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细胞色素P450 CYP2E1酶构型特征及其表达调控机制的研究进展 被引量:26
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作者 刘晨晖 乐江 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期155-160,共6页
细胞色素P450CYP2E1酶参与代谢活化及失活多种前毒物、前致癌物和少数药物。在细胞色素P450超家族中,CYP2E1具有易介导自由基生成引发氧化应激反应的特征。CYP2E1表达水平可能是机体对环境和工业毒物或致癌物敏感程度的重要因素。研究表... 细胞色素P450CYP2E1酶参与代谢活化及失活多种前毒物、前致癌物和少数药物。在细胞色素P450超家族中,CYP2E1具有易介导自由基生成引发氧化应激反应的特征。CYP2E1表达水平可能是机体对环境和工业毒物或致癌物敏感程度的重要因素。研究表明,CYP2E1可被多种内、外源性物质所调控,并且CYP2E1的药理和毒理学功能与其以蛋白构型为基础的代谢行为密切相关。本文综述了CYP2E1基因多态性、酶构型特征与其代谢活性间的关系,并分析了其区别于其他细胞色素P450亚型的表达调控机制。 展开更多
关键词 细胞色素p450 cyp2E1 蛋白质结构 二级 基因表达调控 自由基
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肝癌组织CYP2W1、miR-491-5p表达与临床病理特征的关系和预后的相关性分析
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作者 张伟 杨茹 +1 位作者 宋军 钱叶本 《中国微创外科杂志》 北大核心 2025年第10期584-589,共6页
目的探讨细胞色素P450酶2W1(cytochrome P450 family 2 subfamily W member 1,CYP2W1)、微小RNA-491-5p(microRNA-491-5p,miR-491-5p)在肝细胞癌(hepatocellular cancer,HCC)组织中的表达与临床病理特征的关系和预后的相关性分析。方法... 目的探讨细胞色素P450酶2W1(cytochrome P450 family 2 subfamily W member 1,CYP2W1)、微小RNA-491-5p(microRNA-491-5p,miR-491-5p)在肝细胞癌(hepatocellular cancer,HCC)组织中的表达与临床病理特征的关系和预后的相关性分析。方法选取2019年2月~2021年2月在我院进行手术治疗的120例HCC作为研究对象,手术过程中取HCC组织和癌旁组织标本。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测mRNA表达水平,免疫组化法检测蛋白表达水平。分析HCC组织和癌旁组织中miR-491-5p与CYP2W1 mRNA表达的差异及二者表达与患者临床病理特征的相关性,并做Kaplan-Meier生存分析曲线。结果HCC组织中CYP2W1 mRNA表达水平显著高于癌旁组织,miR-491-5p表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05);HCC组织中CYP2W1蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织(χ^(2)=23.721,P<0.001)。HCC组织中miR-491-5p与CYP2W1 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.417,P<0.001)。CYP2W1、miR-491-5p表达与HCC患者TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移和病理分级存在显著相关性(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析曲线显示,CYP2W1阳性表达组3年累积生存率为31.4%,低于CYP2W1阴性表达组的63.8%(log-rankχ^(2)=12.243,P=0.000);miR-491-5p高表达组3年累积生存率为61.3%,显著高于miR-491-5p低表达组的37.9%(log-rankχ^(2)=4.490,P=0.034)。复发组HCC组织中CYP2W1 mRNA表达水平显著高于未复发组,miR-491-5p表达水平显著低于未复发组(P<0.05);转移组HCC组织中CYP2W1 mRNA表达水平显著高于未转移组,miR-491-5p表达水平显著低于未转移组(P<0.05)。结论HCC组织中CYP2W1高表达,miR-491-5p低表达,二者与HCC患者的部分临床病理特征和预后存在显著相关性。 展开更多
关键词 细胞色素p4502W1 微小RNA-491-5p 细胞
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锰中毒对鸡肝脏细胞色素P450酶系及CYP2H1 mRNA转录水平的影响 被引量:1
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作者 唐洪鹏 毕明玉 +3 位作者 陈蕾 张雯 于宪一 徐世文 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期214-219,共6页
