白纹伊蚊细胞色素P450 CYP6N亚家族新成员5’-及3’-非翻译区序列功能分析 被引量：2

1

作者 周国理 黄炯烈 +1 位作者 吴瑜 王玲 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第4期36-39,53,共5页

目的　获得白纹伊蚊细胞色素P45 0CYP6N亚家族新成员 5’ -及 3’ -非翻译区 (untranslatedregion ,UTR)核苷酸序列 ,并进行功能分析。方法　以本文作者已获得的白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株一新的细胞色素P45 0CYP6基因cDNA片段 ,设计 1对... 目的　获得白纹伊蚊细胞色素P45 0CYP6N亚家族新成员 5’ -及 3’ -非翻译区 (untranslatedregion ,UTR)核苷酸序列 ,并进行功能分析。方法　以本文作者已获得的白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株一新的细胞色素P45 0CYP6基因cDNA片段 ,设计 1对特异性引物 ,以反向引物 ,进行 5’ -cDNA末端快速扩增 (rapidamplificationofcDNAends ,RACE) ,以正向引物进行 3’ -RACE。然后分别进行克隆、测序和鉴定 ,以获得 5’ -UTR和 3’ -UTR ,并运用PC/GENE软件分析其功能。结果　获得CYP6N亚家族中两个新成员 5’ -UTR及 3’ -UTR ;其结构特征包括 :两个新成员前导序列均为 46个核苷酸 ;起始密码子ATG两侧核苷酸 - 3位是A、+ 4位是T ;5’ -UTR区域无稳定性的发卡结构 ;终止密码子在CYP6N3为TAA、在CYP6N4为TAG ,紧挨其 3’端核苷酸分别为A和G ,翻译产物羧基端均为亮氨酸。结论　成功地获得了白纹伊蚊细胞色素P45 0CYP6N亚家族两个新成员 5’ -及 3’ -非翻译区序列 ,进一步分析表明该两个新成员均能进行有效翻译 ,昆虫细胞色素P45 0基因翻译起始调控与翻译终止调控有部分类似于脊椎动物mRNA的翻译调控 ,但具有多态性的特点。 展开更多

关键词 白纹伊蚊 细胞色素 p450 CYp6N亚家族 非翻译区

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家蚕细胞色素P450基因CYP6AE21的克隆、表达分析及亚细胞定位 被引量：5

2

作者 王东 李兵 +3 位作者 林超 陈玉华 许雅香 沈卫德 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期1-8,共8页

信号失活是嗅觉动态过程的一个重要步骤,这一过程涉及多样的气味降解酶类。本研究利用RT-PCR方法从家蚕Bombyx mori雄蛾的触角中克隆了一个细胞色素P450基因CYP6AE21。该基因含有一个1 572 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码... 信号失活是嗅觉动态过程的一个重要步骤,这一过程涉及多样的气味降解酶类。本研究利用RT-PCR方法从家蚕Bombyx mori雄蛾的触角中克隆了一个细胞色素P450基因CYP6AE21。该基因含有一个1 572 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码523个氨基酸,预测分子量为60.5 kD,等电点为8.4,含有细胞色素P450的特征序列血红素结合位点区域。CYP6AE21和家蚕CYP6AE2基因一样在相同位置含有1个内含子序列,且相应的2个外显子大小相同。两者的核苷酸序列相似性达到94.5%,且在基因组上以头尾相连的方式成簇排列,中间由约7.6 kb核苷酸序列隔开。CYP6AE21在幼虫的头部和脂肪体,以及雄蛾和雌蛾的触角中表达量较高;在幼虫的其他组织和蛾的多个组织中也有一定的表达。P450酶系的重要组分之一——NADPH细胞色素P450还原酶(cytochrome P450reductase,CPR)基因也在雌蛾和雄蛾触角中高水平表达,而在其他组织中表达量相对较低。亚细胞定位分析表明CYP6AE21表达产物定位于细胞质中。推测CYP6AE21和CYP6AE2是由其中一个基因加倍复制形成的;此P450的功能之一可能是参与内化进细胞的气味分子的降解清除。 展开更多

关键词 家蚕 细胞色素p450 CYp6家族 亚细胞定位 嗅觉 气味降解酶

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棉铃虫细胞色素P450家族CYP6AE14基因克隆、序列分析及蛋白原核表达 被引量：3

3

作者 赵伊英 武万锋 +1 位作者 汪小东 张建华 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期181-187,共7页

采用同源克隆技术克隆石河子棉区棉铃虫抗性品系的P450家族解棉酚基因CYP6AE14。克隆获得的目的基因全长1 581bp,编码526个氨基酸。序列分析表明,该抗性品系的CYP6AE14有1个氨基酸发生突变,即Y25F;其与烟草天蛾的CYP6AE32同源性较高,达... 采用同源克隆技术克隆石河子棉区棉铃虫抗性品系的P450家族解棉酚基因CYP6AE14。克隆获得的目的基因全长1 581bp,编码526个氨基酸。序列分析表明,该抗性品系的CYP6AE14有1个氨基酸发生突变,即Y25F;其与烟草天蛾的CYP6AE32同源性较高,达60%。利用原核表达载体pET28-a在大肠杆菌中成功表达棉铃虫P450 CYP6AE14基因,为进一步的基因功能验证奠定基础。 展开更多

