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提高重组表达体系相对活性促进外源蛋白表达:人干扰素毕赤酵母表达体系研究
被引量：
1
1
作者
窦文芳
张旦旦
+4 位作者
许泓瑜
金坚
许正宏
史劲松
陆震鸣
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第11期11-15,共5页
以毕赤酵母KM71/IH的hIFNβ-HAS表达体系为研究对象,较为系统地研究了不同因素引起的细胞相对活性变化与毕赤酵母外源蛋白表达的相关性。结果表明:(1)细胞相对活性变化与外源蛋白的表达成正相关;(2)处在对数生长中后期的细胞相对活性最...
以毕赤酵母KM71/IH的hIFNβ-HAS表达体系为研究对象,较为系统地研究了不同因素引起的细胞相对活性变化与毕赤酵母外源蛋白表达的相关性。结果表明:(1)细胞相对活性变化与外源蛋白的表达成正相关;(2)处在对数生长中后期的细胞相对活性最高,更适合用于外源蛋白的表达;(3)诱导阶段的环境因素直接影响诱导期细胞相对活性,合适的甲醇浓度、诱导pH及温度是维持细胞高活性,促进外源蛋白高表达的关键。对于hIFNβ-HAS表达体系最佳诱导条件为:以培养21～24h的细胞为诱导种子,初始甲醇浓度为2%(V/V),pH6.0,25℃,细胞活性维持在98%以上,hIFNβ-HSA表达量高达45.6mg/L,较优化前提高了62.3%。
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关键词
毕赤酵母
细胞相对活性
外源蛋白表达
人β干扰素
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职称材料
含油微藻的选育及其冷冻保藏研究
2
作者
李澜鹏
廖莎
+5 位作者
王鹏翔
孙启梅
师文静
李晓姝
张霖
彭绍忠
《水产学杂志》
CAS
北大核心
2021年第3期34-41,共8页
在东北地区水域采集含有浮游微藻的水样,用纱布过滤去掉水体中较大的沉淀物,取100 mL滤液转入500 mL的三角摇瓶中,加入100 mL BG11培养基,在25~28℃、光照强度为3000 Lux,光暗比为14∶10下富集培养,采用稀释涂布法分离纯化至明显的绿色...
在东北地区水域采集含有浮游微藻的水样,用纱布过滤去掉水体中较大的沉淀物,取100 mL滤液转入500 mL的三角摇瓶中,加入100 mL BG11培养基,在25~28℃、光照强度为3000 Lux,光暗比为14∶10下富集培养,采用稀释涂布法分离纯化至明显的绿色。对筛出微藻在200 mL柱式光照反应器中进行光照通气培养与评价,其中生长最快的微藻生物量达到1.8305 g·L^(-1),最高的油脂含量达到34.69%,最高油脂产率达29 mg·L^(-1)·d^(-1)。取5株(一株小球藻属Chlorella、两株单针藻属Monoraphidium两株栅藻属Scenedesmus)生长快速、含油量高的藻种新鲜藻液分别离心(4000 r·min^(-1),3 min),去离子水洗两次后,加入新鲜培养基重悬,取出部分微藻加入5种保护剂:甘油(GLY)、二甲基亚砜(DMSO)、蔗糖(SUC)、聚乙二醇(PEG)和羟二基淀粉(HES),分别置于-18℃和-80℃保藏。一个月后,取出保藏微藻,解冻,摇匀,离心,用生理盐水洗两次,去除保护剂后一部分检测细胞活性评价,一部分接种到新鲜培养基进行生长评价。选取确定保护剂后进一步考察保护剂浓度(10%、20%、30%、40%和50%)和保藏时间(3个月、6个月和9个月以及1年)。结果表明:采用二醋酸荧光素法能快速反应细胞冷冻后细胞活力,采用-18℃添加20%甘油或-80℃添加10%甘油冷冻保藏,适用于大多数含油微藻。该方法可保藏含油微藻至少1年且细胞生物量和油脂含量稳定。
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关键词
含油微藻
细胞相对活性
保护剂
冷冻保藏
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职称材料
题名
提高重组表达体系相对活性促进外源蛋白表达:人干扰素毕赤酵母表达体系研究
被引量：
1
1
作者
窦文芳
张旦旦
许泓瑜
金坚
许正宏
史劲松
陆震鸣
机构
江南大学医药学院生物制药系
江南大学教育部工业生物技术重点实验室