本研究旨在探讨锰对公鸡肝脏细胞色素P450酶系的影响。50日龄海兰褐公鸡400只,随机分为4组,分别在饲料中添加0、600、900、1 800 mg.kg-1MnCl2建立亚慢性锰中毒模型,于30、60、90 d采取肝脏检测肝微粒体细胞色素P450酶系活性以及CYP2H1... 本研究旨在探讨锰对公鸡肝脏细胞色素P450酶系的影响。50日龄海兰褐公鸡400只,随机分为4组,分别在饲料中添加0、600、900、1 800 mg.kg-1MnCl2建立亚慢性锰中毒模型,于30、60、90 d采取肝脏检测肝微粒体细胞色素P450酶系活性以及CYP2H1基因转录水平的变化。结果显示,细胞色素P450、b5含量,氨基吡啉-N-脱甲基酶(AND)和苯胺-4-羟化酶(AH)活性在各个时间点随染锰剂量的增加,基本呈降低趋势,且高剂量组均极显著(P<0.01)低于正常组,低、中剂量组有高于正常组的情况。NADPH-细胞色素C还原酶(CR)和红霉素-N-脱甲基酶(ERND)的活性的变化规律不明显,30和60 d NADPH-细胞色素C还原酶活性呈降低趋势,而90 d时呈升高趋势,且高剂量组极显著(P<0.01)高于正常组。红霉素-N-脱甲基酶在30 d时呈升高趋势,60和90 d时呈波动性降低变化,且高剂量组均极显著(P<0.01)低于正常组。在各个时间点,CYP2H1 mRNA的转录水平除30 d低、高剂量组,60 d中剂量组,90 d低剂量组高于正常组外,其他组均低于正常组。结果提示,锰中毒可影响鸡肝脏细胞色素P450酶系以及CYP2H1 mRNA的转录水平。 展开更多
关键词 锰中毒 肝脏 细胞色素p450 cyp2H1基因
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SM-1对人肝微粒体细胞色素P450亚型酶的抑制作用 被引量:3
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作者 陈燕芬 陈景秀 +5 位作者 孙萌 丁俊垚 程泽能 胡高云 丁劲松 朱曲波 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期627-629,共3页
目的观察SM-1对人肝细胞色素P450酶系统中7种亚型酶活性的影响。方法在体外将一定浓度的底物或SM-1与人肝微粒体孵育30 min,分为对照组(底物)和实验组(底物和SM-1),以非那西丁、安非他酮、紫杉醇、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、右美沙芬、睾酮... 目的观察SM-1对人肝细胞色素P450酶系统中7种亚型酶活性的影响。方法在体外将一定浓度的底物或SM-1与人肝微粒体孵育30 min,分为对照组(底物)和实验组(底物和SM-1),以非那西丁、安非他酮、紫杉醇、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、右美沙芬、睾酮为CYP探针底物,应用HPLC法检测各探针底物代谢量,计算抑制率,评价SM-1对人肝微粒体CYP1A2、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6、3A4酶的抑制活性。结果 SM-1对CYP1A2、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6、3A4的抑制率分别是0.05%、3.37%、0.08%、2.07%、4.20%、-0.15%和10.84%。结论 SM-1对CYP3A4可能有抑制作用,临床用药时应注意因CYP酶抑制引起的药物相互作用。 展开更多
关键词 SM-1 细胞色素p450 底物 抑制率 肝微粒体
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酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4、1A2活性的作用 被引量:13
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作者 杨贵忠 袁野 +2 位作者 周岐新 杨俊卿 刘颖菊 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1634-1635,1639,共3页
目的观察酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4、1A2活性的作用,为临床上安全有效地联合用药提供实验依据。方法采用健康成人肝细胞微粒体,分为对照组和处理组。酮康唑处理组分别加入不同浓度的酮康唑1 ml,对照组仅加入... 目的观察酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4、1A2活性的作用,为临床上安全有效地联合用药提供实验依据。方法采用健康成人肝细胞微粒体,分为对照组和处理组。酮康唑处理组分别加入不同浓度的酮康唑1 ml,对照组仅加入培养液,孵育15 min后再加入CYP450同工酶3A4和1A2的相应底物(分别为睾酮和非那西丁)再孵育20 min。反应终止后用高效液相色谱仪测量代谢产物(分别为6β-羟基睾酮与对乙酰氨基酚)的生成量,分别代表3A4和1A2的活性。结果细胞色素P450同工酶3A4的相对活性百分比减小到对照组50%时(IC50)酮康唑的质量浓度为0.16 mg/L。而同工酶3A4的相对活性百分比随质量浓度酮康唑增加逐渐减小,各处理组与对照组比较差异均有显著性意义(P<0.05)。低剂量细胞色素P450同工酶1A2的相对活性百分比处理组与对照组比较明显降低(P<0.05),高剂量细胞色素P450同工酶1A2的相对活性百分比处理组与对照组比较则明显升高(P<0.05)。结论酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4的活性有抑制作用,然而对细胞色素P450同工酶1A2的活性则是低剂量有抑制作用,而高剂量有诱导作用。 展开更多
