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题名嗜酸乳杆菌细胞壁蛋白酶的提取优化
被引量：3
- 1
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作者
李敏
潘道东
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机构
南京师范大学国家乳品加工技术研发分中心
宁波大学生命科学与生物工程学院
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出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2011年第23期260-265,共6页
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基金
国家自然科学基金项目(30972130)
江苏省"十一五"科技支撑计划项目(BE2009366)
国家农业科技成果转化基金项目(2009GB2C220412)
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文摘
为了获得较高酶活力的嗜酸乳杆菌细胞壁蛋白酶(CEP),对嗜酸乳杆菌CEP的提取方法进行优化。经过比较超声波破碎法、Ca2+-free法、溶菌酶裂解3种方法,确认溶菌酶裂解法结合使用非离子清洁剂破壁是提取嗜酸乳杆菌CEP的最佳方法。在单因素试验的基础上,采用正交试验对嗜酸乳杆菌CEP的提取工艺进行优化,得出嗜酸乳杆菌CEP的最佳提取方法:用裂解液(50mmol/L Tris-HCl、100mmol/L NaCl、TritonX-100添加量1%、1.5mg/mL溶菌酶,pH 7.8)悬浮菌体(20mL/g),37℃保温3h,4℃、4500r/min离心20min,取上清液。溶菌酶裂解法提取CEP过程中各因素对CEP提取效果的影响依次为:溶菌酶质量浓度>裂解pH值>TirtonX-100添加量>保温时间。
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关键词
嗜酸乳杆菌
细胞壁蛋白酶(cep)
提取
-
Keywords
Lactobacillus acidophilus
cell-envelope proteinase（cep）
extraction
-
分类号
TS252.42
[轻工技术与工程—农产品加工及贮藏工程]
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题名瑞士乳杆菌细胞壁蛋白酶提取研究
被引量：7
- 2
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作者
郭宇星
潘道东
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机构
南京师范大学金陵女子学院食品科学与工程系
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出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2007年第10期421-424,共4页
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基金
国家自然科学基金项目(30571311)
江苏省自然科学基金项目(BK2005137)
乳品科学教育部重点实验室主任基金项目(KLDS2006-10A)
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文摘
瑞士乳杆菌细胞壁蛋白酶是其蛋白水解系统中一个非常重要的蛋白酶。本实验采用螯合Ca2+的方法对瑞士乳杆菌细胞壁蛋白酶的提取进行了研究,并确定了细胞壁蛋白酶提取的最佳实验条件。菌体用含有30mmol/LCaCl2的50mmol/LTris-HCl(pH7.10)缓冲液洗涤三次,然后用含有45mmol/LEDTA-Na2的50mmol/LTris-HCl(pH6.50)缓冲液悬浮,43℃保温,蛋白酶就会释放出来,90min后取出离心(4500r/min,20min,4℃),上清液即为粗酶液。粗酶液再经DEAE Sepharose CL-6B纯化,比酶活力提高了1.8倍。
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关键词
瑞士乳杆菌
细胞壁蛋白酶
蛋白酶活力
-
Keywords
Lactobacillus helveticus
cell-envelope proteinase （cep）
proteinase activity
-
分类号
TS252.1
[轻工技术与工程—农产品加工及贮藏工程]
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题名乳酸乳球菌细胞壁蛋白酶的分离纯化
被引量：7
- 3
-
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作者
郭宇星
潘道东
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机构
南京师范大学乳品生物技术研究所
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出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2008年第10期388-391,共4页
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基金
国家自然科学基金项目(30571311)
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文摘
本研究确定了分离纯化乳酸乳球菌细胞壁蛋白酶(CEP)的最佳技术路线。用裂解液(50mmol/LTris-HCl,2mmol/LEDTA-Na2,100mmol/LNaCl,0.5%Tritonx-100,1mg/ml溶菌酶,pH8.5)悬浮菌体(20ml/g),37℃下保温3h,离心后取上清液即为粗酶液。粗酶液通过45%硫酸铵沉淀,DEAE-SephadexA-25和Sephacryl-S-300HR两步层析,可以得到纯化的细胞壁蛋白酶。蛋白酶提纯倍数达到74.048%,最后回收率为14.865%,PAGE电泳检测为一条带,SDS-PAGE检测蛋白酶为单体结构,分子量大约为53kD。用纯化后CEP酶解乳清蛋白,酶解液ACE抑制率为45%。
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关键词
ACE抑制活性
乳酸乳球菌
细胞壁蛋白酶
-
Keywords
