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miR-660-3p靶向NFAM1对RSV诱导支气管上皮细胞凋亡及炎症因子分泌的影响 被引量:1
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作者 童珍珍 高雅丽 +3 位作者 许娟娟 黄方 许诣 陈霞 《山东医药》 CAS 2024年第13期30-35,共6页
目的探讨微小RNA-660-3p(miR-660-3p)靶向具有ITAM基序1的NFAT活化蛋白(NFAM1)对呼吸道合胞病毒(RSV)诱导支气管上皮细胞凋亡和炎症因子分泌的影响。方法体外传代培养人支气管上皮细胞16HBE。取对数生长期16HBE细胞,随机分为对照组、RS... 目的探讨微小RNA-660-3p(miR-660-3p)靶向具有ITAM基序1的NFAT活化蛋白(NFAM1)对呼吸道合胞病毒(RSV)诱导支气管上皮细胞凋亡和炎症因子分泌的影响。方法体外传代培养人支气管上皮细胞16HBE。取对数生长期16HBE细胞,随机分为对照组、RSV组、miR-660-3p+RSV组、miR-NC+RSV组、pcDNA-NC+RSV组、pcDNA-NFAM1+RSV组、miR-660-3p+pcDNA-NC+RSV组、miR-660-3p+pcDNA-NFAM1+RSV组,miR-NC+RSV组转染NC mimics,miR-660-3p+RSV组转染miR-660-3p mimics,pcDNA-NFAM1+RSV组转染pcDNA-NFAM1,pcDNA-NC+RSV组转染pcDNA-NC,miR-660-3p+pcDNA-NC+RSV组共转染pcDNA-NC和miR-660-3p mimics,miR-660-3p+pcDNA-NFAM1+RSV组共转染pcDNA-NFAM1和miR-660-3p mimics,对照组和RSV组不予转染;除对照组外,其余各组均予RSV感染,MOI设定为0.0001。收集各组细胞,采用RT-qPCR法检测miR-660-3p、NFAM1 mRNA表达,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测Cleaved-Caspase-3、NFAM1蛋白表达;收集各组培养上清液,采用ELISA法检测TNF-α、IL-6、IL-1β。通过starBase数据库预测NFAM1与miR-660-3p的靶向结合位点,并采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-660-3p与NFAM1的靶向调控关系。结果与对照组比较,RSV组miR-660-3p表达降低,NFAM1 mRNA与蛋白及Cleaved-Caspase-3蛋白表达升高,细胞凋亡率及培养上清液TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高(P均<0.05)。与miR-NC+RSV组比较,miR-660-3p+RSV组miR-660-3p表达升高,Cleaved-Caspase-3蛋白表达以及细胞凋亡率和培养上清液TNF-α、IL-6、IL-1β水平降低(P均<0.05)。与pcDNA-NC+RSV组比较,pcDNA-NFAM1+RSV组NFAM1 mRNA、Cleaved-Caspase-3蛋白表达以及细胞凋亡率和培养上清液TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高(P均<0.05)。经starBase数据库预测,NFAM1的3′非翻译区存在与miR-660-3p的结合位点。双荧光素酶报告基因实验结果显示,相较于共转染NC mimics与NFAM1-WT的16HBE细胞,共转染miR-660-3p mimics与NFAM1-WT的16HBE细胞荧光素酶活性下降(P<0.05);相较于共转染NC mimics与NFAM1-MUT的16HBE细胞,共转染miR-660-3p mimics与NFAM1-MUT的16HBE细胞荧光素酶活性变化不明显(P>0.05)。与miR-660-3p+pcDNA-NC+RSV组比较,miR-660-3p+pcDNA-NFAM1+RSV组Cleaved-Caspase-3蛋白表达以及细胞凋亡率和培养上清液TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高(P均<0.05)。结论miR-660-3p可通过靶向负调控NFAM1抑制RSV诱导支气管上皮细胞凋亡及炎症因子分泌。 展开更多
关键词 支气管哮喘 微小RNA-660-3p 具有ITAM基序1的NFAT活化蛋白 细胞 炎症因子
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RNA干扰技术对Hep-2细胞表皮生长因子受体表达的抑制作用及诱导凋亡 被引量:2
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作者 张世文 何晓光 +3 位作者 李晓江 王苑伶 武要洪 奚艳 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 2012年第1期47-48,共2页
表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)是广泛表达于上皮源性肿瘤细胞膜上的一类跨膜糖蛋白,与肿瘤的增殖、转移和凋亡密切相关。本文通过构建EGFR基因的siRNA表达载体,观察抑制人Hep-2喉鳞状细胞癌(简称喉癌)... 表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)是广泛表达于上皮源性肿瘤细胞膜上的一类跨膜糖蛋白,与肿瘤的增殖、转移和凋亡密切相关。本文通过构建EGFR基因的siRNA表达载体,观察抑制人Hep-2喉鳞状细胞癌(简称喉癌)细胞株EGFR的表达及诱导凋亡情况,为喉癌的基因治疗提供一定的基础理论依据。 展开更多
