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肠上皮细胞紧密连接模型的建立与验证 被引量：1
1
作者 陈婷 张娇 +3 位作者 王晓鸽 康楠 王凤云 唐旭东 《山东医药》 CAS 2022年第35期1-4,共4页
目的 体外分化Caco-2细胞建立肠上皮细胞紧密连接模型,并对其进行综合评价。方法 将融合至90%的Caco-2细胞以8×104/孔接种于Transwell 24孔培养板上,每孔基底侧加入MEM培养基600μL,顶侧加入细胞悬液100μL;接种后第1周隔日更换培... 目的 体外分化Caco-2细胞建立肠上皮细胞紧密连接模型,并对其进行综合评价。方法 将融合至90%的Caco-2细胞以8×104/孔接种于Transwell 24孔培养板上,每孔基底侧加入MEM培养基600μL,顶侧加入细胞悬液100μL;接种后第1周隔日更换培养液,第2周起每日更换培养液,直至培养第21天。细胞培养第3、5、7、15、19、21天,使用细胞电阻仪测定跨膜电阻(TER);细胞培养第5、15、21天,取细胞单层顶侧与基底侧培养基并检测其碱性磷酸酶(ALP)活力,计算顶侧与基底侧ALP活力比;取体外分化培养21天的Caco-2细胞,使用多功能酶标仪检测大分子物质荧光黄(FD-4)通过单层细胞的百分率(即FD-4通透率)及跨膜转运表观渗透系数(Papp),透射电镜下观察细胞形态。结果 Caco-2细胞体外分化培养第3、5、7、15天的TER均明显低于第19、21天(P均<0.05),Caco-2细胞体外分化培养第19和21天TER比较无统计学差异(P>0.05)。Caco-2细胞体外分化培养第5、15、21天顶侧与基底侧ALP活力比分别为1.43±0.16、2.43±0.28、4.85±0.25,Caco-2细胞体外分化培养第5、15天顶侧与基底侧ALP活力比均明显低于第21天(P均<0.05)。体外分化培养第21天的Caco-2细胞FD-4通透率为2.31%±1.12%,Papp为(1.95±0.90)×10^(-7)cm/s。透射电镜观察结果显示,体外分化培养第21天的Caco-2细胞由微绒毛形成的刷状缘排列整齐致密;细胞顶侧面分化出完整的紧密连接结构,表现为连续的融合点,呈“焊接线”样围绕在细胞膜的顶部,相邻细胞膜被“焊接”在一起,形成绳索样结构。结论 Caco-2细胞在Transwell板体外分化21天后可形成肠上皮细胞紧密连接结构,证实成功构建肠上皮细胞紧密连接模型。 展开更多
关键词 细胞紧密连接 肠上皮细胞 跨膜电阻 碱性磷酸酶 荧光黄通透率
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Mg-6Zn合金对大鼠肠上皮细胞紧密连接蛋白表达的影响 被引量：1
2
作者 于嵩 王啸虎 +6 位作者 阎钧 陈义钢 郑起 张小农 赵常利 张绍翔 赵珺 《中国现代普通外科进展》 CAS 2015年第6期430-434,共5页
目的:研究不同浓度Mg-6Zn合金浸提液对大鼠肠上皮细胞(IEC-6细胞)紧密连接蛋白表达的影响。方法:将Mg-6Zn合金制成20%和40%两个浓度的浸提液,以含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基作为阴性对照体外培养IEC-6细胞。通过噻唑蓝(MTT)法计算细... 目的:研究不同浓度Mg-6Zn合金浸提液对大鼠肠上皮细胞(IEC-6细胞)紧密连接蛋白表达的影响。方法:将Mg-6Zn合金制成20%和40%两个浓度的浸提液,以含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基作为阴性对照体外培养IEC-6细胞。通过噻唑蓝(MTT)法计算细胞相对增殖率评价不同浓度Mg-6Zn合金浸提液对IEC-6细胞的毒性作用;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测不同浓度Mg-6Zn合金浸提液对IEC-6细胞紧密连接相关基因ZO-1、Occludin、Claudins mRNA表达的影响。结果:20%和40%浓度Mg-6Zn合金浸提液在体外培养IEC-6细胞第7天时,细胞毒性分级分别为0级和1级,属于无毒性。20%和40%浓度Mg-6Zn合金浸提液中,IEC-6细胞紧密连接相关基因ZO-1、Occludin、Claudins mRNA的表达相对于对照组增高,差异有统计学意义(P<0.05);40%浓度组中,IEC-6细胞紧密连接相关基因相对于20%浓度组增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Mg-6Zn合金浸提液在一定浓度范围内对IEC-6细胞无毒性,对细胞紧密连接相关基因的表达有促进作用,且随浓度升高影响越大。 展开更多
