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人支气管上皮细胞c-Ha-ras^(V12G)基因转染细胞系促癌剂检测模型的建立
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作者 吴涛 印木泉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期54-56,共3页
目的 :建立一个新的促癌剂检测模型。 方法 :采用电穿孔法 ,将人类突变的 c- Ha- ras V1 2 G基因转入人支气管上皮细胞BEAS- 2 B中 ,将获得的 G418抗性 (G418r)单克隆细胞株用佛波醇酯 (PMA)处理 ,并选用克隆形成率、锚着独立性生长及... 目的 :建立一个新的促癌剂检测模型。 方法 :采用电穿孔法 ,将人类突变的 c- Ha- ras V1 2 G基因转入人支气管上皮细胞BEAS- 2 B中 ,将获得的 G418抗性 (G418r)单克隆细胞株用佛波醇酯 (PMA)处理 ,并选用克隆形成率、锚着独立性生长及血清抗性等表型改变对受试细胞进行了恶性程度检测。 结果 :(1)在促癌剂 PMA作用下 ,BEAS- 2 B基因转染细胞发生了恶性转化 ;(2 )表达突变 ras基因的上皮细胞 ,在大剂量 PMA(>1μmol)的急性刺激 (2 4h)下 ,可诱导细胞死亡 ;(3)随着细胞恶性程度的增加 ,某些促癌剂的促细胞分化作用将减弱 ,并有生长刺激作用。 结论 :该模型可用于促癌剂的检测及促癌作用机制研究。 展开更多
关键词 基因细胞 佛波醇酯 促癌剂 支气管上皮细胞
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人胚肺成纤维细胞c-Ha-ras^(V12G)基因转染细胞系促癌剂检测模型的建立
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作者 吴涛 印木泉 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期306-310,共5页
为建立一个促癌剂检测模型 ,采用电穿孔法 ,将突变的c Ha rasV12G 基因转入人胚肺成纤维细胞WI 38中 ,将获得的G4 18抗性 (G4 18r)单克隆细胞株进行DNADot 印迹及RT PCR分析后 ,进一步用佛波醇酯 (PMA)处理 ,并选用克隆形成率 ,锚着独... 为建立一个促癌剂检测模型 ,采用电穿孔法 ,将突变的c Ha rasV12G 基因转入人胚肺成纤维细胞WI 38中 ,将获得的G4 18抗性 (G4 18r)单克隆细胞株进行DNADot 印迹及RT PCR分析后 ,进一步用佛波醇酯 (PMA)处理 ,并选用克隆形成率 ,锚着独立性生长及裸鼠成瘤性等表型改变对受试细胞进行了恶性程度检测 .结果表明 :在促癌剂PMA作用下 ,WI38基因转染细胞发生了恶性转化 ,c Ha rasV12G基因使细胞对PMA的促癌敏感性增强 .由此可见 。 展开更多
关键词 基因细胞 促癌剂 佛波醇酯 检测模型 人胚肺成纤维细胞
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用荧光定量PCR方法检测转染细胞中外源基因的拷贝数 被引量:6
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作者 李影 何蕴韶 +1 位作者 程刚 李虎 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第1期8-10,共3页
【目的】探讨采用荧光定量PCR技术检测脑源性神经营养因子 (BDNF)基因转染细胞 (PcDNA3 1(+) /BDNF/CHO)中BDNF的拷贝数。【方法】分别以同等质量的PcDNA3 1(+) /BDNF/CHO ,PcDNA3 1(+) /CHO(空载体转染细胞 )及CHO细胞的DNA为模板 ,在P... 【目的】探讨采用荧光定量PCR技术检测脑源性神经营养因子 (BDNF)基因转染细胞 (PcDNA3 1(+) /BDNF/CHO)中BDNF的拷贝数。【方法】分别以同等质量的PcDNA3 1(+) /BDNF/CHO ,PcDNA3 1(+) /CHO(空载体转染细胞 )及CHO细胞的DNA为模板 ,在PE5 70 0PCR仪上进行荧光定量PCR分析。每个样本共检测 30次 ,结果采用 q检验分析。【结果】PcDNA3 1(+) /BDNF/CHO细胞、PcDNA3 1(+) /CHO和CHO细胞株中BDNF的拷贝数分别为 95 16 4± 12 ,316 2 2± 10 ,316 2 2± 11。q检验结果显示前者与后两者之间有统计学意义 ,P <0 .0 5 ,而后两者之间无统计学意义 ,即 P >0 .0 5。PcDNA 3 1(+) /BDNF/CHO细胞株中BDNF的拷贝数是后二者的 3倍 ,而后两者的拷贝数相同。【结论】BDNF转染细胞株中外源BDNF基因是以 2个拷贝的比例整合到宿主细胞基因组中去的。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 拷贝数 基因细胞 BDNF 基因诊断
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叶酸受体基因转染细胞诱导后的类脂改变对叶酸摄取的影响
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作者 唐建华 STEV.,VL 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第3期457-461,共5页
