猪源病毒细胞毒性T淋巴细胞表位研究进展

1

作者 鲜钰涵 冯宏盛 +7 位作者 高永宇 李海洋 杨思宇 桑辰君 曹玉蝶 唐越 李子彬 高凤山 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3086-3099,共14页

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子,也称为猪白细胞抗原(swine leukocyte antigen,SLA)Ⅰ类分子,在机体抗原递呈、器官移植、细胞免疫应答和调控等方面起重要作用。细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T ly... 主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子,也称为猪白细胞抗原(swine leukocyte antigen,SLA)Ⅰ类分子,在机体抗原递呈、器官移植、细胞免疫应答和调控等方面起重要作用。细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位是抗原经抗原递呈细胞加工后,与SLA-Ⅰ类分子结合并递呈的线性肽段,具有高度特异性,在机体抗原识别递呈和细胞免疫抵抗病毒感染方面发挥着关键作用。CTL表位能够刺激CTLs发挥细胞杀伤作用,主要表现为杀伤病毒。作者将对口蹄疫病毒、非洲猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒等几种重要的猪源病毒的CTL表位研究现状进行综述,并利用生物信息学手段分析SLA-Ⅰ与CTL表位结合基序特征,以期为今后相关猪源病毒CTL表位的研究和多表位疫苗的设计提供参考。 展开更多

关键词 细胞毒性t淋巴细胞(ctl)表位 猪口蹄疫病毒 非洲猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒

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人乳头瘤病毒16E7限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的穿膜肽疫苗设计及体外免疫学研究 被引量：6

2

作者 尹锐 郝飞 +1 位作者 郝进 杨希川 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期807-809,共3页

目的:利用穿膜肽人免疫缺陷病毒(HIV)-Tat49-57的穿膜能力,设计穿膜肽人乳头瘤病毒(HPV)16E7限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位(第49～57位氨基酸)的融合肽疫苗,并在体外研究其诱导特异性CTL的应答能力。方法:应用多肽固相合成技术,分... 目的:利用穿膜肽人免疫缺陷病毒(HIV)-Tat49-57的穿膜能力,设计穿膜肽人乳头瘤病毒(HPV)16E7限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位(第49～57位氨基酸)的融合肽疫苗,并在体外研究其诱导特异性CTL的应答能力。方法:应用多肽固相合成技术,分别合成含HIVTat49-57和人类白细胞抗原(HLA)-A2.1限制性CTL优势表位HPV16E749-57的18肽,和该CTL表位的9肽,并用一无关肽作对照,在体外用乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性试验分别检测了上述18肽和9肽在HLA-A2阳性健康者外周血单个核细胞(PBMC)中诱导的表位E749-57的特异性CTL活性。结果:经质谱分析,上述多肽成功合成,纯度均在95%以上。与9肽相比,18肽能在体外诱导出明显增强的特异性CTL活性(P<0.05)。结论:在HPV16E7HLA-A2.1限制性CTL表位(49～57)的N-末端加上HIV-Tat49-57序列,不会影响表位的提呈效率,而且在体外能有效激发针对E749-57特异性的CTL应答,为新型抗肿瘤及细胞内感染的多肽疫苗设计提供了新思路。 展开更多

关键词 穿膜肽 人免疫缺陷病毒-tat49-57 细胞毒性t淋巴细胞表位 人乳头瘤病毒16 肽疫苗

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肿瘤抗原细胞毒性T淋巴细胞表位鉴定和多肽疫苗的研究进展 被引量：7

3

作者 吴亚红 高艳锋 祁元明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2011年第5期657-660,共4页

恶性肿瘤是当前威胁人类生命健康的主要疾病之一,尽管手术治疗联合化疗/放疗能够延长患者的生存期,但是这些治疗手段也会损伤正常细胞,产生很多不良反应,再加上很多恶性肿瘤具有侵袭转移和复发等特征,因此,急需发展新的方法来治疗肿瘤患... 恶性肿瘤是当前威胁人类生命健康的主要疾病之一,尽管手术治疗联合化疗/放疗能够延长患者的生存期,但是这些治疗手段也会损伤正常细胞,产生很多不良反应,再加上很多恶性肿瘤具有侵袭转移和复发等特征,因此,急需发展新的方法来治疗肿瘤患者[1]。 展开更多

