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小麦细胞分裂素氧化酶/脱氢酶基因TaCKX1B克隆和功能分析
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作者 李婷婷 周雪 +1 位作者 柴永懋 王中华 《麦类作物学报》 北大核心 2025年第10期1331-1341,共11页
为探究细胞分裂素对小麦根系形态建成的调控作用,并挖掘调控根系发育的关键功能基因,系统分析了0.05μmol·L^(-1)6-BA处理后小麦品种晋麦47幼苗根系表型的变化,评价了110份小麦品种(系)对6-BA的敏感性,同时采用同源克隆方法获得细... 为探究细胞分裂素对小麦根系形态建成的调控作用,并挖掘调控根系发育的关键功能基因,系统分析了0.05μmol·L^(-1)6-BA处理后小麦品种晋麦47幼苗根系表型的变化,评价了110份小麦品种(系)对6-BA的敏感性,同时采用同源克隆方法获得细胞分裂素氧化酶/脱氢酶基因TaCKX1B,并通过烟草异源过表达验证其功能。结果表明,0.05μmol·L^(-1)6-BA处理显著抑制小麦初生根伸长生长,促进根毛发生与伸长;小麦对6-BA敏感性存在基因型差异,敏感指数主要分布于40%~60%,且苗期低敏感材料在灌浆期表现出更发达的根系表型;TaCKX1B基因定位于1B染色体,编码区全长1569 bp,烟草过表达该基因后T_(1)代转基因植株根系生物量约为野生型的2倍。综上所述,TaCKX1B基因在正向调控植物根系发育中具有重要作用。 展开更多
关键词 小麦 细胞分裂氧化酶/脱基因 根系发育 基因功能 遗传转化
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小麦细胞分裂素氧化/脱氢酶基因(TaCKX2)的克隆及其遗传作图 被引量:7
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作者 张磊 张宝石 +4 位作者 周荣华 高丽峰 赵光耀 宋彦霞 贾继增 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1419-1425,共7页
细胞分裂素几乎参与调控了植物生活周期中所有的生长发育过程,细胞分裂素氧化/脱氢酶(CKX)是降解细胞分裂素的关键酶。本研究采用同源克隆结合文库筛选的方法,分离得到普通小麦的TaCKX2基因(与水稻OsCKX11直向同源),针对基因序列开发出... 细胞分裂素几乎参与调控了植物生活周期中所有的生长发育过程,细胞分裂素氧化/脱氢酶(CKX)是降解细胞分裂素的关键酶。本研究采用同源克隆结合文库筛选的方法,分离得到普通小麦的TaCKX2基因(与水稻OsCKX11直向同源),针对基因序列开发出SSR标记TaCKX2-SSR,使用缺体-四体和RILs群体将TaCKX2定位于7B、7D染色体。分离得到的TaCKX2基因及其作图信息将为今后进行小麦CKX基因的功能研究以及小麦重要农艺性状的遗传改良奠定基础。 展开更多
关键词 小麦 细胞分裂氧化/脱 基因克隆 染色体定位 遗传作图
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利用pHDE-Cas9构建巨桉CTX基因家族CRISPR载体 被引量:2
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作者 李莉梅 张婷婷 +5 位作者 欧阳乐军 陈自银 陈凯钊 刘雅丽 尹爱国 布良灏 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期411-417,共7页
【目的】利用高效基因编辑系统(p HDE-Cas9)构建巨桉细胞分裂素氧化酶/脱氢酶(CTX)基因家族规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)载体,为开展巨桉CTX基因家族功能验证研究打下基础。【方法】设计巨桉CTX基因靶位点和引物,扩增p CBC质粒上... 【目的】利用高效基因编辑系统(p HDE-Cas9)构建巨桉细胞分裂素氧化酶/脱氢酶(CTX)基因家族规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)载体,为开展巨桉CTX基因家族功能验证研究打下基础。