关键词 酮康唑 健康成人肝细胞微粒体 cyp3A4 cyp1a2 细胞色素p450
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烟碱对4-(N-甲基-亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮和N′-亚硝基去甲烟碱体外细胞色素P4502A13酶促代谢反应的抑制作用 被引量:2
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作者 刘蔚 李椿方 石全波 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期797-804,共8页
目的研究烟碱对4-(N-甲基-亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)和N-亚硝基去甲烟碱(NNN)的体外代谢激活是否产生抑制作用。方法分别以NNK和NNN为底物,采用体外重组酶细胞色素P450酶(CYP450)2A13体系进行孵育,以HPLC-MS-MS检测NNK和NNN及... 目的研究烟碱对4-(N-甲基-亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)和N-亚硝基去甲烟碱(NNN)的体外代谢激活是否产生抑制作用。方法分别以NNK和NNN为底物,采用体外重组酶细胞色素P450酶(CYP450)2A13体系进行孵育,以HPLC-MS-MS检测NNK和NNN及其代谢产物,建立体外孵育NNK和NNN的酶促反应动力学曲线,分析烟碱对其酶促动力学参数的影响。结果 CYP4502A13酶催化NNK生成4-羰基-4-(3-吡啶基)-丁醛(OPB),4-羟基-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(HPB)和4-羰基-4-(3-吡啶基)-氧代丁酸(OPBA),该酶催化NNN生成HPB,OPB和4-羟基-4-(3-吡啶基)-氧代丁酸(HA)。烟碱加入NNK反应液中,生成OPB,HPB和OPBA的Km值分别增加到7.4,13.1和11.0μmol·L^(-1),Vmax值保持不变。烟碱加入NNN反应液中,生成HPB,HA和OPB的Km值分别增加到35.46,16.51和28.19μmol·L^(-1),Vmax值保持不变。结论烟碱对CYP4502A13酶催化NNK和NNN的代谢反应具有竞争性抑制作用。 展开更多
关键词 4-(N-甲基-硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮 N-硝基去甲烟碱 烟碱 细胞色素p450 代谢
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酒精性肝损伤大鼠细胞色素P450 CYP2E1和细胞色素P450 CYP3A的代谢活性 被引量:10
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作者 康晓琳 薛永志 +1 位作者 武润生 刘和莉 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期286-290,共5页
目的观察酒精性肝损伤对大鼠细胞色素P450CYP3A(CYP3A)和细胞色素P450CYP2E1(CYP2E1)代谢活性的影响。方法采用ig给予白酒制备大鼠酒精性肝损伤模型,检测血清中谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性,采用HE染色法光镜下观测酒精对肝脏... 目的观察酒精性肝损伤对大鼠细胞色素P450CYP3A(CYP3A)和细胞色素P450CYP2E1(CYP2E1)代谢活性的影响。方法采用ig给予白酒制备大鼠酒精性肝损伤模型,检测血清中谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性,采用HE染色法光镜下观测酒精对肝脏损伤程度。大鼠ip给予CYP3A探针药物咪达唑仑10mg·kg-1或ig给予CYP2E1探针药物氯唑沙宗50mg·kg-1后,采用高效液相色谱法测定不同时间点大鼠血浆中咪达唑仑和氯唑沙宗的血药浓度,并应用3P87软件计算其药代动力学参数,以考察CYP2E1和CYP3A的代谢活性的变化。大鼠ig给予氯唑沙宗80mg·kg-1后,热板方法测定大鼠添足次数和添足反射潜伏期。结果酒精性肝损伤可致大鼠肝小叶结构不清,肝索排列紊乱,肝细胞体积增大,呈弥漫性中度水变性,肝窦受压,大部分肝细胞胞浆内见大小不等的脂肪空泡;与正常对照组相比,酒精性肝损伤组大鼠GPT和GOT活性分别增加了16.0%和20.0%(P<0.05,P<0.01)。酒精性肝损伤致大鼠CYP2E1对探针药物氯唑沙宗的代谢活性增强,AUC,t1/2和cmax分别降低了38.0%,30.5%和35.0%(P<0.05);酒精肝损伤组大鼠氯唑沙宗镇痛效果明显降低;酒精性肝损伤致大鼠CYP3A对探针药物咪达唑仑的代谢活性增强,AUC,t1/2和cmax分别降低了122.6%,54.9%和56.9%(P<0.01,P<0.05)。结论酒精性肝损伤可使大鼠CYP2E1和CYP3A代谢活性增强。 展开更多