关键词 肿瘤抗原 细胞毒性t淋巴细胞 表位 多肽疫苗

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妊娠期特异性beta1糖蛋白9 HLA-A3限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的鉴定 被引量：2

4

作者 李璐 高艳锋 祁元明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2011年第2期176-179,共4页

目的:鉴定来自食管癌细胞中特异性高表达的妊娠期特异性beta1糖蛋白9(PSG9)的HLA-A3限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位。方法:首先运用RT-PCR方法检测PSG9mRNA在食管癌细胞EC9706、EC-1及EC-109中的表达情况。然后通过Bimas和Syfpeithi... 目的:鉴定来自食管癌细胞中特异性高表达的妊娠期特异性beta1糖蛋白9(PSG9)的HLA-A3限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位。方法:首先运用RT-PCR方法检测PSG9mRNA在食管癌细胞EC9706、EC-1及EC-109中的表达情况。然后通过Bimas和Syfpeithi预测,再结合NetCTL1.2选取4条来源于PSG9的HLA-A3限制性的表位。候选表位P336的2位的氨基酸由异亮氨酸替换为亮氨酸,9位的氨基酸由酪氨酸替换为赖氨酸。候选表位P378的9位氨基酸由精氨酸替换为赖氨酸。候选表位通过标准的Fmoc化学法合成,通过结合力实验检测表位与T2A3细胞表面HLA-A3分子的结合力水平,通过细胞毒实验检测对EC-1细胞毒活性。结果:PSG9在肿瘤细胞EC9706、EC-1以及EC-109中都有表达。候选表位P107、P201和P336-2L9K与HLA-A3分子有弱结合力,P336、P378和P378-9K与HLA-A3分子有中等结合力。细胞毒实验结果显示P336-2L9K、P378和P378-9K对EC-1细胞均有一定的杀伤作用。结论:多肽P336-2L9K、P378和P378-9K能诱导体外抗肿瘤免疫反应,有可能成为PSG9阳性肿瘤细胞的共同CTL表位。 展开更多

关键词 妊娠期特异性betal糖蛋白9 细胞毒性t淋巴细胞 HLA-A3 表位

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中国人丙型肝炎病毒复合细胞毒性T淋巴细胞多表位基因真核载体的构建及在COS-7细胞中的表达

5

作者 郝晓娟 李端 +3 位作者 陈丽萍 赵甫涛 赵英仁 贾战生 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期444-446,466,共4页

目的构建中国人丙型肝炎病毒(HCV)复合细胞毒性T淋巴细胞(CTL)多表位基因的真核表达载体,并观察其在真核细胞中的表达。方法根据生物信息学方法筛选中国人的HCV多个CTL优势表位,合成复合多表位抗原基因(mcf);将其克隆入真核表达载体pEGF... 目的构建中国人丙型肝炎病毒(HCV)复合细胞毒性T淋巴细胞(CTL)多表位基因的真核表达载体,并观察其在真核细胞中的表达。方法根据生物信息学方法筛选中国人的HCV多个CTL优势表位,合成复合多表位抗原基因(mcf);将其克隆入真核表达载体pEGFP-N1,转染COS-7细胞,在荧光显微镜下观察mcf-EGFP融合蛋白在细胞中的分布和定位,RT-PCR及Western blot检测其mRNA及蛋白表达。结果成功构建了真核表达载体pEGFP-mcf。将构建的真核表达载体pEGFP-mcf转染COS-7细胞后,绿色荧光分布于COS-7细胞胞质中;而转染空载体pEGFP-N1后,绿色荧光弥散分布于COS-7细胞胞核及胞质中。RT-PCR检测到转染细胞中mcfmRNA表达;West-ern blot结果证明合成mcf可在COS-7细胞中表达。结论该真核表达载体的成功表达及鉴定,为下一步中国人的HCV复合CTL多表位疫苗的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 细胞毒性t淋巴细胞 表位