关键词 棉铃虫 细胞色素p450 CYp6AE14 棉酚

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家蚕细胞色素P450基因Bmcyp6A8的克隆及序列与表达分析 被引量：1

4

作者 曾媛琴 米智 +2 位作者 隆耀航 杜文华 朱勇 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期421-427,共7页

昆虫细胞色素P450第6亚家族(CYP6)氧化酶在对异源有毒物质的代谢中具有重要作用。采用生物信息学方法获得与果蝇CYP6亚家族基因cyp6A8同源的家蚕cyp6A8基因序列,预测该基因的开放阅读框(ORF)为1572bp,编码523个氨基酸,推定的蛋白分子质... 昆虫细胞色素P450第6亚家族(CYP6)氧化酶在对异源有毒物质的代谢中具有重要作用。采用生物信息学方法获得与果蝇CYP6亚家族基因cyp6A8同源的家蚕cyp6A8基因序列,预测该基因的开放阅读框(ORF)为1572bp,编码523个氨基酸,推定的蛋白分子质量为61.52kD,等电点为8.17。以家蚕5龄第3天幼虫头部cDNA为模板,用设计的特异引物PCR扩增出一条约1500bp的条带,大小与家蚕cyp6A8基因的ORF预测值接近,命名为Bmcyp6A8基因(GenBank登录号:GQ241737)。同源性分析结果:Bmcyp6A8基因与野桑蚕cyp6AE8基因的相似性为93%;与棉铃虫cyp6AE12基因的相似性为57%;与人cyp3A43基因的相似性为48%。芯片数据分析显示Bmcyp6A8基因在家蚕5龄第3天幼虫的头部、表皮与中部丝腺前部高量表达,与家蚕CYP6亚家族的其它横向同源基因不同的是,只有该基因在中部丝腺前部表达,推测其具有功能特异性。 展开更多

关键词 家蚕 细胞色素p450第6亚家族 基因克隆 序列分析 表达特征 芯片数据分析

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茶树细胞色素P450基因CYP71A26与CYP71B34的克隆及差异表达特征分析 被引量：6

5

作者 单睿阳 林郑和 +3 位作者 陈志辉 钟秋生 游小妹 陈常颂 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期450-460,共11页

利用NCBI茶树转录组数据库,以铁观音芽叶为材料,克隆了茶树细胞色素P450基因CYP71A26与CYP71B34的cDNA全长。CYP71A26与CYP71B34的cDNA全长分别为1 879 bp和1 764 bp,分别含有1 539 bp(编码513个氨基酸)和1 533 bp(编码511个氨基酸)的... 利用NCBI茶树转录组数据库,以铁观音芽叶为材料,克隆了茶树细胞色素P450基因CYP71A26与CYP71B34的cDNA全长。CYP71A26与CYP71B34的cDNA全长分别为1 879 bp和1 764 bp,分别含有1 539 bp(编码513个氨基酸)和1 533 bp(编码511个氨基酸)的完整开发阅读框。氨基酸序列比对结果显示,CYP71A26与CYP71B34的同源性为42.47%,为2个亚家族基因。氨基酸结构分析表明,2个基因均具有植物P450的螺旋C(Helix C)、螺线I(Helix I)、螺线K(Helix K)、"Meander"区域序列和血红素结合域(Heme binding domain)的典型结构。进化树分析显示,CYP71A26与CYP71B34在分子进化树上分属两大分支,2个基因与其他物种亲缘关系的远近不同。三级结构模拟与功能域分析显示,CYP71A26与CYP71B34主要由N端的β折叠和C端的α螺旋结构组成,且2个基因均具有一个P450蛋白结构域(Pfamdomain)。荧光定量PCR结果表明,CYP71A26与CYP71B34基因在不同茶树害虫为害的叶片中,分别表现出上调和下调表达的现象。而在冷热环境下,CYP71A26与CYP71B34基因分别表现出下调和上调表达的现象。表明茶树CYP71A26与CYP71B34基因均参与了生物(害虫)与非生物(温度)的胁迫响应,但两个基因表达相反,参与环节可能相反。 展开更多

关键词 茶树 细胞色素p450 克隆 亚家族基因 胁迫 表达相反

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三种杀虫剂亚致死剂量对草地贪夜蛾细胞色素P450基因表达的影响 被引量：9

6

作者 张百重 苏栩 +10 位作者 卢留洋 甄丛爱 朱斌 李亚设 董文阳 汪耿 胥燕博 孔凡彬 刘润强 陈锡岭 高希武 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期565-573,共9页