ACE inhibitory activity
Lactococcus lactis subsp, lactis
cell wall proteinase
-
分类号
TS201.3
[轻工技术与工程—食品科学]
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-
题名保加利亚乳杆菌细胞壁蛋白酶基因克隆及结构分析
被引量：1
- 4
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作者
张妍
肖明
张爽
谢凤英
张兰威
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机构
东北农业大学食品学院
中国海洋大学食品科学与工程学院
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出处
《食品工业科技》
CAS
北大核心
2019年第20期107-111,119,共6页
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基金
国家自然科学基金青年项目(31601493)
中国博士后科学基金项目(2018M631901)
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文摘
本文以保加利亚乳杆菌基因组为模板,利用PCR的方法扩增细胞壁蛋白酶基因(prtB),并且利用GeneBank数据库和生物软件对prtB进行对比和生物信息学分析,预测基因片段的相似性、表达出蛋白酶的蛋白大小、二级结构和膜结合性等性质。结果表明,测序后比对发现扩增片段与模板保加利亚乳杆菌prtB相似性为100%,证明基因片段未发生突变;prtB与德氏乳杆菌德氏亚种基因相似性为96%,与德氏乳杆菌乳酸亚种(Lactobacillus delbrueckii)基因相似性为82%,具有一定的保守性和特异性。prtB基因G+C含量为47.49%,A+T含量为52.51%,编码1831个氨基酸,分子量为3338.7 kD,将此蛋白命名为PrtB,等电点pI为8.76。保加利亚乳杆菌的PrtB为亲水性稳定蛋白,总平均亲水性为-0.583,有28个Ser、9个Thr和25个Tyr可能成为蛋白激酶磷酸化的作用位点,该蛋白为细胞外蛋白,其二级结构以不规则卷曲为主,其值为55.11%,α-螺旋和β-折叠仅占21.30%和23.59%。
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关键词
保加利亚乳杆菌
细胞壁蛋白酶
基因克隆
结构分析
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Keywords
Lactobacillus bulgaricus
cell wall proteinase
gene cloning
structural analysis
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分类号
TS201.2
[轻工技术与工程—食品科学]
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题名发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶的提取
被引量：2
- 5
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作者
朱姁
潘道东
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机构
南京师范大学国家乳品加工技术研发分中心
宁波大学生命科学与生物工程学院
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出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010年第19期268-272,共5页
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文摘
确定提取发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶的最佳方法和最佳提取条件。在单因素试验的基础上,采用多指标正交试验设计和综合平衡分析法研究溶菌酶结合非离子表面活性剂法提取发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶的裂解液成分和提取条件。结果表明:裂解液的成分为50mmol/L Tris-HCl、150mmol/L NaCl、体积分数3%吐温-20、2mg/mL溶菌酶、pH8.9;提取条件为裂解液与菌体的比例10:1(V/m)、保温时间5h、保温温度37℃时酶比活力达38.957U/mg,此时可最大效率的获得发酵乳杆菌的细胞壁蛋白酶。
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关键词
发酵乳杆菌
细胞壁蛋白酶
提取
-
Keywords
Lactobacillus fermentum
cell-envelope proteinase
extraction
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分类号
TS201.3
[轻工技术与工程—食品科学]
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题名发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究
- 6
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作者
朱姁
潘道东
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机构
南京师范大学国家乳品加工技术研发分中心
宁波大学生命科学与生物工程学院
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出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2011年第17期262-268,共7页
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基金
国家自然科学基金项目(30972130)
江苏省科技支撑计划项目(BE2009366)
浙江省重大科技专项(2010C12015)
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文摘