关键词 酒精性肝疾病 细胞色素p450 cyp2E1 细胞色素p450 cyp3A
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细胞色素P450新家族的第一个基因CYP337A1的分子克隆与序列分析 被引量:6
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作者 艾均文 董元凌 +5 位作者 孔卫青 杨金宏 张学松 柳照应 张永亮 朱勇 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期51-58,共8页
依据家蚕基因组数据,通过BLASTP比对,选择了主要与抗性相关的CYP3集团(clan)中具有完全编码框并含有P450基因特征结构域的1条序列为研究对象,用RT-PCR方法对其进行了克隆.结果表明,该基因ORF为1 467 bp,编码489个氨基酸,推定的蛋白质分... 依据家蚕基因组数据,通过BLASTP比对,选择了主要与抗性相关的CYP3集团(clan)中具有完全编码框并含有P450基因特征结构域的1条序列为研究对象,用RT-PCR方法对其进行了克隆.结果表明,该基因ORF为1 467 bp,编码489个氨基酸,推定的蛋白质分子质量为56.60 KDa,等电点为8.64.只有1个内含子,外显子/内含子边界处符合GT-AG规则.与美国棉铃虫的CYP321A、邪恶按蚊的CYP6P9的相似性(identity)相对较高,分别为34%、32%,低于同一家族成员氨基酸相似性应高于40%的规定,从而被细胞色素P450委员会命名为新家族的第一个基因CYP337A1(GenBank登陆号:EF415297). 展开更多
关键词 细胞色素p450 cyp337a1 基因克隆 序列分析 家蚕
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吸烟和细胞色素P4501A1-MspⅠ、谷胱甘肽硫转移酶T1基因多态性与口腔癌的相关性研究 被引量:9
9
作者 郭李柯 张超贤 +1 位作者 史淑敏 郭晓凤 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期187-191,共5页
目的探讨吸烟和细胞色素P450(CYP)1A1-MspⅠ、谷胱甘肽硫转移酶(GST)T1基因多态性与口腔癌发病之间的关系。方法采用病例-对照研究的方法,以300例口腔癌患者(病例组)及300例非癌对照者(对照组)的外周血白细胞为样本,利用聚合酶... 目的探讨吸烟和细胞色素P450(CYP)1A1-MspⅠ、谷胱甘肽硫转移酶(GST)T1基因多态性与口腔癌发病之间的关系。方法采用病例-对照研究的方法,以300例口腔癌患者(病例组)及300例非癌对照者(对照组)的外周血白细胞为样本,利用聚合酶链反应(PCR)技术检测Ⅰ相代谢酶CYP1A1-MspⅠ和Ⅱ相代谢酶GSTT1基因多态性,并分析吸烟和2种代谢酶基因多态性与口腔癌的相关性。结果病例组CYP1A1-MspⅠ突变纯合型(m2/m2)和GSTT1基因缺陷型[GSTT1(-)]的频率分布分别为38.33%、69.33%,而对照组的频率分布分别为21.00%、44.33%,二者差异有统计学意义(P〈0.01)。CYP1A1-MspⅠ(m2/m2)者患口腔癌的风险显著增加(OR=2.34,95%CI为1.76~4.07)。GSTT1(-)者患口腔癌的风险也显著增加(OR=2.84,95%CI为1.98~4.54)。基因突变的协同分析发现CYP1A1-MspⅠ(m2/m2)/GSTT1(-)在病例组和对照组中的分布频率分别为30.67%和6.67%,二者差异有统计学意义(P〈0.01)。CYP1A1-MspⅠ(m2/m2)/GSTT1(-)者患口腔癌的风险显著增加(OR=8.27,95%CI为3.63~11.29)。病例组的吸烟率显著高于对照组的吸烟率(OR=2.71,95%CI为1.31~4.52,P〈0.01),CYP1A1-MspⅠ(m2/m2)及GSTT1(-)与吸烟有协同作用(OR=25.00,95%CI为11.87~35.64)。结论 CYP1A1-MspⅠ(m2/m2)和GSTT1(-)是口腔癌的易感因素,吸烟与口腔癌的易感性也有关,CYP1A1-MspⅠ(m2/m2)和GSTT1(-)与吸烟在口腔癌的发生上有相互促进的作用。 展开更多
关键词 口腔癌 细胞色素p4501a1-Msp 谷胱甘肽硫转移T1 多态现象 吸烟
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乙醛脱氢酶2、细胞色素P4502E1-RsaI基因多态性和饮酒与口腔鳞状细胞癌发病风险的关系 被引量:10
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作者 郭李柯 张超贤 郭晓凤 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期390-395,共6页