【目的】为明确杀虫剂亚致死剂量对草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda细胞色素P450基因表达的影响。【方法】本研究采用叶片浸渍法测定了3种杀虫剂[氯虫苯甲酰胺、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和苏云金杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)]对草地... 【目的】为明确杀虫剂亚致死剂量对草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda细胞色素P450基因表达的影响。【方法】本研究采用叶片浸渍法测定了3种杀虫剂[氯虫苯甲酰胺、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和苏云金杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)]对草地贪夜蛾2龄幼虫的毒力,以及通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, RT-qPCR)技术测定了这3种杀虫剂亚致死剂量(LC10)处理后48 h时草地贪夜蛾2龄幼虫16个P450基因的表达量。【结果】氯虫苯甲酰胺、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和Bt对草地贪夜蛾2龄幼虫的LC10值分别为0.931, 0.283和1 089.688 mg/L。2龄幼虫受LC10氯虫苯甲酰胺胁迫后,13个P450基因(CYP4G75,CYP6AB12,CYP6B50,CYP321A7,CY321A8,CYP321A9,CYP321A10,CYP321B1,CYP337B5,CYP9A59,CYP9A58,CYP6AE44及CYP6AE43)表达上调,其中CYP6AE44表达量为对照的34.60倍;2龄幼虫受LC10甲维盐胁迫后,11个P450基因(CYP4G75,CYP6AB12,CYP321A7,CY321A8,CYP321A9,CYP321A10,CYP321B1,CYP337B5,CYP9A58,CYP6AE44及CYP6AE43)表达上调,其中CYP321B1表达量为对照的28.70倍;2龄幼虫受LC10Bt胁迫后,11个P450基因(CYP4G75,CYP6AB12,CYP6AN4,CYP321A7,CY321A8,CYP321A9,CYP321A10,CYP321B1,CYP337B5,CYP6AE44及CYP6AE43)表达上调,其中CYP6AE44表达量为对照的40.80倍。【结论】草地贪夜蛾2龄幼虫的多个P450基因受这3种杀虫剂亚致死剂量处理后表达上调,其中CYP4G75,CYP6AB12,CYP321A7,CY321A8,CYP321A9,CYP321A10,CYP321B1,CYP321B5,CYP6AE44及CYP6AE43均能被这3种杀虫剂诱导表达。 展开更多

关键词 草地贪夜蛾 细胞色素p450 杀虫剂 苏云金杆菌 基因表达 亚致死剂量

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中国健康人群与精神分裂症患者细胞色素P450 2C19/P450 2D6遗传多态性的比较 被引量：9

7

作者 周健 康熙雄 +3 位作者 吕红 王雅杰 陈雪彦 王刚 《首都医科大学学报》 CAS 2007年第2期176-179,共4页

目的探讨中国健康人群与精神分裂症患者细胞色素P450 2C19(CYP2C19)/P450 2D6(CYP2D6)遗传多态性的相关性。方法应用PCR与DNA测序相结合的方法,对88名符合ICO-10诊断标准的精神分裂症患者和283名健康志愿者进行了CYP2C19基因多态性分析... 目的探讨中国健康人群与精神分裂症患者细胞色素P450 2C19(CYP2C19)/P450 2D6(CYP2D6)遗传多态性的相关性。方法应用PCR与DNA测序相结合的方法,对88名符合ICO-10诊断标准的精神分裂症患者和283名健康志愿者进行了CYP2C19基因多态性分析。同时用此方法对87名精神分裂症患者与93名健康志愿者进行了CYP2D6的基因多态性分析。根据CYP2C19*2(G681A)将精神分裂症患者和健康志愿者基因型分为3组(G/G,G/A,A/A);同样方法将CYP2C19*3(G636A)和CYP2D6(C100T)基因型各分为3组。结果在CYP2C19的检测中,健康志愿者中共检测到6个基因型,在精神分裂症患者中检测到7个基因型。2组间等位基因型差异没有统计学意义(CYP2C19*2χ2=4.954,P>0.05;CYP2C19*3χ2=2.334,P>0.05)。但发现精神分裂症患者突变型纯合子A/A的基因型频率明显高于健康志愿者。在CYP2D6(C100T)的基因型和等位基因型检测中,精神分裂症患者和健康志愿者组间的基因型和等位基因差异无统计学意义(χ2=0.202,P>0.05;χ2=0.066,P>0.05)。结论中国精神分裂症患者与健康人群在细胞色素氧化酶CYP2C19/CYP2D6遗传多态性上差异无统计学意义,CYP2C19*2的突变型纯合子可能是中国精神分裂症患者的一个易感因素。 展开更多

关键词 精神分裂症 细胞色素p450 2C19 细胞色素p450 2D6 遗传多态性

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淡色库蚊细胞色素P450 CYP4E2r6基因的克隆、表达及鉴定 被引量：6

8

作者 李秀兰 滕达 +2 位作者 孙艳 马磊 朱昌亮 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期552-557,共6页