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恶性疟细胞毒性T淋巴细胞单表位疫苗抗原递呈细胞模型的建立

6

作者 乔苗 史丽丽 王恒 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期390-394,共5页

目的 构建恶性疟细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）单表位疫苗及建立抗原递呈细胞模型。方法一采用中国人群常见的HLAⅠ类分子A11限制的恶性疟CTL抗原表位（VTCGNGIQVR），合成其DNA序列并克隆于真核表达载体，构建CTL... 目的 构建恶性疟细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）单表位疫苗及建立抗原递呈细胞模型。方法一采用中国人群常见的HLAⅠ类分子A11限制的恶性疟CTL抗原表位（VTCGNGIQVR），合成其DNA序列并克隆于真核表达载体，构建CTL单表位DNA疫苗。将上述克隆在HLA-A11表型细胞株中进行表达，流式细胞仪检测细胞表面HLAⅠ类分子表达水平。结果 上述CTL单表位DNA疫苗编码的短肽在细胞内的表达明显促进HLA-A11分子在细胞表面的表达，用流式细胞仪测定平均荧光强度可量化表达水平(P ＜ 0．05)。结论 成功构建CTL单表位短肽表达载体，模拟体内环境建立了抗原递呈细胞模型，提示CTL表位在该细胞模型内被内源性加工和递呈，以该表位为基础的疫苗可以为HLA-A11遗传背景的人群提供免疫防护。 展开更多

关键词 恶性疟 ctl表位疫苗 细胞毒性t淋巴细胞 人类白细胞抗原Ⅰ类分子

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融合表达淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒和卵清白蛋白CD8^+T细胞表位的减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建与鉴定 被引量：4

7

作者 王芳 焦新安 +5 位作者 潘志明 张晓明 黄金林 Richard Lo-Man Claude Leclerc 刘秀梵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期14-17,共4页

依据淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)主要保护性抗原CD8+T细胞表位VRRPQASGVYMGNLTAQ和卵清白蛋白(OVA)CD8+T细胞表位SIINFEKL,设计、合成两条编码LCMV和OVACD8+T细胞表位的寡核苷酸片段,经退火后,克隆入绿色荧光蛋白表达质粒pYAGFP,经... 依据淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)主要保护性抗原CD8+T细胞表位VRRPQASGVYMGNLTAQ和卵清白蛋白(OVA)CD8+T细胞表位SIINFEKL,设计、合成两条编码LCMV和OVACD8+T细胞表位的寡核苷酸片段,经退火后,克隆入绿色荧光蛋白表达质粒pYAGFP,经PCR扩增和序列测定分析,证实成功构建T细胞表位与绿色荧光蛋白融合表达的重组质粒pYAGFPL＿O,将此重组质粒pYAGFPL＿O转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550,获得重组沙门氏菌X4550(pYAGF PL＿O)。用SDS＿PAGE电泳测得重组菌表达的融合蛋白约为30kD。同时,荧光显微镜下观察到X4550(pYAGFPL＿O)发出黄绿色荧光。这些结果表明LCMV和OVAT细胞表位已成功表达。重组菌X4550(pYAGFPL＿O)的获得为研究沙门氏菌载体携带外源抗原的T细胞应答规律及调控机理打下了重要基础。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒 卵清白蛋白 t细胞表位 减毒鼠伤寒沙门氏菌

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猪圆环病毒2型ORF1和ORF3T淋巴细胞抗原表位的克隆与原核表达

8

作者 高娟 王艳玲 +2 位作者 蒋再学 竺薇 罗满林 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期93-97,共5页

