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绵羊肺源大肠杆菌cyaA基因缺失对小鼠肺泡巨噬细胞感染的影响 被引量:5
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作者 操义恒 王子杰 +9 位作者 王巧梅 党士荣 张丽媛 马雪 张乾义 周霞 黄新 张星星 吴桐忠 钟发钢 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期295-301,共7页
为研究cyaA基因编码的腺苷酸环化酶(AC)在绵羊肺源大肠杆菌XJ10感染小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S)中的作用,本研究以绵羊肺源大肠杆菌XJ10野毒株(XJ10WT)为对照,通过荧光定量PCR检测XJ10 cyaA基因缺失株(XJ10ΔcyaA)在感染MH-S细胞过程中与黏... 为研究cyaA基因编码的腺苷酸环化酶(AC)在绵羊肺源大肠杆菌XJ10感染小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S)中的作用,本研究以绵羊肺源大肠杆菌XJ10野毒株(XJ10WT)为对照,通过荧光定量PCR检测XJ10 cyaA基因缺失株(XJ10ΔcyaA)在感染MH-S细胞过程中与黏附侵袭相关的motA、crl、fimH、pap基因的m RNA转录水平,结果显示,与XJ10WT相比,XJ10ΔcyaA在感染MH-S细胞过程中与黏附侵袭相关的motA、crl、fimH、pap基因的m RNA转录水平在感染后0和6 h时均极显著降低(P<0.001),crl和pap基因的m RNA转录水平分别在2 h和12 h时均极显著上调(P<0.001)。进一步通过吉姆萨染色观察XJ10WT和XJ10ΔcyaA黏附MH-S细胞情况,采用细胞和细菌共培养方式分析XJ10ΔcyaA对MH-S细胞的黏附及侵袭能力,并通过CCK-8法分析细菌对MH-S细胞增殖的抑制情况。结果显示,XJ10ΔcyaA和XJ10WT在感染后3 h黏附MH-S细胞的活菌数量达峰值并持续至5 h,随后逐渐下降,在感染后1 h~5 h的时间段内,XJ10ΔcyaA黏附MH-S细胞的活菌数量均极显著低于XJ10WT(P<0.001)。XJ10ΔcyaA和XJ10WT侵袭MH-S细胞的活菌数量随着感染时间的延长逐渐升高,5 h时达到峰值,后持续下降,XJ10ΔcyaA在感染后1 h~10 h侵袭MH-S细胞的活菌数量均显著或极显著低于XJ10WT。在感染MH-S细胞后的3 h~6 h,XJ10ΔcyaA对细胞增殖的抑制率均极显著低于XJ10WT(P<0.001)。上述结果首次表明,cyaA基因表达的AC可以显著上调绵羊肺源E.coli与黏附侵袭相关基因的转录水平,并参与绵羊肺源E.coli对MH-S细胞的黏附与侵袭,抑制MH-S细胞增殖。本研究为绵羊肺源E.coli致病机制的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 绵羊肺源大肠杆菌 cyaA基因 小鼠肺泡巨噬细胞 黏附及侵袭 细胞增殖抑制率
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重铬酸钾对人肺腺癌A549细胞hMGMT蛋白表达的影响 被引量:1
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作者 罗磊 任丽敏 +1 位作者 李时恩 吴逸明 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2009年第3期572-575,共4页
目的:研究不同浓度重铬酸钾(K2Cr2O7)对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制效应以及对O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(hMGMT)蛋白表达的影响。方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定9种不同浓度K2Cr2O7(0.000、0.010、0.040、0.160、0.312、0.625... 目的:研究不同浓度重铬酸钾(K2Cr2O7)对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制效应以及对O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(hMGMT)蛋白表达的影响。