目的探讨Toll样受体4(TLR4)信号通路在细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)所介导的单核细胞白血病细胞株(THP-1)巨噬细胞调节基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-14中的作用机制。方法实验分为对照组:THP-1巨噬细胞;刺激组:THP-1巨噬细胞+E...目的探讨Toll样受体4(TLR4)信号通路在细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)所介导的单核细胞白血病细胞株(THP-1)巨噬细胞调节基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-14中的作用机制。方法实验分为对照组:THP-1巨噬细胞;刺激组:THP-1巨噬细胞+EMMPRIN(1ng/ml)刺激6h;抑制组:THP-1巨噬细胞+TAK-242(5μmol/L)抑制4h,PBS清洗3次,再加EMMPRIN刺激6h。运用qRT-PCR和Western blot检测MMP-9、MMP-14基因;MMP-9、MMP-14和TLR4蛋白表达。结果光学显微镜下观察显示,THP-1单核细胞悬浮生长,呈圆形或类圆形,经100ng/ml佛波酯诱导分化48h,细胞体积增大,可伴有伪足伸出,呈椭圆形、长条梭形或短棒状,95%以上细胞贴壁生长。与对照组比较,刺激组MMP-9、MMP-14基因以及MMP-9、MMP-14和TLR4蛋白表达明显升高,抑制组TLR4蛋白表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与刺激组比较,抑制组MMP-9、MMP-14基因以及MMP-9、MMP-14和TLR4蛋白表达明显下降(4.384±0.732 vs 6.473±0.739,3.178±0.492 vs 4.937±0.538,0.635±0.115 vs 0.832±0.114,0.454±0.067 vs 0.733±0.128,0.206±0.058 vs 0.481±0.086,P<0.05)。结论TLR4信号通路在EMMPRIN所介导的THP-1巨噬细胞上调MMP-9、MMP-14表达中起积极作用。展开更多
目的观察通心络对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织p38 MAPK信号通路、TGF-β1及细胞外基质FN、Col-Ⅳ的影响,探讨其抑制糖尿病肾病肾脏纤维化的作用机制。方法采用自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠建立糖尿病肾病模型,随机分为模型组、通心络...目的观察通心络对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织p38 MAPK信号通路、TGF-β1及细胞外基质FN、Col-Ⅳ的影响,探讨其抑制糖尿病肾病肾脏纤维化的作用机制。方法采用自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠建立糖尿病肾病模型,随机分为模型组、通心络组和缬沙坦组各15只,设C57BL/6J小鼠15只为正常组;造模组连续给药12周,比较各组KK-Ay小鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、体重(body weight,BW)、肾重(kidney weight,KW)、肾重指数=KW/BW;24小时尿微量白蛋白(24 hours urinary microalbumin,24 h m ALB);血清肌酐(serum creatinine,SCr)、血清尿素(Urea)的水平;检测转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、p38、P-p38、纤维连接蛋白(fibronectin,FN),Ⅳ型胶原蛋白(Collagen in Serum-Ⅳ,Col-Ⅳ)等表达水平。结果与正常组比较,模型组空腹血糖、体重、肾重、肾重指数、24h m ALB、SCr、Urea均明显升高(P!0.05),肾组织P-p38、FN、Col-Ⅳ蛋白表达升高(P<0.05)。与模型组比较,通心络组和缬沙坦组FBG无明显变化(P>0.05);体重、肾重减轻、肾重指数、24h m ALB、SCr、Urea均降低(P<0.05),肾组织P-p38、FN、Col-Ⅳ蛋白表达减少(P<0.05),但给药组间无显著差异(P>0.05)。各组间p38表达均无统计学差异(P>0.05)。结论提示通心络无明显降糖作用;通心络可降低自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠24 h m ALB、SCr、Urea,保护肾功能;通心络可抑制TGF-β1、P-p38蛋白的过度表达,减少FN、Col-Ⅳ等细胞外基质在肾组织的沉积,从而抑制肾脏的纤维化,延缓糖尿病肾病的发生发展。展开更多