目的克隆并表达鉴定淡色库蚊细胞色素P450(CYP4E2r6)基因。方法根据昆虫细胞色素P450氨基酸保守序列设计一对简并引物,采用RT-PCR,从淡色库蚊四龄幼虫mRNA中扩增出目的基因片段。产物经T-A克隆、测序、比对,在抗性品系高表达的CYP4E2r6... 目的克隆并表达鉴定淡色库蚊细胞色素P450(CYP4E2r6)基因。方法根据昆虫细胞色素P450氨基酸保守序列设计一对简并引物,采用RT-PCR,从淡色库蚊四龄幼虫mRNA中扩增出目的基因片段。产物经T-A克隆、测序、比对,在抗性品系高表达的CYP4E2r6亚克隆入原核表达载体pGEX-6P1,在大肠杆菌BL21中进行原核表达,将细菌总蛋白进行SDS-PAGE及Westernblot鉴定。结果14个阳性克隆中9个为CYP4新序列,由GenBank登录上网(GenBank/NCBICB074944-51、CB270837,2003年);经鉴定属CYP4家族CYP4H、CYP4E、CYP4J亚家族;CYP4E2r6基因已成功表达。结论获得的CYP4E2r6融合表达蛋白为进一步研究CYP4基因与抗药性之间的关系奠定基础。 展开更多

关键词 淡色库蚊 细胞色素p450 CYp4E2r6 原核表达

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抗氰戊菊酯棉铃虫细胞色素P450 CYP6B7基因的克隆及分析 被引量：4

9

作者 唐涛 成玉红 +2 位作者 王成菊 张文吉 邱立红 《农药学学报》 CAS CSCD 2007年第4期370-375,共6页

以抗氰戊菊酯棉铃虫六龄幼虫中肠组织总RNA为模板,采用特异性引物,通过对反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的条件进行不断探索和优化,成功克隆出全长为1 557bp的基因片段(GenBank登录号DQ497428)。该片段包括一个完整的开放阅读框架(1 515... 以抗氰戊菊酯棉铃虫六龄幼虫中肠组织总RNA为模板,采用特异性引物,通过对反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的条件进行不断探索和优化,成功克隆出全长为1 557bp的基因片段(GenBank登录号DQ497428)。该片段包括一个完整的开放阅读框架(1 515bp)及5′端的42个碱基,编码504个氨基酸残基。与国外报道的细胞色素P450CYP6B7基因(GenBank登录号AF031468)的核苷酸、氨基酸同源性分别为97.75%和98.81%,为CYP6B7的等位基因。Northern杂交分析表明,抗性品系棉铃虫中肠组织中CYP6B7mRNA的表达量明显高于敏感品系的,初步表明CYP6B7在棉铃虫对氰戊菊酯的抗药性中起着重要作用。 展开更多

关键词 棉铃虫 氰戊菊酯 抗药性 细胞色素p450 CYp6B7 RT-pCR

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野桑蚕细胞色素P450氧化酶活性测定及CYP9家族基因的诱导转录 被引量：7

10

作者 赵华强 宋丽莉 +1 位作者 李兵 沈卫德 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期287-291,共5页

采用酶标板酶活性动力学法检测了氯氰菊酯诱导苏大野桑蚕中肠和脂肪体的PNOD活性。结果表明:氯氰菊酯诱导24 h,脂肪体、中肠PNOD活性分别增加了18.7%,12.2%。根据野桑蚕CYP9A20基因(GenBank登录号:FJ378716)、CYP9A21基因(GenBank登录号... 采用酶标板酶活性动力学法检测了氯氰菊酯诱导苏大野桑蚕中肠和脂肪体的PNOD活性。结果表明:氯氰菊酯诱导24 h,脂肪体、中肠PNOD活性分别增加了18.7%,12.2%。根据野桑蚕CYP9A20基因(GenBank登录号:FJ378716)、CYP9A21基因(GenBank登录号:FJ265741)、CYP9A22基因(GenBank登录号:EF535806)和CYP9G3基因片段设计引物,用半定量RT-PCR方法分析了氯氰菊酯诱导野桑蚕CYP9家族基因的表达水平。结果表明,氯氰菊酯诱导24 h,CYP9A21基因在中肠的mRNA表达量是对照的2.1倍,CYP9A20,CYP9A21,CYP9G3基因在脂肪体的mRNA表达量是对照的1.9,3.5,1.4倍。推测野桑蚕CYP9A21等基因的过量表达可能导致野桑蚕对氯氰菊酯氧化解毒代谢的增强。 展开更多

关键词 野桑蚕 细胞色素p450 CYp9家族基因 半定量RT-pCR

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细胞色素P450 2D6＊10基因多态性对剖腹术后曲马多自控静脉镇痛的影响 被引量：3

11

作者 宋春雨 芦树军 +5 位作者 常菲菲 刘禹彤 张延卓 王楠 于平 董弘 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期14-16,共3页

