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麋鹿皮肤成纤维细胞的细胞周期同步化研究 被引量:1
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作者 赵雪萍 谢献胜 +6 位作者 王子玉 孙永成 丁晓麟 武杰 许丹 王锋 丁玉华 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期84-87,共4页
为给体细胞核移植提供更多的G0/G1期供体细胞以提高克隆的成功率,本试验采用不同的接触抑制和血清饥饿时间及含羞草酸(m imosine)不同浓度和时间3种方法对麋鹿皮肤成纤维细胞进行同期化处理,然后利用流式细胞仪分析细胞周期。结果表明,... 为给体细胞核移植提供更多的G0/G1期供体细胞以提高克隆的成功率,本试验采用不同的接触抑制和血清饥饿时间及含羞草酸(m imosine)不同浓度和时间3种方法对麋鹿皮肤成纤维细胞进行同期化处理,然后利用流式细胞仪分析细胞周期。结果表明,接触抑制24 h G0/G1期比例可达91.95%;血清饥饿24 h有89.42%的细胞处于G0/G1期,当处理时间超过144 h细胞凋亡和异常聚集的比例会增加;适宜浓度(0.4 mmol.L-1)的含羞草酸处理24 h能使麋鹿成纤维细胞同步化至G0/G1期,但易引起细胞损伤。 展开更多
关键词 麋鹿 细胞周期同步化 接触抑制 血清饥饿 含羞草酸
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绵羊卵丘细胞细胞周期同步化对核移植胚胎发育的影响 被引量:1
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作者 苏文龙 李璐 +7 位作者 孟娜娜 刘梦鹤 王寒阳 李捷鑫 曹慧 田树军 孙树春 李俊杰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第3期658-662,共5页
供体细胞周期同步化是影响体细胞核移植成功率的重要因素之一。试验分别对绵羊卵丘细胞采用血清饥饿和接触抑制的方法进行细胞周期同步化处理,使用流式细胞仪检测各组细胞周期的分布。结果发现,与对照组相比,卵丘细胞经血清饥饿24~72h后... 供体细胞周期同步化是影响体细胞核移植成功率的重要因素之一。试验分别对绵羊卵丘细胞采用血清饥饿和接触抑制的方法进行细胞周期同步化处理,使用流式细胞仪检测各组细胞周期的分布。结果发现,与对照组相比,卵丘细胞经血清饥饿24~72h后,显著地增加了G0/G1期细胞的百分比(P〈0.05);接触抑制24~72h,G0/G1期细胞所占比例与血清饥饿组无显著差异(P〉0.05),但显著高于对照组(P〈0.05);用经血清饥饿与接触抑制的供体细胞进行核移植后,重构胚卵裂率、桑椹胚率和囊胚率差异不显著(P〉0.05),但二者囊胚率显著高于对照组(P〈0.05)。上述结果证实,血清饥饿和接触抑制均能使绵羊卵丘细胞周期同步化至G0/G1,均可用作绵羊体细胞核移植的供体细胞细胞周期同步化处理。 展开更多
关键词 绵羊 卵丘细胞 细胞周期同步化 细胞核移植
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TdR诱导肝癌细胞株HepG2细胞周期同步化的效果 被引量:2
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作者 白瑞霞 王文礼 李丽梅 《科学技术与工程》 2008年第1期164-165,169,共3页
取对数生长期的HepG2细胞,加入含TdR的培养基28h后,收集细胞,用PBS洗2次,加完全培养基,分别于12h和24h收集各组细胞。用流式细胞术分析细胞周期各时相细胞百分数。探讨TdR(胸腺嘧啶核苷)诱导人肝癌细胞株HepG2同步化后的细胞周期时相的... 取对数生长期的HepG2细胞,加入含TdR的培养基28h后,收集细胞,用PBS洗2次,加完全培养基,分别于12h和24h收集各组细胞。用流式细胞术分析细胞周期各时相细胞百分数。探讨TdR(胸腺嘧啶核苷)诱导人肝癌细胞株HepG2同步化后的细胞周期时相的变化。结果是TdR能较好地使肝癌细胞株HepG2同步化于G1期和G2期。TdR诱导细胞后,分别于12中h获得(63.62±2.82)%的G2/M期同步化细胞,24h后获得(75.24±0.17)%的G1期同步化细胞。 展开更多