关键词 Mg-6Zn合金 肠上皮细胞 细胞紧密连接 大鼠
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紧密连接蛋白Claudin-2在肾脏中的研究进展
3
作者 孙光慧 焦明文 +1 位作者 张珊珊 郭丛丛 《中国中西医结合肾病杂志》 2023年第12期1125-1127,共3页
紧密连接蛋白Claudin-2是构成细胞间紧密连接的重要蛋白分子,在维持细胞极性和紧密连接的屏障功能方面具有重要作用。Claudin-2在细胞旁路孔通道形成、阳离子通透及水分转运方面均有重要作用,并参与多种肾脏有关疾病的发生与发展。本文... 紧密连接蛋白Claudin-2是构成细胞间紧密连接的重要蛋白分子,在维持细胞极性和紧密连接的屏障功能方面具有重要作用。Claudin-2在细胞旁路孔通道形成、阳离子通透及水分转运方面均有重要作用,并参与多种肾脏有关疾病的发生与发展。本文对肾脏中Claudin-2近10年的相关研究进展进行综述,以便对Claudin-2有一较全面的了解。 展开更多
关键词 紧密连接蛋白 屏障功能 细胞极性 蛋白分子 发生与发展 细胞间紧密连接 肾脏 研究进展
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牛上皮细胞中有效表面标记物的筛选 被引量：1
4
作者 王燕琴 王易之 智宇 《动物医学进展》 北大核心 2019年第7期77-82,共6页
动物上皮细胞容易被多种病毒感染,上皮细胞表面标记物的检测可以作为表征上皮细胞状态的一种手段,但是大多数上皮细胞表面标记物也会在上皮来源的肿瘤细胞中表达。为了选择高效、独特的上皮标记物,采用蛋白质印迹法和间接免疫荧光技术,... 动物上皮细胞容易被多种病毒感染,上皮细胞表面标记物的检测可以作为表征上皮细胞状态的一种手段,但是大多数上皮细胞表面标记物也会在上皮来源的肿瘤细胞中表达。为了选择高效、独特的上皮标记物,采用蛋白质印迹法和间接免疫荧光技术,在牛肾上皮细胞(KE)、舌上皮细胞(TE)、甲状腺上皮细胞(TYE)以及A549细胞和SW480细胞中,检测了AE3(basic cytokeratin)、AE5(CK3/2p)、CK7、LH1(CK1/10)、EMA(epithelial membrane antigen)、DesmoplakinⅠ/Ⅱ(DSPⅠ/Ⅱ)、E-cadherin和ZO1(zona occludens-1)等8种上皮标记物的表达。结果显示,与阴性对照相比,AE3、AE5、CK7、EMA及DSPⅠ/Ⅱ在上皮细胞和上皮细胞来源的A549、SW480肿瘤细胞中表达良好;E-cadherin仅在上皮细胞中表达;LH1(CK1/10)和ZO1在所有被检测的细胞中都没有表达。结果表明,AE3、AE5、CK7、EMA及DSPⅠ/Ⅱ可以作为有效的上皮细胞及上皮来源的肿瘤细胞标记物,E-cadherin可以作为特异性的上皮细胞标记物。 展开更多
关键词 上皮细胞 肿瘤细胞 表面标记物 间接免疫荧光 细胞角蛋白 细胞紧密连接
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自噬对急性肺损伤小鼠肺泡上皮屏障功能的影响及机制探讨 被引量：1
5
作者 邱玉环 贺天文 李国平 《山东医药》 CAS 2018年第22期28-31,共4页