目的评价细胞色素P450 2D6*10(CYP2D6*10)基因多态性对剖腹术后曲马多自控静脉镇痛的影响。方法择期剖腹术患者100例,ASAⅠ或Ⅱ级,经肘正中静脉采血2 ml,采用PCR方法进行细胞色素P450 CYP2D6*10基因分型,分为野生型纯合子组(w/w组,n=28)... 目的评价细胞色素P450 2D6*10(CYP2D6*10)基因多态性对剖腹术后曲马多自控静脉镇痛的影响。方法择期剖腹术患者100例,ASAⅠ或Ⅱ级,经肘正中静脉采血2 ml,采用PCR方法进行细胞色素P450 CYP2D6*10基因分型,分为野生型纯合子组(w/w组,n=28),杂合子组(m/w组,n=24)和突变型纯合子组(m/m组,n=42)。手术结束前30 min,静脉注射曲马多100mg、格拉司琼1 mg。清醒后VAS≤4分开始PCA,若VAS>4分追加曲马多50 mg,30 min后VAS≤4分,继续单纯行PCA,若VAS>4分则静脉注射芬太尼50μg,至VAS≤4分继续单纯行PCA,曲马多PCA背景输注速率12 mg/h,PCA剂量15 mg,锁定时间15 min,记录术后2、4、24、48和72 h曲马多累积用量及PCA次数,并行VAS评分。结果术后3 d w/w组、m/w组和m/m组曲马多用量分别为(130±26)mg,(147±44)mg,(157±34)mg,三组差异无统计学意义。与m/m组比较,术后2 h w/w组、m/w组患者VAS评分明显降低(P<0.05)。术后4 h w/w组、m/w组患者自控次数明显减少(P<0.05)。结论 CPY2D6*10基因多态性是影响剖腹术后曲马多自控静脉镇痛遗传因素之一。 展开更多

关键词 细胞色素p450 CYp2D6 基因多态性 曲马多

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人细胞色素P4502A6cDNA克隆及其在哺乳类细胞中的表达 被引量：6

12

作者 严乐勤 余应年 +1 位作者 诸葛坚 谢海洋 《中国药理学与毒理学杂志》 CSCD 北大核心 2000年第1期31-35,共5页

应用逆转录 -聚合酶链反应 ( RT- PCR)技术和DNA重组技术从人肝组织中克隆细胞色素 P4502 A6( CYP2 A6) c DNA片段至克隆载体 p Blue-script SK( M1 3- )中 ,经限制性酶切图谱分析确证克隆的片段为 CYP2 A6c DNA,然后将该片段亚克隆入... 应用逆转录 -聚合酶链反应 ( RT- PCR)技术和DNA重组技术从人肝组织中克隆细胞色素 P4502 A6( CYP2 A6) c DNA片段至克隆载体 p Blue-script SK( M1 3- )中 ,经限制性酶切图谱分析确证克隆的片段为 CYP2 A6c DNA,然后将该片段亚克隆入真核细胞表达载体 p REP9,用改良磷酸钙共沉淀法转染中国仓鼠肺 CHL细胞系 ,建立 CHL- 2 A6转基因细胞系 ,并对 CYP 2 A6特征表达酶香豆素 - 7-羟化酶 ( COH)活性进行了测定 ,结果显示 CHL-2 A6S9组分的 COH比活性是 ( 2 .58± 0 .68) nmol· min-1· g-1蛋白 ,而对照细胞 CHL测不到 COH活性 ,表明所转 CYP2 A6c DNA表达的蛋白质具有功能 .CHL - 2 A6的建立为药物代谢研究和毒理学研究提供了强有力的工具 . 展开更多

关键词 细胞色素p450 转基因细胞系 2A6 CDNA

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Q型烟粉虱细胞色素P450 CYP6DV5基因克隆及其在烟粉虱对噻虫嗪抗性中的作用 被引量：3

13

作者 杨峰山 殷城 +5 位作者 杨静 危学高 杜田华 杨鑫 王少丽 张友军 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期83-89,共7页

烟粉虱Bemisia tabaci已严重危害农作物的正常生长,而新烟碱类杀虫剂噻虫嗪已被广泛用于烟粉虱的防治,但由于常年应用,致使烟粉虱对噻虫嗪产生了严重的抗性,而目前其抗药性分子机制尚不明确。本研究通过荧光定量PCR比较分析烟粉虱噻虫... 烟粉虱Bemisia tabaci已严重危害农作物的正常生长,而新烟碱类杀虫剂噻虫嗪已被广泛用于烟粉虱的防治,但由于常年应用,致使烟粉虱对噻虫嗪产生了严重的抗性,而目前其抗药性分子机制尚不明确。本研究通过荧光定量PCR比较分析烟粉虱噻虫嗪抗性及敏感种群,发现细胞色素P450基因CYP6DV5在噻虫嗪抗性品系中的表达量为敏感品系的2.95倍,依据基因组数据库克隆该基因的全长序列,序列分析结果表明,该基因具有细胞色素P450基因的保守结构域,属于典型的昆虫P450基因。进一步分析其在不同发育阶段和部位中的表达量,发现细胞色素P450基因CYP6DV5在烟粉虱成虫阶段和头部表达丰富,同时噻虫嗪能够显著诱导该基因的表达。通过RNA干扰试验,发现敲低CYP6DV5基因表达能够显著提高烟粉虱对噻虫嗪的敏感性。结果表明,CYP6DV5基因参与了Q型烟粉虱对噻虫嗪抗性的形成。研究结果将有助于揭示烟粉虱对噻虫嗪的抗性形成机制,并为烟粉虱的综合治理提供理论基础。 展开更多