根据Stevenson筛选出来的3个具有活性的T淋巴细胞抗原表位(T lymphocyte epitope,TCE)合成tce基因(180 bp),成功插入到pMD18-T Simple载体中,筛选获得重组质粒,命名为pMD-TCE.将tce酶切产物亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,获得重组质... 根据Stevenson筛选出来的3个具有活性的T淋巴细胞抗原表位(T lymphocyte epitope,TCE)合成tce基因(180 bp),成功插入到pMD18-T Simple载体中,筛选获得重组质粒,命名为pMD-TCE.将tce酶切产物亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,获得重组质粒,命名为pET-TCE.用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE检测,结果显示合成基因在pET-32a(+)中获得了高效融合表达,其表达蛋白相对分子质量约为25 000,Western-blot分析结果表明,获得的融合蛋白可与猪圆环病毒2型(PCV2)阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫原性. 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 t淋巴细胞抗原表位 克隆 原核表达

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转基因表达HBV抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞受体 被引量：2

9

作者 吴静 王琳 +4 位作者 刘妍 叶海燕 丁宁 刘永明 徐东平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期453-457,共5页

目的通过逆转录病毒介导HBV抗原特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)转基因表达,初步观察其结合活性。方法从HLA-A2阳性急性乙肝患者外周血中诱导、分选、克隆和扩增HBV抗原特异性CTL;提取细胞RNA,用RT-PCR、5'-RACE和OVER-LA... 目的通过逆转录病毒介导HBV抗原特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)转基因表达,初步观察其结合活性。方法从HLA-A2阳性急性乙肝患者外周血中诱导、分选、克隆和扩增HBV抗原特异性CTL;提取细胞RNA,用RT-PCR、5'-RACE和OVER-LAP PCR等方法获取TCR的α和β链编码基因;构建TCR重组逆转录病毒,介导特异性TCR分别在人Jurkat T细胞和HLA-A2阳性健康人CD8 T淋巴细胞上表达。结果从1例HLA-A2阳性急性乙肝患者样本中分别获得了2组TCR Vα、Vβ配对,分别命名为α21β13、α15β13,包装的重组逆转录病毒滴度为(1.5～5.0)×105IU/mL,用针对目标TCR的特异性Vβ链抗体(抗Vβ13 TCR-PE)和HLA-A2限制性表位特异性五聚体(pentamer)进行免疫荧光染色,重组TCR在T细胞表面获得表达:其中在Jurkat细胞上转入的Vβ13链表达细胞占1.06%～2.25%,在HLA-A2阳性健康人T细胞上Vβ13阳性细胞和pentamer阳性细胞分别占到1.03%～2.06%和1.05%～1.12%,在HLA-A2阴性健康人T细胞上Vβ13阳性细胞和pentamer阳性细胞均低于0.05%。结论通过逆转录病毒介导可以使HBV特异性CTL TCR获得转基因表达,具有结合HLA-A2限制性表位的活性。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 细胞毒性t淋巴细胞 t细胞受体 表位特异性 表达

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丙型肝炎病毒多CTL表位树突状细胞疫苗的构建及体外刺激T细胞应答 被引量：3

10

作者 周云 李端 +5 位作者 陈琳 赵甫涛 马力 汪鸿 潘蕾 贾战生 《临床肝胆病杂志》 CAS 2011年第1期40-44,共5页

目的构建丙型肝炎病毒(HCV)多细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位树突状细胞(DC)疫苗,观察其体外刺激的T细胞反应,为下一步做体内免疫实验提供一定的资料。方法构建和制备出含绿色荧光蛋白(GFP)标签的HCV两个CTL表位的重组腺病毒,感染DC,直接... 目的构建丙型肝炎病毒(HCV)多细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位树突状细胞(DC)疫苗,观察其体外刺激的T细胞反应,为下一步做体内免疫实验提供一定的资料。方法构建和制备出含绿色荧光蛋白(GFP)标签的HCV两个CTL表位的重组腺病毒,感染DC,直接在荧光显微镜下或用流式细胞仪检测其感染率;RT-PCR和Western Blot方法检测HCV多CTL表位的表达。流式细胞术分析感染前后DC的CD80、CD83、CD86和人类白细胞抗原(HLA)-DR的表达,CCK-8法观察感染重组腺病毒的DC促进T细胞的增殖效应。ELISA检测重组腺病毒刺激后的DC培养上清液内白细胞介素(IL)-12及DC和T细胞混合培养上清液内干扰素(IFN)-γ的含量。用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性CTL的杀伤活性。结果成功构建含GFP标签的HCV多CTL表位的重组腺病毒,并在DC中表达。重组腺病毒能促进DC成熟,DC的CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达分别为(71.19±3.29)%、(81.21±5.07)%、(91.23±4.24)%、(97.95±5.31)%。感染DC后促进同源T细胞增殖,DC:T为1:10时增殖指数为6.806±0.247。分泌的IL-12和IFN-γ也明显增多,分别达到(193.83±6.25)pg/ml和(111.14±2.09)pg/ml。感染DC刺激的CTL能特异性杀伤转染FL-J6/JFH的Huh-7.5细胞,当效靶比为100:1时,AD1-DC-L的杀伤率为35.99%。结论重组多CTL表位腺病毒在体外能有效感染DC,促进了T细胞反应,为下一步抗HCV的DC疫苗研制打下基础。 展开更多