目的探讨乙醛脱氢酶2(ALDH2)、细胞色素P4502E1-RsaI(CYP2E1-RsaI)基因多态性和饮酒与口腔鳞状细胞癌(OSCC)发病之间的关系。方法采用病例-对照研究方法,以320例OSCC患者及320名健康体检者的外周血白细胞为样本,应用聚合酶链反应(PCR)... 目的探讨乙醛脱氢酶2(ALDH2)、细胞色素P4502E1-RsaI(CYP2E1-RsaI)基因多态性和饮酒与口腔鳞状细胞癌(OSCC)发病之间的关系。方法采用病例-对照研究方法,以320例OSCC患者及320名健康体检者的外周血白细胞为样本,应用聚合酶链反应(PCR)技术分析ALDH2和CYP2E1-RsaI基因多态性。结果 ALDH2变异基因型和CYP2E1-RsaI突变纯合型(c2/c2)频率分布在OSCC组分别为70.94%和39.06%,在对照组分别为43.44%和20.62%,差异均有统计学意义(P均<0.01)。ALDH2变异基因型(OR=3.178,95%CI=1.917~4.749)和CYP2E1-RsaI(c2/c2)者(OR=2.467,95%CI=1.783~4.045)患OSCC的风险均显著增加。基因突变协同分析发现,ALDH2变异基因型/CYP2E1-RsaI(c2/c2)在OSCC和对照组的分布频率分别为32.19%和6.25%,差异有统计学意义(P<0.01)。ALDH2变异基因型/CYP2E1-RsaI(c2/c2)患OSCC的风险显著增加(OR=9.792,95%CI=3.583~12.472)。OSCC组的饮酒率显著高于对照组(OR=2.861,95%CI=1.541~4.781,P<0.01),ALDH2变异基因型及CYP2E1-RsaI(c2/c2)与饮酒有协同作用(OR=41.152,95%CI=19.903~67.551)。结论 ALDH2和CYP2E1-RsaI基因多态性和饮酒均是OSCC的易患因素,基因和饮酒的协同作用可明显提高OSCC的发病风险。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞 乙醛脱氢2 细胞色素p4502E1-RsaI 多态性 饮酒
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CYP27A1对肝细胞癌预后的影响及生物学作用 被引量:3
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作者 张昕彤 吴昊 +5 位作者 胡艳芬 张文桃 畅靖嘉 朱剑军 李莉 刘铭 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期387-395,共9页
目的分析细胞色素P450家族27亚家族A成员1(CYP27A1)对肝细胞癌(HCC)预后的影响及生物学作用,并初步探讨其影响HCC生长的分子机制。方法基于癌症基因数据库(TCGA)分析CYP27A1在HCC中的表达情况及其与HCC患者预后的关系;基于CYP27A1表达... 目的分析细胞色素P450家族27亚家族A成员1(CYP27A1)对肝细胞癌(HCC)预后的影响及生物学作用,并初步探讨其影响HCC生长的分子机制。方法基于癌症基因数据库(TCGA)分析CYP27A1在HCC中的表达情况及其与HCC患者预后的关系;基于CYP27A1表达量中位值,将样本分为CYP27A1高表达组(n=170)与CYP27A1低表达组(n=170),利用基因集富集分析(GSEA)分别对两组进行基因集富集分析;免疫荧光染色检测及数据库查找CYP27A1蛋白亚细胞定位;构建过表达CYP27A1质粒,转染HCC细胞MHCC-97H和HCCLM3,设置阴性对照组(转染空载质粒)与CYP27A1过表达组(转染过表达CYP27A1重组质粒)。采用CCK-8法、流式细胞仪、活性氧(ROS)荧光探针等检测过表达CYP27A1对HCC细胞活力、凋亡及ROS生成的影响;结合生物信息学分析CYP27A1与ROS生成相关基因及HCC增殖相关基因表达的相关性。结果与正常肝组织比较,HCC组织中CYP27A1 mRNA表达量明显降低(P<0.01)。CYP27A1表达与HCC患者性别、T分期、肿瘤分级和肿瘤分期有关(P<0.05)。CYP27A1低表达组总生存率明显低于高表达组(P<0.01)。GSEA富集分析结果显示,CYP27A1低表达组HCC“干性”亚类和“增殖”亚类基因集水平升高。在MHCC-97H和HCCLM3细胞中,CYP27A1主要定位于细胞核;在HepG2细胞中,CYP27A1主要定位于线粒体。与阴性对照组比较,过表达CYP27A1后,HCC细胞活力下降(P<0.01)、ROS水平降低(P<0.05),而细胞凋亡水平无明显改变(P>0.05)。CYP27A1与抑制ROS生成相关基因表达呈正相关(P<0.05),抑制ROS生成相关基因与HCC增殖相关基因表达呈负相关(P<0.05)。结论CYP27A1在HCC中呈低表达,下调CYP27A1可能通过促进ROS生成促进HCC恶性生长。 展开更多
关键词 细胞 细胞色素p450家族27家族A成员1 恶性生长
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家蚕细胞色素P450 CYP337A1的原核表达 被引量:1
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作者 董元凌 艾均文 +3 位作者 柳照应 张湖静 李傲祥 朱勇 《中国蚕业》 2008年第2期20-22,26,共4页
以含有CYP337A1基因完全编码框的克隆载体质粒DNA为模板进行PCR扩增,产物经TA克隆测序鉴定后,亚克隆至原核融合表达载体PET50(b)(含有编码64.3 kD的Nus.Tag蛋白标签)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达。利用SDS-PAGE方法,以空载和... 以含有CYP337A1基因完全编码框的克隆载体质粒DNA为模板进行PCR扩增,产物经TA克隆测序鉴定后,亚克隆至原核融合表达载体PET50(b)(含有编码64.3 kD的Nus.Tag蛋白标签)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达。利用SDS-PAGE方法,以空载和未诱导菌体作对照,对细菌总蛋白进行电泳分析,结果表明:经1mmol/L IPTG诱导2h后,即能看到1条大约120 kD的蛋白质特异带,与预计大小一致。进一步利用不同时间、不同温度以及不同浓度的IPTG进行诱导结果比较,发现在诱导时间为2h,温度为32℃,IPTG浓度为0.6 mmol/L的诱导条件下,融合蛋白表达量最大。该实验为利用该基因的蛋白产物进行功能分析创造了条件。 展开更多