关键词 烟粉虱 细胞色素p450 CYp6DV5基因 基因克隆 RNA干扰 噻虫嗪抗性

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一种新的人细胞色素P450 2A6 cDNA克隆 被引量：1

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作者 诸葛坚 钱羽力 +1 位作者 谢海洋 余应年 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第10期875-878,共4页

目的 :克隆人细胞色素P45 0 2A6cDNA。方法 :用逆转录 -PCR和DNA重组技术 ,从人肝组织中扩增人细胞色素P45 0 2A6基因的cDNA ,并将其连接到pBluescript载体上 ,对CYP2A6cDNA进行全序列测定。结果 :所克隆的cDNA与Yamano等发表的CYP2A6c... 目的 :克隆人细胞色素P45 0 2A6cDNA。方法 :用逆转录 -PCR和DNA重组技术 ,从人肝组织中扩增人细胞色素P45 0 2A6基因的cDNA ,并将其连接到pBluescript载体上 ,对CYP2A6cDNA进行全序列测定。结果 :所克隆的cDNA与Yamano等发表的CYP2A6cDNA序列相比 ,在编码区有两个变异 ,即codon 8CTG→TTG ,编码的氨基酸不变 ,为亮氨酸。codon479GGC(甘氨酸 )→GTC(缬氨酸 ) ,其余均相同。而在其 3′端非编码区变异很多。与Fernandez -Salguero等报道的CYP2A7序列相比 ,其 5′端虽与所克隆的CYP2A6有较多差异 ,但其codon479也是GTC(缬氨酸 ) ,在 3′端非编码区仅略有差异。而所克隆的CYP2A6cDNA与Yamano等报道的CYP2A7序列相比 ,3′端非编码区至所设PCR引物止 ,所克隆的基因序列完全相同 ,而在编码区却差异较多。结论 :本实验室克隆的CYP2A6cDNA是一种新的CYP2A6cDNA序列 。 展开更多

关键词 细胞色素p450 CYp2A6cDNA 序列分析 克降

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白纹伊蚊细胞色素P450 CYP6N3基因的原核表达及鉴定 被引量：1

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作者 吴瑜 黄炯烈 +2 位作者 周国理 葛春喜 王玲 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第2期9-12,共4页

目的　对白纹伊蚊细胞色素P4 5 0CYP6N3基因进行原核表达 ,以获得高效表达蛋白。方法　根据CYP6N3基因的全长cRNA为模板进行RT -PCR。产物经T -A克隆测序鉴定后 ,亚克隆入原核融合表达载体 pGEX - 4T - 1(含有编码 2 6KDaGST的基因序列 ... 目的　对白纹伊蚊细胞色素P4 5 0CYP6N3基因进行原核表达 ,以获得高效表达蛋白。方法　根据CYP6N3基因的全长cRNA为模板进行RT -PCR。产物经T -A克隆测序鉴定后 ,亚克隆入原核融合表达载体 pGEX - 4T - 1(含有编码 2 6KDaGST的基因序列 )中 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中进行原核表达。将细菌总蛋白进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 ,通过Westernblot分析鉴定目的蛋白的位置 ,并运用核酸蛋白分析仪扫描凝胶以确定表达产物的含量。结果　获得了高效表达的融合蛋白GST -CYP6N3,表达量占菌体总蛋白的 37 4 9%。结论　本实验成功地异源表达了白纹伊蚊CYP6N3基因 ,为体外重建细胞色素P4 5 0CYP6N3单加氧酶系 。 展开更多

关键词 白纹伊蚊 细胞色素p450 CYp6N3基因 原核表达 T-A克隆测序

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版纳微型猪近交系细胞色素P450家族基因CYP1A1克隆及生物信息学分析

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作者 王淑燕 王配 +4 位作者 霍金龙 查星琴 潘伟荣 张霞 王雪飞 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第3期442-449,共8页

【目的】克隆版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)细胞色素P450家族基因CYP1A1的编码区序列,并对其进行生物信息学分析。【方法】利用RT-PCR方法获得CYP1A1基因的全长CDS序列,运用生物信息学对其核酸及蛋白序列进行分析,... 【目的】克隆版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)细胞色素P450家族基因CYP1A1的编码区序列,并对其进行生物信息学分析。【方法】利用RT-PCR方法获得CYP1A1基因的全长CDS序列,运用生物信息学对其核酸及蛋白序列进行分析,构建系统进化树。【结果】获得的BMI CYP1A1 CDS长度为1551 bp,编码516个氨基酸,蛋白质分子量为58.39 ku,等电点为7.83,位于内质网的概率是94.1%。CYP1A1蛋白质含有1个细胞色素P450半胱氨酸血红素配体位点,1个N-豆蔻酰化位点,1个酰胺化作用位点,2个N-糖基化位点、6个蛋白酶C磷酸化位点和5个蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点。11个物种构建的系统进化分析表明,BMI(猪)CYP1A1与牛和山羊的关系最近。【结论】以上结果将为进一步研究版纳微型猪近交系CYP1A1基因功能奠定基础。 展开更多