关键词 鳞状细胞(Carcinoma SquamousCell) RNA干扰(RNA Interference) 细胞(Apoptosis) 受体 表皮生长因子(Receptor EPIDERMAL Growth Factor)
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针刺对脑心综合征大鼠脑组织细胞凋亡、炎症因子及丝裂原活化蛋白激酶/核因子-κB/激活蛋白-1信号通路的影响
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作者 周文娟 汤小康 +3 位作者 曹越 陈成 周石刊 王琼 《环球中医药》 CAS 2024年第9期1719-1723,共5页
目的探讨针刺对脑心综合征大鼠脑组织细胞凋亡、炎症因子及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)/激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)信号通路的影响。方法将36只SD... 目的探讨针刺对脑心综合征大鼠脑组织细胞凋亡、炎症因子及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)/激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)信号通路的影响。方法将36只SD大鼠随机分为针刺组、模型组和对照组,各12只。采用胶原酶加肝素联合注射大鼠尾状核制备脑心综合征大鼠模型,对照组给予等剂量生理盐水向大鼠尾状核注入,手术操作过程同模型组。模型组和假手术组均不予针刺;针刺组选心俞穴、内关穴、风府穴和水沟穴,每日针刺1次,连续3天。采用原位末端凋亡(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling,TUNEL)法测定脑组织细胞凋亡情况;神经功能采用Zea-Longa法评估;运用酶联免疫法测定白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α水平;采用Western Blot法测定MAPK、NF-κB、AP-1蛋白表达。结果模型组和针刺组大鼠脑组织细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)高于假手术组(P<0.05);针刺组大鼠脑组织AI低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠神经行为评分高于假手术组(P<0.05);针刺组大鼠神经行为评分低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠IL-1β、IL-6和TNF-α水平高于假手术组(P<0.05);针刺组大鼠IL-1β、IL-6和TNF-α水平低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠MAPK蛋白灰度值、NF-κB蛋白灰度值和AP-1蛋白灰度值高于假手术组(P<0.05);针刺组大鼠MAPK蛋白灰度值、NF-κB蛋白灰度值和AP-1蛋白灰度值低于模型组(P<0.05)。结论脑心综合征大鼠采用针刺可减轻大鼠脑组织细胞凋亡,减轻大鼠炎症因子,且可下调MAPK/NF-κB/AP-1信号通路表达。 展开更多
关键词 针刺 脑心综合征 细胞 炎症因子 丝裂原活化蛋白激酶/核因子-κB/激活蛋白-1信号通路
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流体剪切力抑制肿瘤坏死因子α诱导鼠成骨样细胞MC3T3-E1凋亡的实验研究
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作者 何万庆 夏亚一 +3 位作者 王海明 张超 李鹏 汪静 《中国微创外科杂志》 CSCD 2010年第5期439-443,共5页
目的研究流体剪切力(fluid shear stress,FSS)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导鼠成骨样细胞MC3T3-E1凋亡的影响。方法将MC3T3-E1分为TNF-α干预组(实验组)和无TNF-α干预组(对照组),TNF-α(10ng/ml)×4h诱导MC3T3-E1凋亡后,四个实验... 目的研究流体剪切力(fluid shear stress,FSS)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导鼠成骨样细胞MC3T3-E1凋亡的影响。方法将MC3T3-E1分为TNF-α干预组(实验组)和无TNF-α干预组(对照组),TNF-α(10ng/ml)×4h诱导MC3T3-E1凋亡后,四个实验组分别加载12dyn/cm2FSS作用0,15,30,60min。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、荧光显微镜和流式细胞技术(FΑCS)检测细胞的增殖能力和凋亡,免疫印迹法检测半胱氨酸蛋白激酶9(caspase9)和凋亡蛋白酶活化因子1(Αpaf-1)蛋白的表达。采用SPSS16.0软件包对数据进行单因素方差分析。结果TNF-α(10ng/ml)×4h能诱导明显的凋亡信号,FSS(12dyn/cm2)能明显抑制这种凋亡,而且随着刺激时间的增加,从0min逐渐延长至60min,细胞活性逐渐增加,凋亡细胞数逐渐减少,实验组与对照组单因素方差分析及各组间LSD两两比较有显著性差异(P<0.05),同时caspase9和Αpaf-1蛋白的表达也逐渐增加。结论生理范围的FSS能够抑制TNF-α诱导的MC3T3-E1细胞的凋亡,作为线粒体通路的关键蛋白,caspase9和Αpaf-1在凋亡时增加而FSS后表达减少,说明FSS抑制这种凋亡至少部分是减弱了凋亡的线粒体通路。 展开更多
关键词 成骨样细胞 细胞 流体剪切力 肿瘤坏死因子Α 线粒体通路