关键词 家蚕 细胞色素p450 cyp337a1 原核表达
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细胞色素氧化酶P4504B1基因突变与膀胱癌遗传易感性的关系
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作者 蒋欣 宋东奎 张莉蓉 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2015年第1期82-85,共4页
目的:探讨细胞色素氧化酶P450(CYP)4B1基因突变与膀胱癌遗传易感性的关系。方法:应用PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析和直接测序分析,分别检测152例膀胱癌患者和150例非肿瘤同期住院患者CYP4B1的各个常见突变基因位点,分析基因突变对... 目的:探讨细胞色素氧化酶P450(CYP)4B1基因突变与膀胱癌遗传易感性的关系。方法:应用PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析和直接测序分析,分别检测152例膀胱癌患者和150例非肿瘤同期住院患者CYP4B1的各个常见突变基因位点,分析基因突变对膀胱癌发病的影响。结果:膀胱癌组CYP4B1 C517T、AT881-882del+G993A+C1018T和C1123T突变基因型频率高于对照组(χ2=8.266、16.218和15.347,P<0.05);不同病理分级及临床分期膀胱癌患者间CYP4B1各突变基因型频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:携带CYP4B1C517T、AT881-882del+G993A+C1018T和C1123T突变基因型者更易患膀胱肿瘤。 展开更多
关键词 膀胱癌 细胞色素氧化p450 4B1 基因突变
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家蚕细胞色素P450基因CYP18A1的克隆与RNA干涉载体的获得
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作者 孔卫青 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第4期44-46,共3页
根据GenBank已登录细胞色素P450CYP18A1基因的序列设计引物,用RT-PCR方法克隆了AK1蚕的CYP18A1基因,并对基因序列进行了分析,研究了基因的表达。并将该基因亚克隆至L4440载体,为基因功能的研究奠定了基础。
关键词 桑蚕 细胞色素p450 cyp18a1基因 克隆
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昆明种小鼠细胞色素氧化酶CYP1A基因表达的昼夜节律变化 被引量:3
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作者 金涛 张丹 +3 位作者 徐懿乔 徐尚福 刘杰 陆远富 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期406-410,共5页
目的探究昆明种小鼠细胞色素氧化酶1A1(CYP1A1)的昼夜节律、性别差异以及对肝毒物毒性变化的影响。方法昆明小鼠在环境控制的SPF饲养室内适应性饲养2周后,于06:00,10:00,14:00,18:00,22:00和次日02:00处死取肝,用逆转录PCR方法检测24h... 目的探究昆明种小鼠细胞色素氧化酶1A1(CYP1A1)的昼夜节律、性别差异以及对肝毒物毒性变化的影响。方法昆明小鼠在环境控制的SPF饲养室内适应性饲养2周后,于06:00,10:00,14:00,18:00,22:00和次日02:00处死取肝,用逆转录PCR方法检测24h内核激素孤儿受体α(Rev-erbα),时钟基因(Per)1,Per2和CYP1A1,CYP1A2及其调控核受体基因AhR的表达。另取小鼠于6:00和18:00 ip给予对乙酰氨基酚500mg·kg-1,12h后检测血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)活性。结果细胞色素氧化酶基因CYP1A1,CYP1A2及其调节基因AhR在18:00左右表达最高,且雌鼠的表达高于雄鼠,在6:00左右表达最低,表达峰谷差为4~7倍,其节律变化的差异与Rev-erbα,Per1,Per2的节律差异大致相符。与此节律相对应,对乙酰氨基酚引起的肝毒性在18:00给药高于6:00给药。结论昆明种小鼠细胞色素氧化酶CYP1A1基因表达存在昼夜节律及性别差异,该差异可影响肝毒物如对乙酰氨基酚的代谢和毒性。 展开更多
关键词 细胞色素p450 cyp1a1 昼夜节律 性别特性 基因表达
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地非三唑对大鼠肝细胞细胞色素P450 CYP1A1/2的诱导作用 被引量:2