关键词 细胞色素p450家族 CYpIAI基因 编码区序列 版纳微型猪近交系 生物信息学 药物代谢

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第208位异亮氨酸对人细胞色素P4502A6尼古丁代谢活性的影响

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作者 何晓阳 王守林 +2 位作者 徐旭 Clifford WEISEL 洪钧言 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期464-471,共8页

目的探讨人体尼古丁主要代谢酶细胞色素P450(CYP)2A6及其同族成员CYP2A13肽链结构中,影响其尼古丁5′-羟化代谢活性的关键性氨基酸残基。方法使用前期制备的CYP2A6和CYP2A13系列氨基酸互换突变体:CYP2A6V117A,CYP2A6G164H,CYP2A6I208S,C... 目的探讨人体尼古丁主要代谢酶细胞色素P450(CYP)2A6及其同族成员CYP2A13肽链结构中,影响其尼古丁5′-羟化代谢活性的关键性氨基酸残基。方法使用前期制备的CYP2A6和CYP2A13系列氨基酸互换突变体:CYP2A6V117A,CYP2A6G164H,CYP2A6I208S,CYP2A6R372H和CYP2A6S465P以及CYP2A13A117V,CYP2A13H164G,CYP2A13S208I,CYP2A13H372R和CYP2A13P465S,比较其与相应野生蛋白酶的尼古丁5′-羟化催化反应的动力学参数。结果各突变体对2个CYP2A蛋白酶的尼古丁代谢活性影响不同。对于CYP2A6,I208S突变对酶活性的影响显著,导致表观反应常数Km及最大反应速度Vmax由野生型62.25μmol.L-1和6.53mol.min-1.mol-1变化为345μmol.L-1和2.19mol.min-1.mol-1,但该位点对CYP2A13酶活性无显著影响;对于CYP2A13,H372R突变对酶活性的影响最为显著,导致Km及Vmax由野生型的26.01μmol.L-1和24.51mol.min-1.mol-1变为148.7μmol.L-1和6.11mol.min-1.mol-1,此位点对CYP2A6无显著影响。其他位点突变对酶活性影响较小或不显著。结论CYP2A家族蛋白中,I208与H372分别是影响CYP2A6和CYP2A13对尼古丁代谢的关键残基。对于同家族蛋白酶而言,关键性氨基酸的作用并不总是一一对应。 展开更多

关键词 细胞色素p450 CYp2A6 细胞色素p450 CYp2A13 尼古丁

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棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6基因启动子活性检测条件的优化

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作者 李芬 刘小宁 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期167-172,共6页

旨在用阳离子脂质体介导携带有pGL3-Basic报告基因的棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6启动子pGL-CYP6B6-promoter重组质粒转染Sf9细胞,对启动子活性的检测条件进行优化。将长度为999 bp的棉铃虫CYP6B6基因启动子亚克隆至荧光素酶报告载体pGL3-... 旨在用阳离子脂质体介导携带有pGL3-Basic报告基因的棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6启动子pGL-CYP6B6-promoter重组质粒转染Sf9细胞,对启动子活性的检测条件进行优化。将长度为999 bp的棉铃虫CYP6B6基因启动子亚克隆至荧光素酶报告载体pGL3-Basic上,提取无细胞内毒素的质粒,转染处于对数生长期的昆虫细胞Sf9,通过检测荧光素酶的表达量验证启动子的活性。对转染后的检测时间、加入转染质粒的量,转染质粒与内对照质粒pRL-TK的比例分别进行了优化,进而确定检测的最优条件。结果表明,转染后的最适检测时间为24 h,转染质粒的最适用量为3.2μg,报告质粒与内对照质粒用量的比例为10 1时转染效率最高。 展开更多

关键词 细胞色素p450 CYp6B6基因启动子 SF9细胞 脂质体 转染 活性检测

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细胞色素P450基因AsCYP6Z2在中华按蚊溴氰菊酯抗性维持中的作用 被引量：2

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作者 韩宝珠 车林茸 +3 位作者 陈晓洁 闫振天 乔梁 陈斌 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期961-972,共12页