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KLF5转录因子抑制TRAIL诱导PC-3前列腺癌细胞凋亡的分子机制 被引量:3
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作者 杨超 石琦 +2 位作者 马建斌 郭鹏 贺大林 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期206-209,共4页
目的探究通过抑制KLF5表达促进TRAIL诱导的前列腺癌PC-3细胞凋亡的分子机制。方法在TRAIL诱导下,使用MTT实验、流式细胞实验、Western blot及qRT-PCR检测KLF5敲低组与对照组的PC-3细胞在细胞活性、凋亡比例及凋亡相关标志物的表达。结果... 目的探究通过抑制KLF5表达促进TRAIL诱导的前列腺癌PC-3细胞凋亡的分子机制。方法在TRAIL诱导下,使用MTT实验、流式细胞实验、Western blot及qRT-PCR检测KLF5敲低组与对照组的PC-3细胞在细胞活性、凋亡比例及凋亡相关标志物的表达。结果在PC-3细胞中抑制KLF5表达后,TRAIL诱导下的细胞凋亡明显增加,TRAIL受体DR4、DR5表达上升,凋亡抑制因子c-FLIP蛋白表达下调,但是其mRNA表达水平不变。结论抑制KLF5,可以通过上调TRAIL受体、下调c-FLIP蛋白表达的途径,促进TRAIL诱导的前列腺癌PC-3细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。使用小干扰RNA或小分子药物抑制KLF5表达,可能是潜在的激素非敏感前列腺癌治疗手段。 展开更多
关键词 前列腺癌 Krüppel样因子5(KLF5) 肿瘤坏死因子相关诱导配体(TRAIL) 细胞型Fas相关死域样白介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)
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组织因子对奥沙利铂抑制人胃癌细胞侵袭及诱导其凋亡的影响
6
作者 郭超 曹农 +3 位作者 俞永江 柴琛 马海涛 李强 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第18期20-21,共2页
目的观察组织因子(TF)对奥沙利铂抑制人胃癌细胞侵袭及诱导其凋亡的影响。方法采用已成功转染TF-pcDNA3重组体(实验组)及空载体pcDNA3(对照组)的人胃癌细胞株SGC7901,与奥沙利铂共同孵育。采用Transwell小室观察细胞侵袭能力,采用比色... 目的观察组织因子(TF)对奥沙利铂抑制人胃癌细胞侵袭及诱导其凋亡的影响。方法采用已成功转染TF-pcDNA3重组体(实验组)及空载体pcDNA3(对照组)的人胃癌细胞株SGC7901,与奥沙利铂共同孵育。采用Transwell小室观察细胞侵袭能力,采用比色法检测Caspase-3活性,采用Annexin-V/PI双染色法检测细胞凋亡率。结果与对照组比较,实验组细胞侵袭能力增高,Caspase-3活性及细胞凋亡率降低,P均<0.05。结论TF表达增高可降低奥沙利铂对胃癌细胞体外侵袭力的抑制作用,减弱奥沙利铂诱导的细胞凋亡。 展开更多
关键词 组织因子 胃肿瘤 胃癌 奥沙利铂 侵袭 细胞
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内毒素诱导肝细胞凋亡及肝细胞生长因子的抑制作用观察
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作者 宋卫青 吕维红 +3 位作者 陈华波 张大志 李化会 吴健民 《山东医药》 CAS 北大核心 2007年第18期16-17,共2页
目的观察内毒素(LPS)诱导肝细胞凋亡的作用及肝细胞生长因子(HGF)对LPS的拮抗作用。方法HepG2细胞传代培养24 h,分三组。对照组加原培养液,LPS组加含LPS(20μg/ml)的培养液,干预组加含LPS(20μg/ml)、HGF(40 U/L)的培养液.继续培养16 h... 目的观察内毒素(LPS)诱导肝细胞凋亡的作用及肝细胞生长因子(HGF)对LPS的拮抗作用。方法HepG2细胞传代培养24 h,分三组。对照组加原培养液,LPS组加含LPS(20μg/ml)的培养液,干预组加含LPS(20μg/ml)、HGF(40 U/L)的培养液.继续培养16 h。Tunel标记法检测细胞凋亡。结果LPS组细胞凋亡率为98.65%±0.64%.干预组为35.97%±0.45%,两组相比,P<0.01。结论LPS可诱导肝细胞凋亡,HGF可抑制LPS所诱导的肝细胞凋亡。 展开更多
关键词 内毒素 细胞生长因子 细胞 细胞
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血管内皮生长因子小干扰RNA诱导胃癌细胞凋亡机制的研究 被引量:12
8
作者 孙鹏 于红 +2 位作者 张文卿 刘颖 吕锐 《医学研究生学报》 CAS 2011年第4期350-353,共4页