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作者 陈琳 阮昊 姚彤炜 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期501-504,共4页
目的试从mRNA表达水平阐明地非三唑对鼠肝微粒体中细胞色素P450 CYP1A1/2的诱导机制。方法给SD大鼠腹腔注射地非三唑,采用Tr-izol法提取大鼠肝脏RNA,用RT-PCR测定经地非三唑处理1,2及4d的鼠肝中细胞色素P450 CYP1A1,CYP1A2 mRNA的表达... 目的试从mRNA表达水平阐明地非三唑对鼠肝微粒体中细胞色素P450 CYP1A1/2的诱导机制。方法给SD大鼠腹腔注射地非三唑,采用Tr-izol法提取大鼠肝脏RNA,用RT-PCR测定经地非三唑处理1,2及4d的鼠肝中细胞色素P450 CYP1A1,CYP1A2 mRNA的表达水平。结果地非三唑处理不同时间的鼠肝细胞中细胞色素P450CYP1A1,CYP1A2 mRNA的表达水平比空白对照组明显增加,空白对照组CYP1A1吸光度比值为0.270±0.040,诱导1,2及4d的吸光度比值分别为0.343±0.055,0.417±0.045及0.603±0.083;空白对照组的CYP1A2吸光度比值为0.613±0.189,而诱导1,2及4d的吸光度比值分别为1.510±0.226,3.057±0.518及4.120±0.458。随着诱导时间的增加,细胞色素P450 CYP1A1及CYP1A2 mRNA的表达也逐步增加,诱导时间与表达水平之间存在一定的线性关系,相关系数分别为0.9984和0.9563。结论地非三唑对细胞色素P450 CYP1A1/2 mRNA表达具有诱导作用。 展开更多
关键词 地非三唑 细胞色素p450 cyp1a1 细胞 色素p450 cyp1a2
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野桑蚕细胞色素P450基因CYP9A20V1的克隆与序列分析 被引量:2
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作者 徐生才 赵华强 +1 位作者 李兵 沈卫德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期295-301,共7页
研究和比较家蚕与野桑蚕细胞色素P450基因的结构和功能,可从分子生化机制上探索家蚕对农药的抗性。基于此,利用RT-PCR方法从野桑蚕中肠组织中克隆了一个P450家族基因CYP9A20V1(GenBank登录号:FJ378716)。序列分析表明,该基因的开放阅读... 研究和比较家蚕与野桑蚕细胞色素P450基因的结构和功能,可从分子生化机制上探索家蚕对农药的抗性。基于此,利用RT-PCR方法从野桑蚕中肠组织中克隆了一个P450家族基因CYP9A20V1(GenBank登录号:FJ378716)。序列分析表明,该基因的开放阅读框(ORF)为l 596 bp,编码531个氨基酸,预测分子质量约61.4 kD,等电点8.1。在线Blast分析结果表明:野桑蚕CYP9A20V1基因与家蚕CYP9A20的同源关系最近,同源性达到98.7%;与棉铃虫CYP9A12基因的同源性也达到57.1%。根据已知的P450蛋白序列结构进行比较分析,野桑蚕CYP9A20V1与家蚕CYP9A20编码氨基酸序列在底物识别位点SRS1、SRS2、SRS4、SRS6区域完全相同,在SRS3和SRS5区域的同源性分别是88.9%和94.1%,推测这2个基因具有相同的底物识别能力;野桑蚕CYP9A20V1与棉铃虫CYP9A12在SRS1、SRS4、SRS5、SRS6区域的同源性分别为47.1%、88.2%、76.5%和60%,在底物识别区域的同源性较高。初步推测野桑蚕CYP9A20V1基因可能与抗除虫菊脂类农药有关。 展开更多
关键词 野桑蚕 细胞色素p450 cyp9A20V1基因 序列分析
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大鼠无肝状态下七氟醚代谢相关药酶细胞色素P450 2E1的表达 被引量:1
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作者 王燕 顾建腾 +1 位作者 陶国才 易斌 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期236-238,共3页
目的探讨七氟醚代谢相关药酶细胞色素P450 2E1(CYP2E1)在肝移植无肝期肝外组织的表达变化。方法 24只SD大鼠随机均分为无肝期30min组(A组)和60min组(B组)和对照组(C组),各组均吸入七氟醚麻醉。A和B组通过阻断肝门模拟肝移植无肝期,相应... 目的探讨七氟醚代谢相关药酶细胞色素P450 2E1(CYP2E1)在肝移植无肝期肝外组织的表达变化。方法 24只SD大鼠随机均分为无肝期30min组(A组)和60min组(B组)和对照组(C组),各组均吸入七氟醚麻醉。A和B组通过阻断肝门模拟肝移植无肝期,相应时间终点截取各组大鼠肝外组织(小肠、肺脏和肾脏),C组麻醉后直接处死,截取大鼠肝外组织(小肠、肺脏和肾脏)应用RT-PCR、Western blot和免疫组化检测七氟醚代谢相关药酶CYP 2E1在其中的表达。结果 A和B组肝外各组织中CYP2E1的表达显著强于C组(P<0.05);CYP2E1在小肠和肾脏的单一细胞中表达,而在肺脏的多种细胞中表达。结论大鼠无肝状态下,CYP 2E1在肝外器官组织中表达增多,可能促进七氟醚的肝外代谢;肺脏可能是最主要的肝外代谢器官。 展开更多
关键词 肝移植 七氟醚 细胞色素p450 2E1
