谢及药物-药物相互作用研究奠定了基础,为药物代谢酶的大量表达提供了可行的方案。
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关键词
细胞色素b5类
细胞
色素
P4
5
0酶系统
氧化还原酶
类
药物相互作用
药物设计
昆虫
细胞
学
基因
病毒
细胞
培养的
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职称材料
题名
人CYP3A4与POR和cyt b_5的三重共表达及其条件优化
1
作者
谢章明
刘文慧
徐迎春
陈枢青
机构
浙江大学药学院药理毒理与生化药学研究所
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期38-44,共7页
基金
国家科技重大专项基金(重大新药专项课题
No:2012ZX09506001-004)
文摘
目的:研究人CYP3A4与POR和cyt b5用悬浮细胞共表达时的最佳条件。方法:悬浮培养Sf 9细胞,分别摸索摇床的温度、转速、摇瓶中细胞液的量、表面活性剂的加量、细胞的培养时间,以及3种病毒的加量比例等条件,并进行优化;然后,将表达产物制成微粒体后用于睾酮的代谢,并分别测其代谢活性。结果:当恒温摇床的温度为27℃,转速为90 r/min,每250 ml摇瓶中加入80～120 ml细胞密度为5×105个/ml的细胞液,并加入0.1%的PluronicF-68,细胞培养72 h时,最适合细胞的生长和目的蛋白的表达。此时,当3种病毒的加量比例为1∶1∶1时,表达条件最佳,其对底物睾酮代谢的Km值、Vmax和CLint分别为119.6μmol/L、0.52μmol/(min.g蛋白)和4.34 ml/(min.g蛋白)。结论:通过三重共表达CYP3A4、POR、cyt b5,以及对表达条件的优化,提高了目的蛋白的表达量,得到了较高代谢活性的CYP3A4,从而为新药代谢及药物-药物相互作用研究奠定了基础,为药物代谢酶的大量表达提供了可行的方案。
关键词
细胞色素b5类
细胞
色素
P4
5
0酶系统
氧化还原酶
类
药物相互作用
药物设计
昆虫
细胞
学
基因
病毒
细胞
培养的
Keywords
Cytochromes
b
s
Cytochrome P-4
5
0 enzyme system
Oxidoreductases
DrugInteractions
Drug design
Insects/cytology
Genes, viral
Cells, cultured
分类号
R329 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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作者
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1
人CYP3A4与POR和cyt b_5的三重共表达及其条件优化
谢章明
刘文慧
徐迎春
陈枢青
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
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