【目的】探究细胞色素P450基因AsCYP6Z2是否与中华按蚊Anopheles sinensis抗拟除虫菊酯有关。【方法】克隆中华按蚊AsCYP6Z2基因的编码区。采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测该基因在中华按蚊溴氰菊酯敏感品系(WX-... 【目的】探究细胞色素P450基因AsCYP6Z2是否与中华按蚊Anopheles sinensis抗拟除虫菊酯有关。【方法】克隆中华按蚊AsCYP6Z2基因的编码区。采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测该基因在中华按蚊溴氰菊酯敏感品系(WX-LS)和抗性品系(YN-LR)雌蚊不同发育阶段的表达和在敏感品系雌蛹不同组织中的表达。雌蛹腹部后端分别在25 mg/mL溴氰菊酯溶液和纯丙酮溶液(对照)中体外培养后,采用qPCR检测AsCYP6Z2在溴氰菊酯处理组和丙酮对照组中的表达差异。于化蛹后10 h分别注射ds AsCYP6Z2(RNAi组)和ds EGFP(对照组),采用qPCR检测AsCYP6Z2在RNAi组和对照组中的表达差异;采用生物测定方法测定RNAi组和对照组中雌成蚊接触0.05%溴氰菊酯药膜1 h内的击倒率及雌成蚊接触0.05%溴氰菊酯药膜1 h并恢复24 h时的死亡率。通过分子对接预测该基因与溴氰菊酯相互作用的氨基酸残基。【结果】克隆获得了AsCYP6Z2基因(GenBank登录号:MT840336)的编码区,其开放阅读框(ORF)长1251 bp,编码416个氨基酸,无信号肽和跨膜结构域。发育表达谱表明,AsCYP6Z2基因主要在化蛹30 h至成蚊3 h期间高表达,且抗性品系的基因表达量明显高于敏感品系的;组织表达谱显示该基因在腹部后端的表达量较高,其次是在腹部前端和胸部,在头部的表达量最低。雌蛹腹部后端在25 mg/mL溴氰菊酯溶液中培养12 h和24 h后,处理组中AsCYP6Z2的表达量相比于对照组(纯丙酮培养组)分别上调4倍和13倍。RNAi干扰AsCYP6Z2后,RNAi组中AsCYP6Z2基因的表达量相较于对照组(ds EGFP注射组)下调了约80%。雌成蚊接触0.05%溴氰菊酯药膜1 h后,RNAi组中的个体比对照组中的约提前20 min出现明显的击倒现象,且击倒率明显高于对照组;雌成蚊接触0.05%溴氰菊酯药膜1 h并恢复24 h后,RNAi组中的个体死亡率相比对照组增加了17%,表明沉默AsCYP6Z2基因导致蚊虫对溴氰菊酯的敏感度显著增加。溴氰菊酯与AsCYP6Z2预测蛋白的分子对接研究结果显示,溴氰菊酯可以进入AsCYP6Z2蛋白的结合口袋,并且与Cys-155形成Pi-硫相互作用以及产生较稳定的氢键,侧链也可与AsCYP6Z2的Ala-165,Val-72,Leu-76,Leu-82和Ala-24等氨基酸残基形成稳定的疏水相互作用网络。【结论】研究结果表明AsCYP6Z2基因参与中华按蚊溴氰菊酯抗性表型的维持,这为进一步探究该基因在拟除虫菊酯类杀虫剂代谢过程中的分子机理奠定了前期基础。 展开更多

关键词 中华按蚊 溴氰菊酯抗性 细胞色素p450 AsCYp6Z2 诱导表达 RNAI 分子对接

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烟碱对4-(N-甲基-亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮和N′-亚硝基去甲烟碱体外细胞色素P4502A13酶促代谢反应的抑制作用 被引量：2

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作者 刘蔚 李椿方 石全波 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期797-804,共8页

目的研究烟碱对4-(N-甲基-亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)和N-亚硝基去甲烟碱(NNN)的体外代谢激活是否产生抑制作用。方法分别以NNK和NNN为底物,采用体外重组酶细胞色素P450酶(CYP450)2A13体系进行孵育,以HPLC-MS-MS检测NNK和NNN及... 目的研究烟碱对4-(N-甲基-亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)和N-亚硝基去甲烟碱(NNN)的体外代谢激活是否产生抑制作用。方法分别以NNK和NNN为底物,采用体外重组酶细胞色素P450酶(CYP450)2A13体系进行孵育,以HPLC-MS-MS检测NNK和NNN及其代谢产物,建立体外孵育NNK和NNN的酶促反应动力学曲线,分析烟碱对其酶促动力学参数的影响。结果 CYP4502A13酶催化NNK生成4-羰基-4-(3-吡啶基)-丁醛(OPB),4-羟基-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(HPB)和4-羰基-4-(3-吡啶基)-氧代丁酸(OPBA),该酶催化NNN生成HPB,OPB和4-羟基-4-(3-吡啶基)-氧代丁酸(HA)。烟碱加入NNK反应液中,生成OPB,HPB和OPBA的Km值分别增加到7.4,13.1和11.0μmol·L^(-1),Vmax值保持不变。烟碱加入NNN反应液中,生成HPB,HA和OPB的Km值分别增加到35.46,16.51和28.19μmol·L^(-1),Vmax值保持不变。结论烟碱对CYP4502A13酶催化NNK和NNN的代谢反应具有竞争性抑制作用。 展开更多

关键词 4-(N-甲基-亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮 N-亚硝基去甲烟碱 烟碱 细胞色素p450酶 代谢

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