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第11期11-15,共5页
基金
长江学者和创新团队发展计划(No IRT0532)资助
国家重大新药创制专项(N02009ZX09102-221)
+2 种基金
国家自然基金(31000016)
江苏省自然科学基金(企业博士创新项目BK2009518)
江苏省科技支撑计划(BE2009629)
文摘
以毕赤酵母KM71/IH的hIFNβ-HAS表达体系为研究对象,较为系统地研究了不同因素引起的细胞相对活性变化与毕赤酵母外源蛋白表达的相关性。结果表明:(1)细胞相对活性变化与外源蛋白的表达成正相关;(2)处在对数生长中后期的细胞相对活性最高,更适合用于外源蛋白的表达;(3)诱导阶段的环境因素直接影响诱导期细胞相对活性,合适的甲醇浓度、诱导pH及温度是维持细胞高活性,促进外源蛋白高表达的关键。对于hIFNβ-HAS表达体系最佳诱导条件为:以培养21～24h的细胞为诱导种子,初始甲醇浓度为2%(V/V),pH6.0,25℃,细胞活性维持在98%以上,hIFNβ-HSA表达量高达45.6mg/L,较优化前提高了62.3%。
关键词
毕赤酵母
细胞相对活性
外源蛋白表达
人β干扰素
Keywords
Pichia pastoris
cell viability
foreign protein expression
human IFNβ-HSA fusion protein
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
含油微藻的选育及其冷冻保藏研究
2
作者
李澜鹏
廖莎
王鹏翔
孙启梅
师文静
李晓姝
张霖
彭绍忠
机构
中国石油化工股份有限公司大连石油化工研究院
出处
《水产学杂志》
CAS
北大核心
2021年第3期34-41,共8页
基金
中国石化科技开发项目(214054).
文摘
在东北地区水域采集含有浮游微藻的水样,用纱布过滤去掉水体中较大的沉淀物,取100 mL滤液转入500 mL的三角摇瓶中,加入100 mL BG11培养基,在25~28℃、光照强度为3000 Lux,光暗比为14∶10下富集培养,采用稀释涂布法分离纯化至明显的绿色。对筛出微藻在200 mL柱式光照反应器中进行光照通气培养与评价,其中生长最快的微藻生物量达到1.8305 g·L^(-1),最高的油脂含量达到34.69%,最高油脂产率达29 mg·L^(-1)·d^(-1)。取5株(一株小球藻属Chlorella、两株单针藻属Monoraphidium两株栅藻属Scenedesmus)生长快速、含油量高的藻种新鲜藻液分别离心(4000 r·min^(-1),3 min),去离子水洗两次后,加入新鲜培养基重悬,取出部分微藻加入5种保护剂:甘油(GLY)、二甲基亚砜(DMSO)、蔗糖(SUC)、聚乙二醇(PEG)和羟二基淀粉(HES),分别置于-18℃和-80℃保藏。一个月后,取出保藏微藻,解冻,摇匀,离心,用生理盐水洗两次,去除保护剂后一部分检测细胞活性评价,一部分接种到新鲜培养基进行生长评价。选取确定保护剂后进一步考察保护剂浓度(10%、20%、30%、40%和50%)和保藏时间(3个月、6个月和9个月以及1年)。结果表明:采用二醋酸荧光素法能快速反应细胞冷冻后细胞活力,采用-18℃添加20%甘油或-80℃添加10%甘油冷冻保藏,适用于大多数含油微藻。该方法可保藏含油微藻至少1年且细胞生物量和油脂含量稳定。
关键词
含油微藻
细胞相对活性
保护剂
冷冻保藏
Keywords
oil-rich microalga
relative cell activity
cryoprotectant
cryopreservation
分类号
Q31 [生物学—遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
提高重组表达体系相对活性促进外源蛋白表达:人干扰素毕赤酵母表达体系研究
窦文芳
张旦旦
许泓瑜
金坚
许正宏
史劲松
陆震鸣
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
含油微藻的选育及其冷冻保藏研究
李澜鹏
廖莎
王鹏翔
孙启梅
师文静
李晓姝
张霖
彭绍忠
《水产学杂志》
CAS
北大核心
2021
0
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