方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定9种不同浓度K2Cr2O7(0.000、0.010、0.040、0.160、0.312、0.625、1.250、2.500、5.000μmol/L)对A549细胞的增殖抑制率;用损伤修复试验观察在不同浓度K2Cr2O7作用下人肺腺癌A549细胞的划痕修复情况;以β-actin为参照,应用Western blotting技术检测不同浓度K2Cr2O7对人肺腺癌A549细胞hMGMT表达的影响。结果:MTT比色法检测显示,大于0.625μmol/L浓度组K2Cr2O7可抑制细胞活性,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。损伤修复试验显示,与空白对照组比较,0.625、1.250、2.500和5.000μmol/L的K2Cr2O7抑制细胞损伤修复,而0.312、0.160、0.040μmol/L的K2Cr2O7促进细胞损伤修复。Western blotting显示,0.312、0.160、0.040μmol/L的K2Cr2O7对hMGMT蛋白的表达具有促进作用,0.625、1.250、2.500和5.000μmol/L的K2Cr2O7对hMGMT蛋白的表达具有抑制作用。结论:低浓度的K2Cr2O7对人肺腺癌A549细胞的增殖、损伤修复和hMGMT蛋白的表达呈现低剂量兴奋效应;高浓度K2Cr2O7对hMGMT蛋白的表达则呈现抑制作用。 展开更多
关键词 重铬酸钾 人肺腺癌A549细胞 hMGMT 细胞增殖抑制率
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东革内酯通过InR-PI3K-mTOR-Bcl-2通路诱导斜纹夜蛾卵巢细胞凋亡
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作者 温雪梅 秦子昕 +4 位作者 路伟 黄建辉 欧阳嘉敏 万妍 邵雪花 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期108-117,共10页
本文研究了东革内酯抑制斜纹夜蛾卵巢细胞(SL-221)增殖及凋亡的机理。首先,采用CCK-8法检测东革内酯对细胞增殖的抑制率;其次,利用流式细胞术测定东革内酯对SL-221细胞周期、凋亡和线粒体膜电位的影响;最后,通过RT-qPCR技术检测凋亡相... 本文研究了东革内酯抑制斜纹夜蛾卵巢细胞(SL-221)增殖及凋亡的机理。首先,采用CCK-8法检测东革内酯对细胞增殖的抑制率;其次,利用流式细胞术测定东革内酯对SL-221细胞周期、凋亡和线粒体膜电位的影响;最后,通过RT-qPCR技术检测凋亡相关基因SL-p53、SL-Cytochrome C、SL-InR、SL-Bcl-2、SL-mTOR和SL-PI3K的mRNA表达情况。结果表明:东革内酯对SL-221细胞有明显的增殖抑制活性,且与浓度呈正相关,48 h的IC50为1.98μg/mL;流式细胞术检测到东革内酯可将SL-221细胞周期阻滞于G2/M期,降低线粒体膜电位,同时诱导细胞凋亡;RT-qPCR检测发现东革内酯可诱导凋亡标志基因SL-p53、SL-InR和SL-Cytochrome C的表达显著上调(P<0.05),同时抑制凋亡抑制因子SL-Bcl-2的表达,而细胞凋亡信号通路上游的SL-mTOR和SL-PI3K基因表达均显著下调(P<0.05)。综上,东革内酯可显著抑制SL-221细胞的增殖活性,并通过InR-PI3K-mTOR-Bcl-2信号通路诱导其凋亡。 展开更多
关键词 东革内酯 斜纹夜蛾 细胞增殖抑制率 细胞凋亡
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抗肿瘤活性青蛤多肽的提取工艺研究 被引量:3
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作者 闫海强 滕芳芳 +3 位作者 刘志新 黄芳芳 杨最素 丁国芳 《安徽农业科学》 CAS 2014年第12期3576-3577,3579,共3页
[目的]探究具有抗肿瘤活性的青蛤多肽的最佳提取工艺路线.[方法]选择胰蛋白酶酶解青蛤,以酶解液对PC-3细胞增殖抑制率(IR)为指标,研究料液比、温度、pH、加酶量和酶解时间对多肽提取率的影响,探讨最佳工艺,并采用超滤及G25洗脱分离纯... [目的]探究具有抗肿瘤活性的青蛤多肽的最佳提取工艺路线.[方法]选择胰蛋白酶酶解青蛤,以酶解液对PC-3细胞增殖抑制率(IR)为指标,研究料液比、温度、pH、加酶量和酶解时间对多肽提取率的影响,探讨最佳工艺,并采用超滤及G25洗脱分离纯化提取液.[结果]当温度为45℃、pH为7.0、料液比为1∶3、酶解时间为6h、加酶量为300 U/g时,分子量为3~5 kD青蛤提取液的抗肿瘤活性最好;分离纯化后在280 nm波长处得到3个峰,其中峰1和峰2成分抗肿瘤活性显著.[结论]以细胞增殖抑制率为指标可以确定青蛤多肽的提取及优化工艺路线. 展开更多
关键词 青蛤多肽 细胞增殖抑制率 分离纯化
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