目的探讨自噬对急性肺损伤(ALI)小鼠肺泡上皮屏障功能的影响,并探讨其机制。方法将40只雄性BALB/c小鼠随机分为C组、LPS组、RAPA+LPS组、3-MA+LPS组,各10只。LPS组、RAPA+LPS组及3-MA+LPS组气管滴入脂多糖(LPS)制备小鼠ALI模型,C组滴入... 目的探讨自噬对急性肺损伤(ALI)小鼠肺泡上皮屏障功能的影响,并探讨其机制。方法将40只雄性BALB/c小鼠随机分为C组、LPS组、RAPA+LPS组、3-MA+LPS组,各10只。LPS组、RAPA+LPS组及3-MA+LPS组气管滴入脂多糖(LPS)制备小鼠ALI模型,C组滴入等量生理盐水;在气管滴入LPS前1 h,3-MA+LPS组和RAPA+LPS组分别腹腔预注射自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA,10 mg/kg)和自噬促进剂雷帕霉素(RAPA,5 mg/kg),C组、LPS组腹腔预注射等量生理盐水。造模18 h后处死小鼠,收集标本。HE染色观察各组小鼠肺组织病理学变化;测算肺组织干湿重比(W/D);测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白水平;RT-PCR法检测肺组织中紧密连接蛋白Zo-1、Occludin mRNA;Western blotting法检测肺组织中Zo-1、Occludin及自噬标志蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ。结果LPS组和3-MA+LPS组肺损伤程度较C组明显加重,3-MA+LPS组较LPS组严重,RAPA+LPS组则较LPS组明显减轻。与C组相比,LPS组肺组织W/D、BALF中总蛋白水平、肺组织中LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达高(P均<0.05),肺组织中Zo-1、Occludin mRNA和蛋白表达低(P均<0.05)。与LPS组相比,3-MA+LPS组肺组织W/D、BALF中总蛋白水平高,肺组织中Zo-1、Occludin mRNA和Zo-1、Occludin、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达低(P均<0.05);而RAPA+LPS组肺组织W/D、BALF中总蛋白水平低,肺组织中Zo-1、Occludin mRNA和Zo-1、Occludin、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达高(P均<0.05)。结论 LPS通过降低紧密连接蛋白Zo-1、Occludin的表达导致肺泡上皮屏障破坏,使肺泡上皮屏障功能受损;抑制自噬会进一步减少Zo-1、Occludin的表达,使肺泡上皮屏障功能受损更严重;而促进自噬,则明显增加Zo-1、Occludin的表达,明显改善肺泡上皮屏障功能,从而对肺脏起保护作用。 展开更多
关键词 急性肺损伤 自噬 肺泡上皮屏障 细胞紧密连接蛋白 小鼠
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Tricellulin在结直肠癌组织中的表达及临床意义
6
作者 陈建科 葛海福 葛万灵 《中国现代普通外科进展》 CAS 2023年第6期437-442,共6页
目的:检测三细胞紧密连接蛋白Tricellulin在结直肠癌组织中的表达水平,分析其对临床病理特征和预后的影响。方法:收集2017年1月至2018年5月在我院接受根治性手术治疗的结直肠癌患者112例,采用免疫组化检测Tricellulin在结直肠癌组织中... 目的:检测三细胞紧密连接蛋白Tricellulin在结直肠癌组织中的表达水平,分析其对临床病理特征和预后的影响。方法:收集2017年1月至2018年5月在我院接受根治性手术治疗的结直肠癌患者112例,采用免疫组化检测Tricellulin在结直肠癌组织中的表达。将患者分为细胞核中Tricellulin阳性细胞数<20组和细胞核中Tricellulin阳性细胞数≥20组。比较两组患者临床病理特征和术后3年生存率,Cox多因素回归分析影响患者预后的危险因素,受试者工作曲线分析分化程度、周围神经浸润、CEA和细胞核中Tricellulin表达阳性数对患者预后不良的预测价值。结果:细胞核中Tricellulin表达阳性数<20患者60例,阳性数≥20患者52例。