目的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是重要的血管生成因子之一,目前在许多肿瘤组织中均发现VEGF有较高水平的表达,靶向VEGF的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)可明显抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋... 目的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是重要的血管生成因子之一,目前在许多肿瘤组织中均发现VEGF有较高水平的表达,靶向VEGF的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)可明显抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。文中进一步探讨VEGF siRNA诱导人胃癌细胞SGC7901凋亡的机制。方法将培养的人胃癌细胞SGC7901分成空白对照组、慢病毒NC-Lv阴性对照组及慢病毒VEGF-siRNA-Lv干扰组,病毒感染96 h后,分别提取各组细胞总RNA及蛋白,RT-PCR法检测各组细胞bcl-2及P21 mRNA的表达水平,Western blot检测各组细胞SIRT1及P53蛋白的表达水平。结果与空白对照组及阴性对照组相比,RT-PCR显示VEGF-siRNA-Lv组细胞bcl-2的mRNA表达明显下调(P<0.05),P21 mRNA表达则明显上调(P<0.05),Western blot显示VEGF-siRNA-Lv组细胞SIRT1蛋白表达下调(P<0.05),P53蛋白表达则明显上调。结论 VEGF siRNA可通过下调SIRT1蛋白的表达,导致P53蛋白表达上调,并调控其下游P21、bcl-2靶基因的转录,从而诱导胃癌细胞SGC7901的凋亡。 展开更多
关键词 RNA干扰 血管内皮生长因子 胃癌细胞 细胞
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蛛网膜下腔出血大鼠早期大脑皮层低氧诱导因子-1α表达与细胞凋亡相关性研究 被引量:11
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作者 胡强 吴骋 +3 位作者 陈敬寅 严锋 李建儒 陈高 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期58-65,共8页
目的:研究大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后大脑皮层低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达情况及其与细胞凋亡可能存在的关系,初步探讨HIF-1α表达在SAH后早期脑损伤中的作用。方法:采用改良血管内穿刺法建立SAH模型。35只成年雄性SD大鼠随机分入... 目的:研究大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后大脑皮层低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达情况及其与细胞凋亡可能存在的关系,初步探讨HIF-1α表达在SAH后早期脑损伤中的作用。方法:采用改良血管内穿刺法建立SAH模型。35只成年雄性SD大鼠随机分入假手术组和SAH 6、12、24、72 h组。采用免疫荧光染色技术检测HIF-1α的表达水平,末端脱氧核苷酸介导的X-dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,同时应用免疫荧光双标染色技术检测表达HIF-1α的细胞类型。结果:免疫荧光染色结果显示HIF-1α的表达在假手术组几乎未见(0.29%±0.30%),SAH后6 h增加(4.65%±1.01%),24 h达高峰(18.55%±4.23%),差异均有统计学意义(均P<0.05)。TUNEL法检测到大鼠大脑凋亡细胞数在SAH后增多,6 h时可见少数凋亡细胞(7.09%±2.34%),在24 h到达高峰(25.54%±7.36%),差异有统计学意义(P<0.05)。相关分析显示各组HIF-1α阳性率与TUNEL阳性率呈正相关(r=0.738,P<0.05)。免疫荧光双标染色显示HIF-1α蛋白主要表达于神经元,部分HIF-1α染色阳性的细胞核与TUNEL染色重合。结论:大鼠SAH后早期脑损伤过程中HIF-1α表达与细胞凋亡呈正相关,提示HIF-1α可能参与SAH后早期脑损伤病理生理过程。 展开更多
关键词 蛛网膜下腔出血 缺氧诱导因子1 Α亚基 代谢 脑损伤 细胞 统计学(主题) 大鼠 Sprague-Dawley 疾病模型 动物 随机分配
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瑞舒伐他汀对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡及凋亡诱导因子表达的影响 被引量:7
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作者 张俊华 于明 +2 位作者 苏建华 陈玉芳 耿瑜睿 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 2015年第8期868-870,共3页
目的观察瑞舒伐他汀对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡及凋亡诱导因子(AIF)表达的影响,探讨瑞舒伐他汀的神经保护机制。方法选择健康雄性Wistar大鼠72只,随机分为假手术组、模型组(缺血再灌注损伤)和瑞舒伐他汀组,每组24只,每组又分... 目的观察瑞舒伐他汀对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡及凋亡诱导因子(AIF)表达的影响,探讨瑞舒伐他汀的神经保护机制。方法选择健康雄性Wistar大鼠72只,随机分为假手术组、模型组(缺血再灌注损伤)和瑞舒伐他汀组,每组24只,每组又分为脑缺血再灌注后12、24、72h3个时间点,剔除造模过程中死亡的大鼠,每个时间点随机选取6只大鼠。分别取大鼠脑组织,检测神经细胞凋亡数和AIF蛋白阳性细胞数。结果模型组和瑞舒伐他汀组大鼠再灌注12、24、72h神经细胞凋亡数和AIF蛋白阳性细胞数表达较假手术组明显增加,而瑞舒伐他汀组神经细胞凋亡数[(47.12±6.15)个vs(67.31±20.12)个,(34.94±8.47)个vs(62.03±8.71)个,(24.02±7.02)个vs(56.63±6.72)个]和AIF蛋白阳性细胞数[(31.01±10.22)个vs(45.12±8.54)个,(22.93±6.97)个vs(37.34±8.38)个,(15.92±6.01)个vs(30.71±4.86)个]较模型组明显降低(P<0.01)。结论瑞舒伐他汀对脑缺血再灌注损伤有神经保护作用,其作用机制可能与抑制AIF蛋白、对抗细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 脑缺血 再灌注损伤 细胞 诱导因子 神经保护药 降血脂药