关键词 肝炎病毒属 表位 树突细胞 病毒性肝炎疫苗 t淋巴细胞 细胞毒性

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gp96多肽复合物介导的细胞毒性T淋巴细胞对食管腺癌细胞的免疫杀伤作用 被引量：4

11

作者 马丽萍 潘秀英 +2 位作者 李娜 刘玉京 陈晓欣 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期525-528,共4页

目的 :研究肿瘤细胞来源的gp96多肽复合物介导的对同一类型肿瘤的免疫治疗作用。方法 :提取纯化食管腺癌细胞系SEG 1裸鼠成瘤组织的gp96蛋白多肽复合物 ,与外周血单个核细胞 (PBMNC)诱导培养的树突状细胞(DC)结合 ,制备gp96 DC疫苗 ;... 目的 :研究肿瘤细胞来源的gp96多肽复合物介导的对同一类型肿瘤的免疫治疗作用。方法 :提取纯化食管腺癌细胞系SEG 1裸鼠成瘤组织的gp96蛋白多肽复合物 ,与外周血单个核细胞 (PBMNC)诱导培养的树突状细胞(DC)结合 ,制备gp96 DC疫苗 ;台盼蓝拒染法测定淋巴细胞增殖率 ;ELISA方法检测细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)培养上清液的γ干扰素 (IFN γ)含量 ,MTT法检测CTL对靶细胞SEG 1的杀伤率。结果 :5 5g瘤组织提取纯化gp96蛋白12 0 μg ;单独DC、单独gp96及gp96 DC均能刺激淋巴细胞增殖 ,产生CTL ,释放IFN γ ,对靶细胞SEG 1均显示一定的杀伤作用 ,以gp96 DC的作用最明显 ,在效靶比 4 0∶1时 ,杀伤率为 6 8%。单独DC诱导的CTL对SEG 1、K5 6 2的杀伤作用与非抗原刺激的淋巴细胞比较 ,统计学差异无显著性。结论 :肿瘤来源的热休克蛋白gp96可使DC具有更强的刺激T淋巴细胞增殖的能力 ,所产生的CTL对靶肿瘤细胞有明显的特异杀伤作用。 展开更多

关键词 热休克蛋白GP96 杀伤作用 ctl 细胞毒性t淋巴细胞 DC 食管腺癌 介导 提取纯化 多肽 复合物

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人乳头瘤病毒16型E7抗原细胞毒性T细胞预测表位的分子模拟研究 被引量：1

12

作者 徐云升 郝飞 +2 位作者 耿淼 叶庆佾 钟白玉 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期545-547,共3页

对人乳头瘤病毒(HPV)16型E7抗原的预测表位从理论上分析其与HLA-A2分子结合的情况,推测成为HLA-A2限制性表位的可能性。通过计算机分子模拟,确立各表位及其与HLA-A2分子结合形成复合物的模拟结构。结果发现,各表位的三维结构符合HLA-A2... 对人乳头瘤病毒(HPV)16型E7抗原的预测表位从理论上分析其与HLA-A2分子结合的情况,推测成为HLA-A2限制性表位的可能性。通过计算机分子模拟,确立各表位及其与HLA-A2分子结合形成复合物的模拟结构。结果发现,各表位的三维结构符合HLA-A2限制性细胞毒性T细胞(CTL)表位的结构要求,能较好地与HLA-A2分子结合。根据分子模拟提供的理论支持,各预测表位均符合要求,提示可在后续实验中进行表位合成、筛选、鉴定和多肽疫苗的研制。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒 E7抗原 细胞毒性t细胞表位 分子模拟