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人类细胞色素P450 2E1酶在不同乙醇浓度下构象变化的分子动力学模拟(英文) 被引量:2
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作者 王衍 郑清川 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2226-2235,共10页
细胞色素P450(CYP)2E1家族酶是一种具有双重功能的单加氧酶,能够参与市场上6%药物的代谢而具有重要的作用.这类酶与酒精的消耗、糖尿病、肥胖症以及厌食症等密切相关,引起了广泛的研究兴趣.目前尚未见从原子水平上对这种酶在不同乙醇浓... 细胞色素P450(CYP)2E1家族酶是一种具有双重功能的单加氧酶,能够参与市场上6%药物的代谢而具有重要的作用.这类酶与酒精的消耗、糖尿病、肥胖症以及厌食症等密切相关,引起了广泛的研究兴趣.目前尚未见从原子水平上对这种酶在不同乙醇浓度下构象行为的研究.基于此,本文研究了花生四烯酸(AA)与CYP2E1复合物结构在不同乙醇浓度下构象与能量变化的特点.对于在不同乙醇浓度下AA与CYP2E1的复合物结构,采用分子动力学模拟结合自由能计算的方法进行研究.分子动力学模拟结果表明,His109和Lys243氨基酸残基对AA与CYP2E1的结合起到了至关重要的作用.当体系的乙醇浓度较高时,AA的结合能力有所下降,这种结合能力的下降是由于AA与CYP2E1之间氢键相互作用力的减弱所致.本研究对于AA与CYP2E1复合物结构在不同乙醇浓度下,AA分子与CYP2E1分子结合能力下降以及CYP2E1的构象变化给出了详细的解释.本研究工作得到的结论对于实验和理论研究均有重要意义,可为后续细胞色素P450酶类催化活性的研究提供理论支持. 展开更多
关键词 细胞色素p450 2E1 分子动力学模拟 结合自由能计算
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注射用丹参总酚酸(冻干)对人CYP450酶和P-糖蛋白体外抑制作用及对大鼠CYP1A2和CYP3A体内诱导作用(英文) 被引量:6
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作者 胡冰 段超慧 +4 位作者 岳洁浩 马英丽 周大铮 李德坤 叶正良 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期6-12,共7页
目的探讨注射用丹参总酚酸(冻干)(SLI)对人CYP450酶和P-糖蛋白体外抑制作用以及对大鼠CYP1A2和CYP3A体内诱导作用。方法①应用P450-GloTMCYP450检测试剂盒,通过化学发光法测定SLI和经典抑制剂对细胞色素P4501A2(CYP1A2),CYP2D6,CYP3A4,C... 目的探讨注射用丹参总酚酸(冻干)(SLI)对人CYP450酶和P-糖蛋白体外抑制作用以及对大鼠CYP1A2和CYP3A体内诱导作用。方法①应用P450-GloTMCYP450检测试剂盒,通过化学发光法测定SLI和经典抑制剂对细胞色素P4501A2(CYP1A2),CYP2D6,CYP3A4,CYP2C19和CYP2C9的IC50值,通过比较SLI和经典抑制剂对相应细胞色素P450亚型的IC50值来判断SLI对人CYP450酶的体外抑制作用。②Wistar大鼠分别iv给予SLI 3,10和30 mg·kg-1和诱导剂苯巴比妥钠20 mg·kg-1,采用探针底物法,通过比较代谢产物的生成速率来评价SLI对大鼠CYP1A2和CYP3A的诱导作用。③应用ATP酶检测试剂盒,通过化学发光法测定ATP酶活性来评价SLI是否为P-gp的底物或抑制剂。结果①CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6和CYP3A4抑制剂的IC50与SLI对其的IC50进行比较(CYP1A2:0.12μmol·L-1vs 840μmol·L-1;CYP2C9:3.362μmol·L-1vs 704μmol·L-1;CYP2C19:3.236μmol·L-1vs 306μmol·L-1;CYP2D6:0.117μmol·L-1vs 2660μmol·L-1;CYP3A4:0.078μmol·L-1vs 1780μmol·L-1)。②与空白对照组(86.4±6.3)nmol·g-1.min-1相比,SLI 3,10和30 mg·kg-1组CYP1A2活性分别为83.4±6.6,82.5±4.0和(83.4±6.6)nmol·g-1.min-1。与空白对照组(16.1±0.9)nmol·g-1.min-1比较,SLI 3,10和30 mg·kg-1组CYP3A活性分别为15.7±0.6,15.9±0.7和(15.9±1.0)nmol·g-1.min-1,无显著性差异。③以临床血药浓度为依据设计的一系列浓度的SLI 0.0002,0.0006,0.002,0.006,0.017,0.052,0.156和0.468 g.L-1的ATP酶活性分别与空白对照组进行比较(5.8,5.3,5.8,5.5,5.8,5.2,,5.8,5.3,vs 5.75μmol·g-1.min-1),无显著性差异。结论SLI临床给药剂量既不能体外抑制人CYP1A2,CYP2D6,CYP3A4,CYP2C19和CYP2C9酶活性,也不能诱导大鼠CYP1A2和CYP3A,同时也不是P-gp的体外抑制剂或底物。 展开更多
关键词 注射用丹参总酚酸(冻干) p-糖蛋白 细胞色素p450 cyp1a2 细胞色素p450cyp3A
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