关键词 肝癌 细胞周期同步化 流式细胞
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不同浓度秋水仙素和nocodazole对绒山羊成纤维细胞周期同步化的影响 被引量:3
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作者 杨惠茹 肖红梅 +5 位作者 蔡婷 俎红丽 于新蕾 刘志红 李金泉 王志新 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期136-139,共4页
本试验旨在探索更加优化的条件,使绒山羊成纤维细胞经处理后更多的处于有丝分裂G2/M期。本研究分别采用秋水仙素和nocodazole试剂对绒山羊成纤维细胞进行周期同步化处理,用流式细胞仪检测G2/M期的细胞数量并进行比对,观测最佳作用浓度... 本试验旨在探索更加优化的条件,使绒山羊成纤维细胞经处理后更多的处于有丝分裂G2/M期。本研究分别采用秋水仙素和nocodazole试剂对绒山羊成纤维细胞进行周期同步化处理,用流式细胞仪检测G2/M期的细胞数量并进行比对,观测最佳作用浓度。结果表明,秋水仙素的使用浓度不宜过大,且添加秋水仙素时间的不同也会对试验结果产生明显的影响。另外在相同条件下,经nocodazole处理的绒山羊成纤维细胞周期同步化效果比秋水仙素好,最优的处理条件是300 ng/mL nocodazole处理成纤维细胞24 h,所得G2/M期的细胞所占比例为15.10%。结果提示,对于绒山羊的成纤维细胞来说,细胞周期同步化处理时选择nocodazole更好一些。 展开更多
关键词 绒山羊 成纤维细胞 秋水仙素 NOCODAZOLE 细胞周期同步化 流式细胞
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解读生物学选考中的细胞周期同步化
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作者 陈昶旭 沈思怡 饶玉春 《生物学教学》 2023年第7期85-87,共3页
本文对浙江选考中涉及的细胞周期同步化的常用方法进行解读,包括营养限制性培养、抑制CDK-cyclin复合体活性、抑制纺锤体形成和抑制DNA合成,以期为高中生物学教师教学提供参考。
关键词 细胞周期同步化 细胞周期检查点 生物学选考
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血清浓度及饥饿时间在HeLa细胞G0/G1期同步化中的影响 被引量:6
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作者 张凤秋 杨战国 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期928-929,共2页
目的:探索HeLa细胞血清饥饿法周期同步化的培养条件。方法:采用流式细胞术(FCM)研究了血清浓度及饥饿时间对HeLa细胞G0/G1期同步化及细胞凋亡的影响。结果:(1)当血清浓度处于0-10 mL/L,饥饿时间为20-26 h时便可获得80%-90%的G0/G... 目的:探索HeLa细胞血清饥饿法周期同步化的培养条件。方法:采用流式细胞术(FCM)研究了血清浓度及饥饿时间对HeLa细胞G0/G1期同步化及细胞凋亡的影响。结果:(1)当血清浓度处于0-10 mL/L,饥饿时间为20-26 h时便可获得80%-90%的G0/G1期细胞;(2)当血清浓度处于0-2 mL/L且饥饿时间达到44 h以上时,可以获得接近100%的G0/G1期细胞,但此时饥饿时间越长,凋亡细胞的比例会越高。结论:HeLa细胞可以通过血清饥饿法获得高纯度的G0/G1期细胞,为周期相关研究提供了实验依据。 展开更多
关键词 HELA细胞 血清饥饿法 细胞周期同步化
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细胞周期的调控及在核移植研究中的应用 被引量:1
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作者 赵雪萍 王锋 +1 位作者 孙永成 潘晓燕 《四川动物》 CSCD 北大核心 2005年第4期665-668,共4页