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丙型肝炎病毒CTL表位基因真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立

13

作者 吕欣 尹文 +6 位作者 孙梦宁 黄小军 杨敬 姚敏 薛小平 贾战生 徐志凯 《临床肝胆病杂志》 CAS 2011年第1期45-48,共4页

目的构建含丙型肝炎病毒(HCV)复合多表位基因的真核表达载体,转染CHO细胞,建立稳定转染细胞系。方法通过生物信息学预测分析的方法得到涵盖HCV不同基因型与小鼠H2复合体的多个细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位,串联后人工合成基因序列,将其... 目的构建含丙型肝炎病毒(HCV)复合多表位基因的真核表达载体,转染CHO细胞,建立稳定转染细胞系。方法通过生物信息学预测分析的方法得到涵盖HCV不同基因型与小鼠H2复合体的多个细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位,串联后人工合成基因序列,将其克隆入真核表达载体pEGFP-N3中,然后利用脂质体法转染CHO细胞,通过持续G418筛选建立稳定转染细胞株。最后通过荧光显微镜观察、RT-PCR和Western Blot等方法证实多表位基因的表达。结果所构建的含有HCV复合多表位基因的真核表达载体pEGFP-mEpi在CHO细胞中能稳定表达。结论真核表达载体的成功构建和稳定转染CHO细胞系的建立为进一步研究复合多表位疫苗的基因免疫奠定了基础。 展开更多

关键词 肝炎病毒属 转染 基因表达 表位 t淋巴细胞 t淋巴细胞 细胞毒性

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细胞毒性T淋巴细胞活性检测方法进展 被引量：4

14

作者 石秀敏 牛超 +1 位作者 李敏 金浩范 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期429-432,共4页

细胞毒性T淋巴细胞（Cytotoxic T lymphocyte,CTL）活性的测定是了解机体细胞免疫功能的重要方法。肿瘤免疫治疗中使用肿瘤表位分子使特异性的CTL激活并扩增,达到清除肿瘤细胞的目的[1],抗病毒多表位DNA疫苗也在快速发展[2],这些研究中... 细胞毒性T淋巴细胞（Cytotoxic T lymphocyte,CTL）活性的测定是了解机体细胞免疫功能的重要方法。肿瘤免疫治疗中使用肿瘤表位分子使特异性的CTL激活并扩增,达到清除肿瘤细胞的目的[1],抗病毒多表位DNA疫苗也在快速发展[2],这些研究中CTL的定性和定量检测非常重要,因此如何更好地检测CTL活性成为一个关键的问题。 展开更多

关键词 细胞毒性t淋巴细胞 细胞活性检测 LYMPHOCYtE 机体细胞免疫功能 肿瘤免疫治疗 DNA疫苗 ctl 肿瘤细胞

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同种异体的细胞毒性T淋巴细胞诱导和培养

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作者 刘书钦 徐和德 《华南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 1994年第4期1-11,共11页

