目的:探讨si RNA沉默检测点激酶1(Chk1)基因对人卵巢癌细胞HO8910增殖和周期调控的影响及其作用机制。方法:设计并合成3条Chk1 si RNA干扰片段,转染进入卵巢癌细胞HO8910,Western blot检测转染前后HO8910细胞中Chk1蛋白的表达情况,筛选...目的:探讨si RNA沉默检测点激酶1(Chk1)基因对人卵巢癌细胞HO8910增殖和周期调控的影响及其作用机制。方法:设计并合成3条Chk1 si RNA干扰片段,转染进入卵巢癌细胞HO8910,Western blot检测转染前后HO8910细胞中Chk1蛋白的表达情况,筛选出有效片段。将Chk1 si RNA有效片段转染进入HO8910细胞,采用MTT法和流式细胞仪分析Chk1si RNA对HO8910细胞增殖和周期的影响;Western blot方法分别检测细胞周期相关基因Cyclin A、CDK4、Cdc25A蛋白表达。结果:3个si RNA中,1条是有效si RNA。该有效Chk1 si RNA片段转染后,HO8910细胞中Chk1蛋白水平下降约53.6%,明显低于未转染组和脂质体转染组(P=0.000)。转染48 h后,Chk1 si RNA转染组HO8910细胞增殖活性下降,抑制率为(52.1±5.1)%,明显高于脂质体转染组的(7.6±3.8)%(P=0.000)。流式细胞仪检测显示Chk1 si RNA转染组HO8910细胞G2/M期比例为(5.03±2.62)%,明显低于未转染组(19.35±2.19)%和脂质体转染组(19.76±2.67)%(P=0.000)。Western blot结果显示转染Chk1 si RNA后,细胞内与细胞周期相关的Cyclin A、CDK4、Cdc25A蛋白水平表达明显增强,与未转染组和脂质体组比较,差异有统计学意义(P=0.000)。结论:si RNA沉默Chk1基因后,可明显抑制卵巢癌细胞HO8910细胞的增殖,其抑制增殖作用与减弱G2/M期阻滞有关。展开更多
文摘目的:探讨si RNA沉默检测点激酶1(Chk1)基因对人卵巢癌细胞HO8910增殖和周期调控的影响及其作用机制。方法:设计并合成3条Chk1 si RNA干扰片段,转染进入卵巢癌细胞HO8910,Western blot检测转染前后HO8910细胞中Chk1蛋白的表达情况,筛选出有效片段。将Chk1 si RNA有效片段转染进入HO8910细胞,采用MTT法和流式细胞仪分析Chk1si RNA对HO8910细胞增殖和周期的影响;Western blot方法分别检测细胞周期相关基因Cyclin A、CDK4、Cdc25A蛋白表达。结果:3个si RNA中,1条是有效si RNA。该有效Chk1 si RNA片段转染后,HO8910细胞中Chk1蛋白水平下降约53.6%,明显低于未转染组和脂质体转染组(P=0.000)。转染48 h后,Chk1 si RNA转染组HO8910细胞增殖活性下降,抑制率为(52.1±5.1)%,明显高于脂质体转染组的(7.6±3.8)%(P=0.000)。流式细胞仪检测显示Chk1 si RNA转染组HO8910细胞G2/M期比例为(5.03±2.62)%,明显低于未转染组(19.35±2.19)%和脂质体转染组(19.76±2.67)%(P=0.000)。Western blot结果显示转染Chk1 si RNA后,细胞内与细胞周期相关的Cyclin A、CDK4、Cdc25A蛋白水平表达明显增强,与未转染组和脂质体组比较,差异有统计学意义(P=0.000)。结论:si RNA沉默Chk1基因后,可明显抑制卵巢癌细胞HO8910细胞的增殖,其抑制增殖作用与减弱G2/M期阻滞有关。
