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题名CTLA4Ig重组腺病毒载体的构建与体外表达
被引量：5
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作者
郭小荑
邓宇斌
陆才生
李树浓
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机构
中山大学中山医学院病理生理学教研室
中山大学附属第三医院风湿科
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出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第5期585-589,T002,共6页
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基金
广东省自然科学基金资助项目 (No.A10 16 89)
中法合作基金资助项目 (No.PRAB0 1- 0 7)
+1 种基金
广东省卫生厅基金资助项目 (No .4 2 12 0 6 4)
广东省科技计划项目(2 0 0 2C5 0 5 0 10 4 )
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文摘
目的 :构建含有CTLA4Ig基因的重组腺病毒载体 ,为下一步在动物模型体内表达和基因治疗提供基础。方法 :自行设计一对分别含有BglⅡ及HindⅢ酶切位点的CTLA4Ig基因上下游引物 ,以质粒PCDNA3 0 /CTLA4Ig为模板 ,通过PCR扩增获得CTLA4Ig基因全部序列。片段回收以后经BglⅡ及HindⅢ双酶切 ,定向插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack -CMV的启动子下游BglⅡ及HindⅢ位点之间 ,获得重组质粒pAdTrack -CTLA4Ig。通过BglⅡ /HindⅢ双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后 ,将正确重组体pAdTrack -CTLA4Ig与腺病毒骨架质粒pAdEasy - 1共转化BJ5 183细菌。同源重组后用选择性培养基筛选阳性克隆 ,提取质粒用脂质体介导转染 2 93细胞 ,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及PCR扩增目的基因等方法鉴定重组的腺病毒。结果 :成功构建了含有CTLA4Ig基因的重组腺病毒 ,病毒滴度为 1 6 5× 10 12 PFU/L。结论 :该重组腺病毒的构建为下一步研究其在哺乳动物细胞内表达、研究CTLA4Ig的生物学活性及移植排斥、自身免疫病的基因治疗提供了一定的基础。
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关键词
CTLA4Ig重组腺病毒载体
构建
体外表达
T淋巴细胞
细胞塞件
免疫球蛋白
基因治疗
移植排斥
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Keywords
T-lymphocytes,cytotoxic
Immunoglobulins
Adenoviral vector
Gene therapy
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分类号
R392.4
[医药卫生—免疫学]
R394
[医药卫生—医学遗传学]
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