文摘目的探讨Toll样受体4(TLR4)信号通路在细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)所介导的单核细胞白血病细胞株(THP-1)巨噬细胞调节基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-14中的作用机制。方法实验分为对照组:THP-1巨噬细胞;刺激组:THP-1巨噬细胞+EMMPRIN(1ng/ml)刺激6h;抑制组:THP-1巨噬细胞+TAK-242(5μmol/L)抑制4h,PBS清洗3次,再加EMMPRIN刺激6h。运用qRT-PCR和Western blot检测MMP-9、MMP-14基因;MMP-9、MMP-14和TLR4蛋白表达。结果光学显微镜下观察显示,THP-1单核细胞悬浮生长,呈圆形或类圆形,经100ng/ml佛波酯诱导分化48h,细胞体积增大,可伴有伪足伸出,呈椭圆形、长条梭形或短棒状,95%以上细胞贴壁生长。与对照组比较,刺激组MMP-9、MMP-14基因以及MMP-9、MMP-14和TLR4蛋白表达明显升高,抑制组TLR4蛋白表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与刺激组比较,抑制组MMP-9、MMP-14基因以及MMP-9、MMP-14和TLR4蛋白表达明显下降(4.384±0.732 vs 6.473±0.739,3.178±0.492 vs 4.937±0.538,0.635±0.115 vs 0.832±0.114,0.454±0.067 vs 0.733±0.128,0.206±0.058 vs 0.481±0.086,P<0.05)。结论TLR4信号通路在EMMPRIN所介导的THP-1巨噬细胞上调MMP-9、MMP-14表达中起积极作用。
文摘目的观察通心络对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织p38 MAPK信号通路、TGF-β1及细胞外基质FN、Col-Ⅳ的影响,探讨其抑制糖尿病肾病肾脏纤维化的作用机制。方法采用自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠建立糖尿病肾病模型,随机分为模型组、通心络组和缬沙坦组各15只,设C57BL/6J小鼠15只为正常组;造模组连续给药12周,比较各组KK-Ay小鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、体重(body weight,BW)、肾重(kidney weight,KW)、肾重指数=KW/BW;24小时尿微量白蛋白(24 hours urinary microalbumin,24 h m ALB);血清肌酐(serum creatinine,SCr)、血清尿素(Urea)的水平;检测转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、p38、P-p38、纤维连接蛋白(fibronectin,FN),Ⅳ型胶原蛋白(Collagen in Serum-Ⅳ,Col-Ⅳ)等表达水平。结果与正常组比较,模型组空腹血糖、体重、肾重、肾重指数、24h m ALB、SCr、Urea均明显升高(P!0.05),肾组织P-p38、FN、Col-Ⅳ蛋白表达升高(P<0.05)。与模型组比较,通心络组和缬沙坦组FBG无明显变化(P>0.05);体重、肾重减轻、肾重指数、24h m ALB、SCr、Urea均降低(P<0.05),肾组织P-p38、FN、Col-Ⅳ蛋白表达减少(P<0.05),但给药组间无显著差异(P>0.05)。各组间p38表达均无统计学差异(P>0.05)。结论提示通心络无明显降糖作用;通心络可降低自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠24 h m ALB、SCr、Urea,保护肾功能;通心络可抑制TGF-β1、P-p38蛋白的过度表达,减少FN、Col-Ⅳ等细胞外基质在肾组织的沉积,从而抑制肾脏的纤维化,延缓糖尿病肾病的发生发展。
基金supported in part by National Institute on Drug Abuse(NIDA)grants K01 DA029643 and R01DA016750National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism(NIAAA)grants R21 AA021380 and R21 AA020319+9 种基金the National Alliance for Research on Schizophrenia and Depression(NARSAD)Award 17616(L.Z.)ABMRF/The Foundation for Alcohol Research(L.Z.)Funding and other supports for phenotype and genotype data were provided through the National Institutes of Health(NIH)Genes,Environment and Health Initiative(GEI)(U01HG004422,U01HG004436 and U01HG004438)the GENEVA Coordinating Center(U01HG004446)the NIAAA(U10AA008401,R01AA013320,P60AA011998)the NIDA(R01DA013423)the National Cancer Institute(P01 CA089392)the NIH contract‘High throughput genotyping for studying the genetic contributions to human disease’(HHSN268200782096C)the Center for Inherited Disease Research(CIDR)the National Center for Biotechnology Information.Genotyping was performed at the Johns Hopkins University Center for Inherited Disease Research