研究分离纯化发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶(cell envelope proteinase,CEP)的方法及其酶学性质。用50mmol/LTris-HCl缓冲液(pH7.8)悬浮菌体,进行超声波破碎,细胞质量浓度为0.06g/mL,破碎功率330W,工作220次(工作时间3s,间隔时间5s),离心取上清液即为粗酶液。60%硫酸铵沉淀,Sephacryl S-300 HR凝胶层析,Native-PAGE割胶回收纯化发酵乳杆菌的CEP。用纯化的CEP酶解脱脂乳,酶解液ACE(angiotensin I-converting enzyme)抑制率为50%。SDS-PAGE检测CEP分子质量为32.5kD,最适酶反应温度为41℃,最适酶反应pH值为8.0。Mg2+、Co2+、Ca2+对CEP活性有激活作用;Zn2+、Ni2+、PMSF、EDTA对CEP活性有抑制作用,说明CEP为丝氨酸蛋白酶且酶的活性中心结构的维持与金属离子有关。
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关键词
发酵乳杆菌
细胞壁蛋白酶
纯化
酶学性质
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Keywords
Lactobacillus fermentum
cell envelope protease
purification
enzymatic properties
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分类号
TS201.3
[轻工技术与工程—食品科学]
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题名水稻纹枯病菌胞外蛋白酶特性研究
被引量：2
- 7
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作者
范文艳
文景芝
马建
陈瑾
石园园
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机构
黑龙江八一农垦大学农学院
东北农业大学农学院
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出处
《植物保护》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期55-59,共5页
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基金
黑龙江省高等学校青年学术骨干支持计划项目(1155G39)
校博士启动基金
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文摘
植物病原菌产生蛋白水解酶被认为是病原菌侵染寄主的一个重要策略。作者对水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani Kühn)产生的胞外蛋白酶的特性进行了研究。结果表明,水稻纹枯病菌产生一个分子量约为49.5ku的胞外蛋白酶。该酶对胰蛋白酶专一性底物Benz-Phe-Val-Arg-NA有较高的活性,并能从羧基端降解Arg和Lys。胰蛋白酶抑制剂对该酶活性有较强的抑制作用,表明该蛋白酶是一种类胰蛋白酶。在离体试验下,该蛋白酶可以降解水稻细胞壁蛋白并释放羟脯氨酸。SDS-PAGE电泳分析显示,至少有4个多肽被降解,分子量范围分别在14.4～20.1、20.1～31ku和31～43ku范围内。说明该胞外蛋白酶具有降解水稻细胞壁的能力,因此,该蛋白酶可能在水稻纹枯病菌的致病过程中起重要作用。
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关键词
水稻纹枯病菌
细胞壁蛋白
胞外蛋白酶
致病性
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Keywords
Rhizoctonia solani
cell wall protein
extracellular protease
pathogenicity
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分类号
S435.111.42
[农业科学—农业昆虫与害虫防治]
Q946.5
[生物学—植物学]
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题名瑞士乳杆菌发酵乳制备ACE抑制肽的条件优化
被引量：4
- 8
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作者
梁美艳
陈庆森
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机构
天津市食品生物技术重点实验室
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出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2009年第21期155-160,共6页
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基金
国家自然科学基金项目(30771524)
天津市科技支撑计划重点项目(09ZCKFNC00700)
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文摘
本研究以脱脂乳为主要原料,对瑞士乳杆菌发酵产生血管紧张素转化酶(angiotensinI-converting enzyme,ACE)抑制肽工艺条件进行研究。通过单因素试验和响应面试验设计,确定瑞士乳杆菌发酵脱脂乳生产ACE抑制肽的最佳工艺条件为:脱脂乳浓度9.67%(m/V)、底物灭菌时间30min、接种量3%(V/V),温度38.82℃、发酵时间6.26h,测得ACE抑制率为92.26%。研究结果证实利用发酵法生产乳源ACE抑制活性肽对控制高血压具有重要意义。
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关键词
瑞士乳杆菌
ACE抑制肽
细胞壁蛋白酶
响应面法
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Keywords
Lactobacillus helveticus
ACE inhibitory peptide
response surface methodology
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分类号
TS201.21
[轻工技术与工程—食品科学]
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