通过诱导获得了移植的ＣＴＬ（细胞毒性Ｔ淋巴细胞）并为建立大规模培养系统而研究了其培养条件，通过外周血单核细胞（ＰＭＢＣ）与经Ｘ－射线辐射的肿瘤ＳＱ－５在含有白细胞介素（ＩＬ）１、２、４、６的Ｒｈａｍα培养液中共同培养... 通过诱导获得了移植的ＣＴＬ（细胞毒性Ｔ淋巴细胞）并为建立大规模培养系统而研究了其培养条件，通过外周血单核细胞（ＰＭＢＣ）与经Ｘ－射线辐射的肿瘤ＳＱ－５在含有白细胞介素（ＩＬ）１、２、４、６的Ｒｈａｍα培养液中共同培养３天以上，获得了抗人肺鳞状癌肿ＳＱ－５的人的ＣＴＬ．ＣＴＬ杀伤靶细胞的靶效比是１．在含有人的血清白蛋白（ＨＳＡ）培养液中这种ＣＴＬ生长很快，保存３个月以后仍保持很高杀伤活性，达９５％以上。与非靶的肿瘤细胞相比，ＣＴＬ表现出对靶细胞的特异活性，在一个月内即可获得足够量的ＣＴＬ（１０￣（１０）－１０￣（１１）个）．这些结果表明应用培养的ＣＴＬ治疗各种癌症是有良好前景的治疗技术。 展开更多

关键词 ctl 诱导 细胞毒性 t淋巴细胞 肿瘤细胞

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HSP-沙眼衣原体MOMP T细胞表位基因的重组、原核表达和蛋白质纯化 被引量：2

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作者 杨思睿 卫红飞 +5 位作者 孙景辉 杨煜 王燕媚 鲁继荣 于永利 王丽颖 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期11-14,共4页

目的:构建热休克蛋白65(HSP65)与沙眼衣原体(C．trachomatis,Ct)主要外膜蛋白(MOMP) T细胞表位(简称ctml)融合蛋白(简称H-ctml)的原核表达载体,并将其表达及纯化。方法:用PCR技术获得HSP65基因和ctml基因,并分别将其克隆入pMD18-T载体,... 目的:构建热休克蛋白65(HSP65)与沙眼衣原体(C．trachomatis,Ct)主要外膜蛋白(MOMP) T细胞表位(简称ctml)融合蛋白(简称H-ctml)的原核表达载体,并将其表达及纯化。方法:用PCR技术获得HSP65基因和ctml基因,并分别将其克隆入pMD18-T载体,采用酶切与连接的方法从pMD18-T载体上获得HSP65基因片段,并将其克隆入pET28a表达质粒,再用相同的方法将ctml基因连接于HSP65基因片段的下游,从而完成H-ctml的基因重组。用IPTG诱导转化H—ctml表达载体的大肠杆菌,以镍金属螯合亲和层析法纯化融合蛋白质。结果:构建了HSP65与ctml的表达载体pET28a-H—ctml,DNA序列测定结果表明构建正确。以镍金属螯合亲和层析获得纯度为98％的融合蛋白质。结论:用分子克隆技术正确构建HSP65与 Ct MOMP T细胞表位融合蛋白的表达载体,并成功表达与纯化出具有生物活性的融合蛋白。 展开更多

关键词 热休克蛋白65 衣原体 沙眼 表位 t淋巴细胞 聚合酶链反应/方法 重组融合蛋白质类

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表达US3基因腺病毒载体下调CTL和NK细胞对其转染肝细胞杀伤活性的影响 被引量：1

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作者 王鹏 李玲 +4 位作者 阚全程 潘雪 余祖江 张振香 冯婷 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期655-660,共6页

目的研究表达US3基因重组腺病毒载体对其转染肝细胞介导的免疫逃逸活性。方法首先构建表达US3基因腺病毒载体,扩增纯化后转染HL-7702肝细胞,利用细胞毒性T细胞(CTL)杀伤实验和自然杀伤细胞(NK)杀伤实验,检测表达US3基因重组腺病毒载体... 目的研究表达US3基因重组腺病毒载体对其转染肝细胞介导的免疫逃逸活性。方法首先构建表达US3基因腺病毒载体,扩增纯化后转染HL-7702肝细胞,利用细胞毒性T细胞(CTL)杀伤实验和自然杀伤细胞(NK)杀伤实验,检测表达US3基因重组腺病毒载体的免疫活性。结果表达US3基因的重组腺病毒r-US3成功构建,r-US3能够明显降低CTL和NK细胞对转染肝细胞的杀伤活性。结论表达US3基因腺病毒载体在一定程度上能够介导转染肝细胞的免疫逃逸,降低机体免疫系统对转染肝细胞的排斥反应。 展开更多

