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题名5-羟色胺1A受体激动剂高通量筛选模型的建立
被引量：4
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作者
孙颖
蔡海燕
沈敬山
朱维良
王贺瑶
郭敏亮
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机构
扬州大学生物科学与技术学院
中国科学院上海药物研究所
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出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期731-736,共6页
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基金
国家科技重大专项<重大新药创制>课题(No 2011ZX09102-005-02)
上海市生物医药重点项目(No 10431902800)
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文摘
目的为发现5-羟色胺1A(5-HT1A)受体的激动剂,通过报告基因活性检测的方法建立高通量筛选(HTS)细胞模型。方法将带有人源5-HT1A受体的真核表达质粒pcD-NA3.1(pcDNA3.1-h5-HT1AR)与带有报告基因pCRE-luc的pcDNA3.1质粒(pcDNA3.1-pCRE-luc)共转染到工具细胞中,通过对工具细胞选择、共转染质粒比例、化合物孵育时间及阳性化合物选择等条件进行探索和优化,建立了稳定表达人源5-HT1A受体并可用于该受体激动剂筛选的细胞模型(HEK293-h5-HT1AR)。结果①根据瞬转实验中信号值的高低,模型采用HEK293细胞作为工具细胞;②根据瞬转实验中的信噪比,发现pcDNA3.1-h5-HT1AR:pcDNA3.1-pCRE-luc的最佳比例为1∶3;③对化合物孵育时间进行优化,选择的最佳孵育时间为6 h;④阳性化合物的选择过程中,实验研究了5-HT.HCl,Flibanserin,8-OH-DPAT以及Lorcaser-in(APD356)4个已报道有5-HT1A受体激动活性的化合物,结果表明APD356在该体系中最适合作为阳性对照化合物。⑤该细胞株连续培养12代,信号稳定。结论通过对一系列实验条件进行选择和优化,建立了一个稳定表达人源5-HT1A受体的细胞模型,该模型可用于高通量5-HT1A激动剂的筛选。
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关键词
激动剂
高通量筛选
5-羟色胺1A受体
抑郁症
内源型
细胞稳转株
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Keywords
Agonist
HTS
5-HT1A receptor
depression
endogeny
stable cell line
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分类号
R329.24
[医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R392.11
[医药卫生—免疫学]
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