用胆固醇合成抑制剂Lovastatin(洛伐他汀,暂译名)和神经鞘脂类合成抑制剂FumonisinB1(抑鞘脂素B1,暂译名)处理能表达糖基化磷脂酰肌醇锚定叶酸受体(GPIFR)的基因转染细胞(FRα·TRVB-... 用胆固醇合成抑制剂Lovastatin(洛伐他汀,暂译名)和神经鞘脂类合成抑制剂FumonisinB1(抑鞘脂素B1,暂译名)处理能表达糖基化磷脂酰肌醇锚定叶酸受体(GPIFR)的基因转染细胞(FRα·TRVB-1)3d,发现前者可使细胞的胆固醇含量减少约35%,而后者可使神经鞘脂类减少44%以上;同时发现,处理组细胞结合叶酸的能力减少约40%,其对5-甲基四氢叶酸的摄入率减少逾80%.这主要是由于细胞质膜中胆固醇和神经鞘脂类含量减少,从而导致膜内GPIFR结合叶酸功能降低及GPIFR摄入叶酸的内化过程障碍所致. 展开更多
关键词 叶酸受体 类脂 基因细胞 叶酸摄取
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HIM3-4:一个以CD33转染细胞为免疫原制备的CD33单克隆抗体
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作者 佘鸣 沈德诚 +2 位作者 汤美华 周立 陈璋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1994年第3期18-21,共4页
应用鼠-鼠杂交瘤技术,以CD33+转染细胞为免疫原制备出一株CD33单克隆抗体(单抗)命名为HIM3-4(IgG1).经第五届国际人类白细胞分化抗原会议进一步正式命名为CD33单抗.本文首次在国内报道,以基因转染细胞... 应用鼠-鼠杂交瘤技术,以CD33+转染细胞为免疫原制备出一株CD33单克隆抗体(单抗)命名为HIM3-4(IgG1).经第五届国际人类白细胞分化抗原会议进一步正式命名为CD33单抗.本文首次在国内报道,以基因转染细胞作为免疫原成功地制备针对其因表达产物的单抗. 展开更多
关键词 基因细胞 抗体.单克隆 CD33
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共染ANP对GH_4和AtT_(20)细胞肾素基因表达分泌的影响
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作者 苏永新 付爱芬 +1 位作者 张梅 王莉 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1994年第4期304-307,共4页
本文应用现代基因共同转染技术,首次对GH4和AtT20细胞进行了重组大鼠ANP和人肾素基因的共同转染,建立了表达细胞模型。并对其表达产物进行分析研究。文章着重分析研究了ANP对肾素基因的表达产物的形成与分泌的调节作用... 本文应用现代基因共同转染技术,首次对GH4和AtT20细胞进行了重组大鼠ANP和人肾素基因的共同转染,建立了表达细胞模型。并对其表达产物进行分析研究。文章着重分析研究了ANP对肾素基因的表达产物的形成与分泌的调节作用。AI形成放免检测结果表明:转染细胞的表达是有效的。转染的GH4能有效地表达分泌肾素原;转染的AtT20细胞则不仅能形成肾素原,而且能分泌具有活性的肾素。ANP转染的实验组不仅显示有明显的拮抗Forskolin的刺激作用,而且ANP对肾素与肾素原的形成分泌有抑制作用,其中抑制肾素分泌的效能大于肾素原的分泌。实验证明,转染基因的表达细胞是有效研究肾素基因表达、分泌等调节的细胞模型。 展开更多
关键词 肾素 ANP 基因细胞 表达分泌调节 病理生理
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外源性Nurr1基因过表达对SK-N-SH细胞分化作用的研究 被引量:4
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作者 赵咏梅 张海燕 +4 位作者 刘扬 邹西峰 赵春礼 苏玉金 徐群渊 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期23-28,共6页
为研究外源性Nurr1基因过表达对转染细胞的作用,探讨Nurr1基因调控多巴胺能神经元分化的机制。本研究应用:(1)pBK- RSV -Nurr1质粒经脂质体法转染SK- N- SH细胞,G418筛选;用RT PCR和免疫细胞化学方法检测基因转染细胞Nurr1mRNA及Nurr1... 为研究外源性Nurr1基因过表达对转染细胞的作用,探讨Nurr1基因调控多巴胺能神经元分化的机制。本研究应用:(1)pBK- RSV -Nurr1质粒经脂质体法转染SK- N- SH细胞,G418筛选;用RT PCR和免疫细胞化学方法检测基因转染细胞Nurr1mRNA及Nurr1蛋白的表达; (2)all- trans- RA、9- cis- RA、forskolin诱导基因转染细胞,RT PCR及免疫荧光细胞化学方法检测基因转染细胞MAP2 和TH的表达。结果显示: (1)经RT -PCR检测,基因转染细胞表达Nurr1mRNA;免疫细胞化学染色结果显示基因转染细胞表达Nurr1蛋白,说明外源性Nurr1基因在转染细胞内过表达;基因转染细胞形态与正常细胞相比没有明显变化,生长速度略有降低并表达成熟神经元的特异性标识物MAP2,但不表达多巴胺能神经元的特异性标识物TH。(2)尽管RA、forskolin诱导可促进Nurr1基因转染的SK- N- SH细胞进一步向成熟神经元分化,但不能诱导基因转染细胞表达TH。结论:单纯的Nurr1过表达可以促进SK- N- SH细胞向成熟神经元方向分化,但不足以激活TH基因转录。TH基因的转录激活还需要除Nurr1以外的其它细胞(或神经元)的环境或因子的共同作用。 展开更多
关键词 NURR1基因 基因细胞 过表达 SH SK RA 外源性 成熟神经元 RNA
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