细胞核中Tricellulin表达阳性数与患者年龄和性别无关(P>0.05),与T分期、N分期、分化程度、淋巴血管侵犯、周围神经浸润和CEA水平相关(P<0.05)。细胞核中Tricellulin表达阳性数≥20组术后3年生存率为59.6%(31/52),低于细胞核中Tricellulin表达阳性数<20组的80.0%(48/60)(log-rankχ^(2)=5.578,P=0.018)。低分化程度、周围神经浸润、CEA水平升高和细胞核中Tricellulin表达阳性数≥20为预后不良的危险因素。细胞核中Tricellulin表达阳性数≥20预测患者术后3年预后不良的曲线下面积为0.945(95%CI:0.927~0.958),灵敏度和特异度分别为89.4%、90.3%,临床预测价值高于分化程度、周围神经浸润和CEA水平(Z=5.320、5.715、4.032,P<0.05)。结论:细胞核中Tricellulin表达与结直肠癌分化程度和肿瘤分期有关,是患者术后预后不良的危险因素,具有较高的预测价值。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 细胞紧密连接蛋白 Tricellulin 预后
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结直肠癌组织中Tricellulin、LC3和Beclin1的表达及意义 被引量：8
7
作者 李思漫 张金秀 +3 位作者 朱晔 叶喆 彭鹏 黄杰安 《山东医药》 CAS 2018年第41期1-5,共5页
目的观察结直肠癌组织中细胞间紧密连接蛋白(Tricellulin)、细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin1的表达,并探讨其意义。方法收集经外科手术切除的结直肠标本145例份,其中正常结直肠黏膜76例份、结直肠癌69例份,患者均未接受放化疗,标本均经病... 目的观察结直肠癌组织中细胞间紧密连接蛋白(Tricellulin)、细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin1的表达,并探讨其意义。方法收集经外科手术切除的结直肠标本145例份,其中正常结直肠黏膜76例份、结直肠癌69例份,患者均未接受放化疗,标本均经病理确诊。采用免疫组化SP法检测结直肠癌组织及正常结直肠黏膜组织中Tricellulin、LC3和Beclin1表达,并分析三者阳性表达与结直肠癌患者临床病理特征的关系;同时采用Western blotting法检测Tricellulin、LC3和Beclin1在正常结直肠上皮细胞和结直肠癌细胞中的蛋白表达。采用Pearson或Spearman相关检验分析Tricellulin、LC3和Beclin1表达的相关性。结果正常结直肠黏膜组织与结直肠癌组织中Tricellulin阳性表达率分别为48. 68%(37/76)、69. 57%(48/69); LC3阳性表达率分别为46. 05%(35/76)、66. 67%(46/69); Beclin1阳性表达率分别为43. 42%(33/76)、65. 22%(45/69),两种组织中Tricellulin、LC3和Beclin1的阳性表达率比较差异有统计学意义(P均<0. 05)。与正常结直肠上皮细胞相比,Tricellulin、LC3和Beclin1均在结直肠癌细胞中高表达,差异有统计学意义(P均<0. 05)。Tricellulin、LC3及Beclin1表达与结直肠癌患者肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移和远处转移有关(P均<0. 05)。结直肠癌组织中Tricellulin与LC3、Beclin1表达呈正相关(r分别为0. 334、0. 377,P均<0. 05),LC3与Beclin1表达呈正相关(r=0. 323,P <0. 05)。结论结直肠癌组织中Tricellulin、LC3和Beclin1均呈高表达,三者可能共同参与了结直肠癌的发生发展及侵袭转移。 展开更多
关键词 结直肠癌 细胞间紧密连接蛋白 细胞自噬相关蛋白 细胞自噬
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