【方法】设计巨桉CTX基因靶位点和引物,扩增p CBC质粒上的目的片段,BsaⅠ酶切p HDE载体并与目的片段连接形成重组质粒,转化DH5α感受态细胞。提取单克隆进行菌液PCR初步验证、重组质粒PCR验证,挑选阳性克隆质粒进行测序分析,构建CTX基因家族CRISPR载体。【结果】重组质粒PCR鉴定及测序结果表明,重组载体序列无突变,与预期序列高度一致。成功构建了巨桉CTX基因家族p HDE-CTXA、p HDE-CTXB和p HDE-CTXC同源表达载体。【结论】利用p HDE-Cas9成功构建了巨桉CTX基因家族CRISPR载体,构建过程快速、高效,为桉树基因组定点编辑打下了基础,也可为其他桉树CRISPR/Cas9表达载体的构建提供借鉴。 展开更多
关键词 巨桉 规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR) 细胞分裂氧化酶/脱(ctx) 载体构建
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噻二唑苯基脲在平贝母脱分化过程中引起的生理生化变化 被引量:3
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作者 刘亚菊 殷红 朱四易 《西北植物学报》 CAS CSCD 2003年第3期433-437,共5页
平贝母(Fritillaria ussuriensis Maxim)鳞茎切块分别在含噻二唑苯基脲(TDZ)或激动素(Kin)的培养基上脱分化过程中的苯丙氨酸解氨酶、淀粉酶、吲哚乙酸氧化酶和过氧化物酶活性均增强,在外植体脱分化前达到峰值,随后下降。TDZ处理下这些... 平贝母(Fritillaria ussuriensis Maxim)鳞茎切块分别在含噻二唑苯基脲(TDZ)或激动素(Kin)的培养基上脱分化过程中的苯丙氨酸解氨酶、淀粉酶、吲哚乙酸氧化酶和过氧化物酶活性均增强,在外植体脱分化前达到峰值,随后下降。TDZ处理下这些酶的活性均高于Kin处理。可溶性蛋白含量的变化趋势与酶活性变化相同,只是TDZ作用下蛋白含量增加的相对水平较低。说明TDZ具有比Kin更强的细胞分裂素活性。 展开更多
关键词 平贝母 分化过程 噻二唑苯基脲 培养基 丙氨酸解氨 淀粉 吲哚乙酸氧化酶 氧化 活性 可溶性蛋白含量 组织培养 细胞分裂
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基于CRISPR/Cas9的拟南芥CKX3基因编辑载体构建及转化研究 被引量:2
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作者 王泽琛 肖荣 +4 位作者 欧阳乐军 李莉梅 梁楚炎 潘璟茵 刘智超 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1015-1022,共8页
细胞分裂素(cytokinin,CK)是参与植物生长发育过程中的关键激素,在植物生长、发育过程起着非常重要作用。细胞分裂素氧化酶/脱氢酶(cytokinin oxidase/dehydrogenase,CKX)是一种不可逆降解细胞分裂素为腺嘌呤/腺苷的黄素酶,作为细胞分... 细胞分裂素(cytokinin,CK)是参与植物生长发育过程中的关键激素,在植物生长、发育过程起着非常重要作用。细胞分裂素氧化酶/脱氢酶(cytokinin oxidase/dehydrogenase,CKX)是一种不可逆降解细胞分裂素为腺嘌呤/腺苷的黄素酶,作为细胞分裂素信号中降解分支的关键酶,对于维持植物体内的细胞分裂素平衡有着重要作用,有效的控制了植物内源细胞分裂素的水平。选取拟南芥CKX3为目标基因,通过含有拟南芥种皮重组启动子与荧光筛选标记基因mCherry的CRISPR/Cas9载体,来进行高效的拟南芥CKX3基因编辑载体构建并转化拟南芥。利用倒置荧光显微镜筛选具有红色荧光的T0代种子并种植培养获得T1代植株。提取T1代植株基因组进行PCR鉴定和测序分析,鉴定纯合突变后代的性状表型及激素测定。结果表明,本实验成功构建了编辑载体pHEE401E-mCherry-CKX3,拟南芥转化后代中目标基因成功被高效编辑,CKX3的纯合突变植株表型与野生型差异明显,内源激素含量差异达到显著水平。为研究CKX基因功能奠定了基础。 展开更多
关键词 细胞分裂 氧化酶 基因编辑 MCHERRY CRISPR/Cas9
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