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流体切应力下SIVA-1凋亡诱导因子促成骨细胞增殖分化的双向调节作用 被引量:8
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作者 张成俊 夏亚一 +3 位作者 王常德 汪静 韵向东 汉华 《中国微创外科杂志》 CSCD 2009年第8期741-746,共6页
目的探讨流体切应力(fluid shear stress,FSS)对KM小鼠成骨细胞增殖分化及相关细胞凋亡诱导因子(SIVA-1)的调节作用。方法将传至3代成骨细胞分为应力刺激组(试验组)和非应力刺激组(对照组)。5个试验组分别给予1.2PaFSS作用0.25,0.5,1,2,... 目的探讨流体切应力(fluid shear stress,FSS)对KM小鼠成骨细胞增殖分化及相关细胞凋亡诱导因子(SIVA-1)的调节作用。方法将传至3代成骨细胞分为应力刺激组(试验组)和非应力刺激组(对照组)。5个试验组分别给予1.2PaFSS作用0.25,0.5,1,2,4h;对照组为0h。MTT法测定细胞增殖,检测碱性磷酸酶(ALP)活性,半定量RT-PCR测定凋亡诱导因子SIVA-1的表达水平。结果FSS促增殖作用在短期(0.25,0.5h)明显,且细胞生长曲线前移;但在1,2,4h却有明显抑制增殖作用。FSS同样增加了ALP活性,尤其在应力作用0.5h时显著(ALP含量为2.4320±0.205金氏单位/100ml,相对对照达158%)(P<0.05);而应力作用1,2,4h后减低了ALP的表达。应力初期SIVA-1mRNA表达量明显下降,尤其在FSS作用0.5h后SIVA-1/GAPDH相对表达量为0.099±0.002,相对对照明显下调了71.3%(P<0.01),此效应在作用1h后减退,SIVA-1mRNA表达开始升高,4h后升高明显。结论1.2PaFSS在短时间刺激下可刺激成骨细胞增殖分化,尤其在0.5h后效应明显。早期促细胞增殖和ALP水平升高主要与SIVA-1mRNA表达下调有关,而后期抑制作用可能与SIVA-1mRNA表达升高有关。 展开更多
关键词 流体切应力 成骨细胞 增殖分化 SIVA-1诱导因子
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表皮生长因子对牦牛卵丘细胞低氧诱导因子-1α表达的影响及与凋亡的关联性分析 被引量:5
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作者 张译夫 潘阳阳 +1 位作者 温泽星 余四九 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1154-1161,共8页
旨在研究EGF是否通过调控HIF-1α抑制牦牛卵丘细胞凋亡。本研究在牦牛卵丘细胞体外培养时加入不同浓度的EGF,运用qRT-PCR和免疫荧光技术检测HIF-1α、Bcl-2和Bax的表达,用一步法TUNEL检测不同处理组卵丘细胞的凋亡情况。结果表明:(1)牦... 旨在研究EGF是否通过调控HIF-1α抑制牦牛卵丘细胞凋亡。本研究在牦牛卵丘细胞体外培养时加入不同浓度的EGF,运用qRT-PCR和免疫荧光技术检测HIF-1α、Bcl-2和Bax的表达,用一步法TUNEL检测不同处理组卵丘细胞的凋亡情况。结果表明:(1)牦牛卵丘细胞体外培养液中添加不同浓度的EGF后,卵丘细胞HIF-1α和Bax mRNA的相对表达量降低,Bcl-2 mRNA的相对表达量增加,且具有浓度依赖性;当EGF浓度为50ng·mL^(-1)时,HIF-1α和Bax mRNA的相对表达量最低,Bcl-2mRNA的相对表达量最高。(2)向其体外培养液中添加不同浓度的EGF后,卵丘细胞HIF-1α和Bax蛋白的相对表达量降低,Bcl-2蛋白的相对表达量增加,且具有浓度依赖性;当EGF浓度为50ng·mL^(-1)时,HIF-1α和Bax蛋白的相对表达量最低,Bcl-2蛋白的相对表达量最高。(3)TUNEL凋亡检测表明,对照组中卵丘细胞凋亡率最高,当EGF浓度为25ng·mL^(-1)时,细胞凋亡率显著降低(P<0.05);当EGF浓度为50ng·mL^(-1)时,细胞凋亡率最低(P<0.05),但随着EGF浓度的增加,卵丘细胞的凋亡率又升高。本研究结果表明,EGF可通过调控HIF-1α抑制卵丘细胞凋亡,其作用可能与线粒体介导的Bax和Bcl-2凋亡途径相关。 展开更多
关键词 表皮生长因子(EGF) 低氧诱导因子-1α(HIF-1α) 卵丘细胞 牦牛
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低剂量X射线对小鼠睾丸生精细胞中凋亡诱导因子变化的影响 被引量:3
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作者 王志成 李艳博 +5 位作者 龚平生 刘淑春 刘扬 康顺爱 赵刚 龚守良 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期28-32,共5页