关键词 免疫逃逸 重组腺病毒 US3 细胞毒性t淋巴细胞(ctl) 自然杀伤细胞(NK)

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同种抗原特异性T淋巴细胞克隆方法的建立

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作者 唐功耀 乔军 赵武述 《安徽医科大学学报》 CAS 2001年第2期107-110,共4页

目的　建立抗原特异性T淋巴细胞克隆的方法。方法　以供体脾细胞作同种抗原 ,刺激受体外周血单个核细胞 ,用有限稀释法进行T淋巴细胞克隆。结果　获得 3个T淋巴细胞株。经免疫组化分析 ,有 2个细胞株为CD3+CD4-CD8+ 。另一个细胞株为CD3... 目的　建立抗原特异性T淋巴细胞克隆的方法。方法　以供体脾细胞作同种抗原 ,刺激受体外周血单个核细胞 ,用有限稀释法进行T淋巴细胞克隆。结果　获得 3个T淋巴细胞株。经免疫组化分析 ,有 2个细胞株为CD3+CD4-CD8+ 。另一个细胞株为CD3+ CD4-CD8-。后者经流式细胞仪分析纯度为 97%。抗原特异性检测表明 :用供体细胞刺激 ,克隆T细胞发生增殖作用 ;用无关个体细胞刺激 ,无增殖作用。结论　成功地建立了抗原特异性T淋巴细胞克隆方法。 展开更多

关键词 表位 t淋巴细胞 克隆细胞

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组合四聚体染色和质量细胞仪分析加速T细胞表位图谱分析 被引量：1

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作者 冯娟 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期320-320,共1页

T淋巴细胞在机体免疫功能调节过程中有重要的作用。作为机体特异性免疫应答的参与者,T淋巴细胞主要通过其表面的T细胞受体（T cell receptor,TCR）识别抗原分子。但由于技术条件的限制,目前还不能测定不同个体中,

关键词 t细胞表位 图谱分析 四聚体 机体免疫功能 t淋巴细胞 质量 染色 t细胞受体

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中国人群流行的乙型肝炎病毒特异性CTL表位特点分析 被引量：12

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作者 李晓东 徐东平 +5 位作者 成军 钟彦伟 刘妍 董菁 王琳 张玲霞 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期775-777,共3页

目的研究中国人群中流行的乙型肝炎病毒(HBV)基因型B型和C型特异性CTL表位的序列特点。方法以国外文献报道的13个HBV的CTL表位氨基酸序列为参考序列,分析其与GenBank下载的45条及作者从乙型肝炎病人血清中扩增的另外5条B型或C型CTL表位... 目的研究中国人群中流行的乙型肝炎病毒(HBV)基因型B型和C型特异性CTL表位的序列特点。方法以国外文献报道的13个HBV的CTL表位氨基酸序列为参考序列,分析其与GenBank下载的45条及作者从乙型肝炎病人血清中扩增的另外5条B型或C型CTL表位氨基酸序列的差别。结果与参考序列相比,本研究分析的B型和C型HBV特异性CTL表位氨基酸序列变异发生频率较高。在本研究分析的13个表位中,变异发生率超过70%的表位在B型HBV有4个,分别是表位FLLTRILTI(A0201,S183-191)、VLQAGFFLL(A0201,S188-196)、ILSPFLPLL(A0201,S382-390)和FLPSDFFPSV(A0201,C18-27),C型HBV有2个,分别是表位ILSPFLPLL(A0201,S382-390)和FLPSDFFPSV(A0201,C18-27)。其中文献中研究最多的HBcAg表位18-27(FLPSDFFPSV),在我国流行的B型和C型HBV中表位的变异率分别高达71%和97%。结论中国人群流行的B型和C型HBV特异性CTL表位与国外文献报道的CTL表位相比在大多数位点上都出现变异,并且不同表位的变异率差异很大,在检测CTL数量和功能时应根据这一特点设计实验。 展开更多

关键词 肝炎 乙型 t淋巴细胞 细胞毒性 表位 t淋巴细胞

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