细胞周期是生命活动中一个最重要的过程。以cyclin、CDK、CKI等细胞周期调控蛋白的相互作用推动着细胞周期时相的进展和时相之间的转变。这一过程受到严密的调控机制所监控。在核移植的研究中,对细胞周期进行调控,使细胞阻滞于某一特定... 细胞周期是生命活动中一个最重要的过程。以cyclin、CDK、CKI等细胞周期调控蛋白的相互作用推动着细胞周期时相的进展和时相之间的转变。这一过程受到严密的调控机制所监控。在核移植的研究中,对细胞周期进行调控,使细胞阻滞于某一特定时期有非常重要的意义。 展开更多
关键词 细胞周期 增殖 泛素降解 细胞周期同步化
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以小麦根尖分生组织细胞核及染色体制备高分子量DNA 被引量:3
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作者 郭东伟 佘茂云 +4 位作者 李连城 陈耀峰 陈明 徐兆师 马有志 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1920-1923,共4页
为了克服以叶片为材提取HMW DNA的局限性,优化了一套简便、实用的提取方法。该法以细胞周期同步化处理的根尖分生组织为材料,利用机械匀浆释放细胞核或中期染色体制备悬浮液,再以蔗糖密度梯度离心和流式分选技术分别分离细胞核和染色体... 为了克服以叶片为材提取HMW DNA的局限性,优化了一套简便、实用的提取方法。该法以细胞周期同步化处理的根尖分生组织为材料,利用机械匀浆释放细胞核或中期染色体制备悬浮液,再以蔗糖密度梯度离心和流式分选技术分别分离细胞核和染色体,经去蛋白、酶切、透析,获得HMW DNA。经检测,来自200条根尖(10个胶块)的HMW DNA的浓度约为4~20ng/μL,而连接、转化后的BAC克隆平均插入片段超过100kb。证明该法适用于提取HMW DNA以构建BAC文库。 展开更多
关键词 高分子量DNA 蔗糖密度梯度离心 细胞周期同步化 染色体流式分选 BAC
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高通量基因芯片检测阻断Cyclin B1后基因的差异表达
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作者 谢贤和 林万尊 +2 位作者 郑伟丽 陈婷 刘俊金 《海南医学院学报》 CAS 2018年第1期1-4,共4页
目的:研究Cyclin B1敲低后差异表达的基因,并筛选出与自噬相关的基因。方法:利用胸腺核苷(TdR)双阻断法使鼻咽癌细胞CNE-2周期同步化至S期,siRNA干扰Cyclin B1的表达,流式细胞术验证转染效率,q-PCR和western blot验证siRNA沉默效率,高... 目的:研究Cyclin B1敲低后差异表达的基因,并筛选出与自噬相关的基因。方法:利用胸腺核苷(TdR)双阻断法使鼻咽癌细胞CNE-2周期同步化至S期,siRNA干扰Cyclin B1的表达,流式细胞术验证转染效率,q-PCR和western blot验证siRNA沉默效率,高通量基因芯片筛选对照组和实验组差异表达的基因。结果:经2.5mmol/L的TdR同步化后,流式细胞仪检测细胞周期,获得S期细胞。用脂质体转染法将FAM-siRNA导入CNE-2细胞后,流式细胞术检测转染效率为85.6%,将Cyclin B1-siRNA导入CNE-2细胞后,Cyclin B1的mRNA和蛋白表达均较对照组明显下降85%(P<0.01)。基因芯片结果显示与对照组相比,转染Cyclin B1-siRNA后一共有2 408个差异表达的基因,其中1 245个基因显著上调,1 163个基因显著下调,初步筛选出上调的自噬相关基因PTEN。结论:Cyclin B1-siRNA可以有效地沉默Cyclin B1蛋白的表达,并可以使2408个基因差异表达,初步筛选出上调的自噬相关基因PTEN。 展开更多
关键词 CYCLIN B1 细胞周期同步化 高通量基因芯片 自噬相关基因
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