采用链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法(Strept actividin-biotin complex,SABC),观察低剂量X射线照射后小鼠睾丸各类生精细胞中(Apoptos isinducing factors,AIF)的表达变化;采用逆转录多聚酶链反应(Reverse transfer polymerase c... 采用链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法(Strept actividin-biotin complex,SABC),观察低剂量X射线照射后小鼠睾丸各类生精细胞中(Apoptos isinducing factors,AIF)的表达变化;采用逆转录多聚酶链反应(Reverse transfer polymerase chain reaction,RT-PCR)法观察AIF的mRNA水平变化。研究低剂量X射线对小鼠睾丸生精细胞中凋亡诱导因子AIF蛋白及mRNA水平的影响。研究发现,0~0.2Gy照射后,小鼠睾丸各类生精细胞不同程度表达AIF,以精原细胞和精母细胞表达为主,精子细胞和精子则表达相对较少。AIF表达量与吸收剂量有相关性,0.075Gy照射组表达量最大,且发现AIF蛋白的表达随时间推移而增强,12h达到峰值,然后下降,但仍高于0h组。RT-PCR结果显示,低剂量照射12h后,0.1Gy剂量组AIF mRNA表达量最大。而0.075Gy照射后0~24h,其mRNA表达量逐渐增大,在24h到达峰值。所以,低剂量X线照射诱导小鼠睾丸生精细胞中AIF蛋白及mRNA表达与吸收剂量和表达时间有一定的相关性。 展开更多
关键词 诱导因子 mRNA 电离辐射 睾丸 生精细胞
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肺癌金属蛋白酶、金属蛋白酶抑制因子表达和细胞凋亡与预后的相关性 被引量:4
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作者 张连国 马云 +1 位作者 梁跃飞 张庆广 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期31-35,共5页
目的 :研究人肺癌组织中金属蛋白酶 ,金属蛋白酶抑制因子的表达和细胞调亡与病人预后的关系。方法 :应用免疫组化法测MMPs、TIMPs在肺癌标本中的表达、用原位杂交法 (ISH)测TIMP1mRNA、用TUNEL法测细胞凋亡。结果 :MMP2 与MT1 MMP表达... 目的 :研究人肺癌组织中金属蛋白酶 ,金属蛋白酶抑制因子的表达和细胞调亡与病人预后的关系。方法 :应用免疫组化法测MMPs、TIMPs在肺癌标本中的表达、用原位杂交法 (ISH)测TIMP1mRNA、用TUNEL法测细胞凋亡。结果 :MMP2 与MT1 MMP表达十分相近 ;TIMP1 2 在Ⅲ、Ⅳ期肿瘤中强阳性表达明显高于Ⅰ、Ⅱ期肿瘤 ;NSCLC术后存活 4年以下者其MMP1、MT1 MMP、MMP2 蛋白强阳性表达率和显著高于 4年以上存活者细胞凋亡指数。结论 :MMP1 2 、TIMP1 2 在肺癌组织中的表达强度与肿瘤的分期相关 ,MMP2 与MT1 MMP的表达密切相关且与病人预后有相关性 ,TIMP3的表达和细胞凋亡与病人预后有相关性。 展开更多
关键词 肺癌 金属蛋白酶 金属蛋白酶抑制因子 细胞 预后 相关性 临床分期
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雌激素诱导小鼠胸腺萎缩过程中细胞因子及凋亡相关蛋白基因表达的变化 被引量:4
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作者 尹帆 李江 +3 位作者 李英 马勇江 张媛 李玉谷 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第1期146-151,共6页
本试验应用光镜、电镜、流式细胞术、实时定量PCR技术研究了雌激素诱导小鼠胸腺萎缩过程中胸腺指数、胸腺显微和超微结构、胸腺细胞凋亡率及部分细胞因子和凋亡相关蛋白基因表达的变化。结果注射雌激素后,小鼠胸腺指数显著下降,胸腺中... 本试验应用光镜、电镜、流式细胞术、实时定量PCR技术研究了雌激素诱导小鼠胸腺萎缩过程中胸腺指数、胸腺显微和超微结构、胸腺细胞凋亡率及部分细胞因子和凋亡相关蛋白基因表达的变化。结果注射雌激素后,小鼠胸腺指数显著下降,胸腺中凋亡细胞数量显著上升,细胞因子TGF-β1表达量显著升高,IL-6表达量略为升高,而IL-7表达量显著降低;凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、FADD表达量显著上升,FasL表达量略有上升,而Bcl-2表达量显著降低。表明雌激素可能一方面通过调节胸腺细胞因子抑制胸腺上皮细胞的增殖,另一方面通过激活Caspase级联程序的启动和执行阶段及Fas/FasL凋亡信号通路促进胸腺细胞的凋亡,从而诱导小鼠胸腺萎缩。 展开更多
关键词 雌二醇 细胞因子 相关蛋白 胸腺 小鼠
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雷公藤内酯醇对肾缺血再灌注大鼠凋亡诱导因子及细胞间黏附分子-1表达的影响 被引量:6
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作者 包自阳 朱彩凤 +2 位作者 李苞芳 朱斌 汤绚丽 《中国中西医结合肾病杂志》 2012年第4期306-309,I0006,共5页
目的:探讨雷公藤内酯醇(TP)对肾缺血再灌注(I/R)大鼠的肾保护作用,及对凋亡诱导因子、细胞间黏附分子-1的影响。方法:48只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、I/R模型组(I/R组)、TP高、中、低剂量干预组、泼尼松对照组(Pred组)。采用夹闭... 目的:探讨雷公藤内酯醇(TP)对肾缺血再灌注(I/R)大鼠的肾保护作用,及对凋亡诱导因子、细胞间黏附分子-1的影响。方法:48只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、I/R模型组(I/R组)、TP高、中、低剂量干预组、泼尼松对照组(Pred组)。采用夹闭双侧肾动脉30 min,再灌注18 h的方法制作肾I/R大鼠模型。检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),原位末端标记法检测肾小管上皮细胞凋亡,观察肾病理改变,计算肾小管损伤(ATN)评分。Western印迹和RT-PCR分别检测AIF、ICAM-1蛋白和基因表达。结果:(1)I/R组血Scr、BUN、ATN评分及细胞凋亡指数较假手术组显著升高(P<0.01);与I/R组比较,TP各组以上指标均改善(P<0.01),pred组血Scr、BUN、ATN评分改善(P<0.01),但细胞凋亡指数无明显变化(P>0.05)。(2)I/R组大鼠肾组织AIF、ICAM-1较假手术组高表达(P<0.01);与I/R组比较,TP各组二者表达均减弱(P<0.01),pred组ICAM-1表达减弱(P<0.01)但AIF表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TP对肾I/R大鼠具有肾保护作用,其部分机制可能与抑制肾小管上皮细胞过度凋亡及AIF、ICAM-1表达有关。 展开更多
关键词 雷公藤内酯醇 再灌注损伤 肾小管 细胞 诱导因子 细胞间黏附分子-1
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lncRNA XIST靶向miR-150对LPS诱导的小鼠肺上皮MLE-12细胞凋亡和炎症因子分泌的影响 被引量:3
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作者 王慧敏 蔡施霞 +1 位作者 周震 隋娜 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期522-528,共7页
目的研究lncRNA XIST靶向miR-150对脂多糖(LPS)诱导的MLE-12细胞凋亡和炎症因子分泌的影响及机制。方法小鼠肺上皮MLE-12细胞分成Control、LPS(LPS处理)、sh-NC+LPS(转染shRNA control,给予LPS处理)、sh-XIST+LPS(转染XIST shRNA,给予LP... 目的研究lncRNA XIST靶向miR-150对脂多糖(LPS)诱导的MLE-12细胞凋亡和炎症因子分泌的影响及机制。方法小鼠肺上皮MLE-12细胞分成Control、LPS(LPS处理)、sh-NC+LPS(转染shRNA control,给予LPS处理)、sh-XIST+LPS(转染XIST shRNA,给予LPS处理)组,采用qRT-PCR方法检测XIST表达水平,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,采用Western blotting方法检测细胞中Bax、Bcl-2蛋白表达,利用TBA法检测MDA含量,利用黄嘌呤氧化法检测SOD活性,利用DCFH-DA法检测ROS水平,利用ELISA法分析培养液上清中IL-1β、TNF-α水平。利用生物信息学软件Starbase分析XIST的可能靶基因(miR-150),然后利用荧光素酶报告系统鉴定二者的靶向关系。在MLE-12细胞中将XIST shRNA、miR-150 inhibitor共转染,然后给予LPS处理,同样测定细胞凋亡、氧化损伤指标、炎症因子分泌变化。结果与Control组比较,LPS组MLE-12细胞中XIST水平升高,细胞凋亡率和Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低,ROS和MDA水平升高,SOD水平降低,细胞分泌的IL-1β、TNF-α增多;与sh-NC+LPS组比较,sh-XIST+LPSMLE-12组细胞中XIST水平降低,细胞凋亡率和Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高,ROS和MDA水平降低,SOD水平升高,细胞分泌的IL-1β、TNF-α减少。下调XIST靶向促进miR-150表达。miR-150 inhibitor能够逆转XIST shRNA对LPS诱导的MLE-12细胞凋亡、氧化损伤指标、炎症因子分泌的作用。结论下调lncRNA XIST靶向miR-150可抑制LPS诱导的小鼠肺上皮MLE-12细胞凋亡和炎症因子分泌作用。 展开更多
关键词 lncRNA XIST 炎症因子 LPS 肺上皮MLE-12细胞
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miR-671-5p通过靶向肿瘤坏死因子α诱导蛋白8调控胰腺癌细胞增殖和凋亡 被引量:3
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作者 李锐 王霞 +2 位作者 张晓红 陈宏海 马跃 《解剖学杂志》 CAS 2020年第5期393-399,共7页
目的:探讨miR-671-5p靶向肿瘤坏死因子α诱导蛋白8(TNFAIP8)对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹检测20例胰腺癌组织和与其配对的癌旁正常组织miR-617-5p、TNFAIP8 mRNA和TNFAIP8表达水平,验证miR-6... 目的:探讨miR-671-5p靶向肿瘤坏死因子α诱导蛋白8(TNFAIP8)对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹检测20例胰腺癌组织和与其配对的癌旁正常组织miR-617-5p、TNFAIP8 mRNA和TNFAIP8表达水平,验证miR-671-5p和TNFAIP8的靶向调控关系。将体外培养胰腺癌细胞capan-1分为miR-NC组、miR-671-5p组、si-NC组、si-TNFAIP8组、miR-671-5p+pcDNA组和miR-671-5p+pcDNATNFAIP8组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关蛋白(Bax)的表达水平。结果:与癌旁正常组织比较,胰腺癌组织miR-617-5p表达量显著降低,TNFAIP8的表达量显著升高。miR-671-5p靶向负向调控TNFAIP8表达。与miR-NC组比较,miR-671-5p组capan-1细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高,cyclin D1和Bcl-2的表达量显著降低,p21和Bax的表达量显著升高;与si-NC组比较,si-TNFAIP8组capan-1细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高,cyclin D1和Bcl-2表达量显著降低,p21和Bax表达量显著升高;与miR-671-5p+pcDNA组比较,miR-671-5p+pcDNA-TNFAIP8组capan-1细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著降低,cyclin D1和Bcl-2的表达量显著升高,p21和Bax的表达量显著降低。结论:miR-671-5p通过靶向下调TNFAIP8抑制胰腺癌细胞增殖并促进其凋亡。上调miR-671-5p是胰腺癌潜在治疗靶点。 展开更多
关键词 miR-671-5p 肿瘤坏死因子α诱导蛋白8 胰腺癌 细胞增殖
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紫杉醇诱导的胰腺癌SW1990细胞凋亡过程中转录激活因子5和Bax表达水平的变化 被引量:3
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作者 胡明 钱冬萌 +5 位作者 侯云 彭凯 李玲 宋旭霞 LIU David X 王斌 《医学研究生学报》 CAS 2010年第11期1127-1131,共5页
目的转录激活因子5(Activating transcription factor 5,ATF5)是一个新的与肿瘤细胞分化、增殖及凋亡密切相关的因子。文中检测胰腺癌SW1990细胞中ATF5的表达,并进一步研究紫杉醇(Paclitaxel,PTX)诱导的人胰腺癌SW1990细胞凋亡的水平,... 目的转录激活因子5(Activating transcription factor 5,ATF5)是一个新的与肿瘤细胞分化、增殖及凋亡密切相关的因子。文中检测胰腺癌SW1990细胞中ATF5的表达,并进一步研究紫杉醇(Paclitaxel,PTX)诱导的人胰腺癌SW1990细胞凋亡的水平,及其与ATF5、Bax表达水平的相关性。方法 RT-PCR检测未经药物处理的SW1990细胞中ATF5 mRNA表达水平;以不同浓度的紫杉醇(0、6.25、12.5、25、50、100、200 nmol/L)作用SW1990细胞不同时间(0、6、12、24、48 h),噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况;用100 nmol/L紫杉醇作用SW1990细胞不同时间(0、12、24、48 h)后,观察形态学变化并用Annexin V/7-AAD双染法,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;采用RT-PCR检测紫杉醇作用不同时间后ATF5、Bax的mRNA表达变化。结果胰腺癌SW1990细胞中表达ATF5。紫杉醇抑制胰腺癌SW1990细胞的增殖,并在一定范围内呈剂量、时间相关性。随着紫杉醇作用时间的增加,流式细胞仪检测凋亡率显著提高。半定量RT-PCR检测结果显示:ATF5、Bax mRNA表达均明显增强,且两者之间存在相关性(r=0.916,P<0.05)。结论 ATF5在胰腺癌SW1990细胞中高表达,并且在紫杉醇诱导的细胞凋亡过程中,表达量进一步上升,其变化趋势与Bax基因相似。提示ATF5参与紫杉醇诱导的细胞凋亡,并可能与Bax的凋亡途径存在相关性。 展开更多
关键词 转录激活因子5 紫杉醇 胰腺癌细胞SW1990
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转化生长因子β_2诱导人小梁细胞凋亡的体外研究 被引量:5
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作者 笪邦红 曹阳 魏厚仁 《眼科新进展》 CAS 2004年第1期12-14,共3页
目的 观察转化生长因子 β2 (transforminggrowthfactor β2 ,TGF β2 )是否能诱导体外培养人眼小梁细胞 (humantrabecularmeshworkcells,HTMC)发生凋亡。方法 将体外培养的第 3~ 5代人眼小梁细胞分为对照组和实验组 ,实验各组分别经... 目的 观察转化生长因子 β2 (transforminggrowthfactor β2 ,TGF β2 )是否能诱导体外培养人眼小梁细胞 (humantrabecularmeshworkcells,HTMC)发生凋亡。方法 将体外培养的第 3~ 5代人眼小梁细胞分为对照组和实验组 ,实验各组分别经 0 .32、1.0 0、3.2μg·L-1TGF β2 作用 4 8h后 ,分别用透射电镜、TUNEL法和流式细胞术检测细胞凋亡的诱导情况。结果 透射电镜观察发现凋亡细胞典型的形态学变化———核染色质凝集边集 ,凋亡小体形成等。TUNEL法检出发生DNA片段化的HTMC。经流式细胞术定量分析 ,不同浓度TGF β2 处理的HTMC凋亡细胞百分数分别为 ( 2 .79± 0 .4 4 ) %、( 4 .4 3±1.17) %、( 9.6 0± 2 .0 5 ) % ,其中 1、3.2 μg·L-1TGF β2 处理组与对照组 ( 1.4 1± 0 .34) %相比分别有显著差异和极显著差异。结论 TGF β2 能诱导体外培养HTMC发生凋亡 ,推测其可能参与了原发性开角型青光眼患者和正常人衰老过程中HTMC数目的减少。 展开更多
关键词 转化生长因子 小梁网 细胞培养
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