细胞分裂周期蛋白14生物学功能的研究进展 被引量：4

1

作者 刘儒 谢基明 孟峻 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期960-964,共5页

细胞分裂周期蛋白14(Cdc14)属于高度保守的丝、苏氨酸双特异性磷酸酶家族,能够下调周期素依赖性激酶(CDK)的活性,是重要的细胞周期调节蛋白,在真核生物细胞中广泛表达。Cdc14在不同的真核细胞中生物学功能相差甚远。在出芽酵母细胞中,Cd... 细胞分裂周期蛋白14(Cdc14)属于高度保守的丝、苏氨酸双特异性磷酸酶家族,能够下调周期素依赖性激酶(CDK)的活性,是重要的细胞周期调节蛋白,在真核生物细胞中广泛表达。Cdc14在不同的真核细胞中生物学功能相差甚远。在出芽酵母细胞中,Cdc14通过逆转CDK的活性,进而调节出芽酵母细胞有丝分裂退出网络;在裂殖酵母细胞中,Cdc14的同源物多聚腺苷酸因子Clp1对于裂殖酵母细胞有丝分裂的退出无明显影响;在人类细胞中,Cdc14的同源物人类Cdc14A(hCdc14A)可使CDK失活,控制有丝分裂的时间。基于国内外对Cdc14的研究成果,现针对Cdc14在出芽酵母细胞、非洲裂殖酵母细胞、秀丽隐杆线虫细胞、非洲爪蟾细胞、鸟类细胞、小鼠卵母细胞和人类细胞7种不同真核生物细胞中的分型、定位及其生物学功能等进行综述,为Cdc14的研究提供参考。 展开更多

关键词 有丝分裂 细胞分裂周期蛋白14 减数分裂 出芽酶酵母细胞 周期素依赖性激酶

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内皮细胞分裂周期蛋白42在急性肺损伤所致肺血管屏障受损中的机制研究

2

作者 徐雯 李家飞 +2 位作者 王芳 吴南林 秦立龙 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第4期704-713,共10页

目的:探讨细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle protein 42,Cdc42)在急性肺损伤(acute lung injury,ALI)所致肺血管屏障受损中的可能机制。方法:(1)通过GEO(Gene Expression Omnibus)数据库分析ALI中Cdc42和含IQ基序GTP酶激活蛋白1(... 目的:探讨细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle protein 42,Cdc42)在急性肺损伤(acute lung injury,ALI)所致肺血管屏障受损中的可能机制。方法:(1)通过GEO(Gene Expression Omnibus)数据库分析ALI中Cdc42和含IQ基序GTP酶激活蛋白1(IQ motif-containing GTPase-activating protein 1,IQGAP1)的表达。(2)收集2022年1月至2023年12月期间在呼吸与危重症医学科及重症医学科确诊为ALI的30例患者和30名健康体检者的血浆样本,同时收集ALI患者的支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)。动物实验选取18只雄性C57小鼠,随机分为对照(control,CON)组、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组和LPS+ML141(Cdc42抑制剂)组,每组6只。各组小鼠在72 h后处死,收集BALF,计数BALF细胞数目,BCA法测定BALF中蛋白浓度,酶联免疫吸附实验检测人血浆及小鼠BALF中Cdc42及炎症因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)水平,通过小鼠肺组织切片HE染色评估肺损伤程度。(3)内皮磁珠分选小鼠肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMVECs),细胞实验分为CON组、LPS组和LPS+ML141组。采用血管成环实验检测各组PMVECs的血管成环能力,细胞Ca^(2+)成像技术测定PMVECs的Ca^(2+)水平,活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒检测PMVECs的ROS水平,并通过Western blot分析各组PMVECs中Cdc42、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)、磷酸化MLC(phosphorylated MLC,p-MLC)和IQGAP1的蛋白水平。结果:(1)GEO数据库分析显示,ALI模型中Cdc42的表达水平显著升高(P<0.01)。(2)ALI患者血浆中Cdc42及炎症因子(IL-6、IL-1β和TNF-α)水平显著升高(P<0.01),BALF中性粒细胞显著增多;治疗后上述指标显著下降(P<0.05)。ALI动物模型显示,BALF细胞计数、蛋白浓度、炎症因子及肺组织损伤评分均显著升高(P<0.01);ML141处理后,上述指标显著改善(P<0.05)。(3)体外细胞实验结果显示,LPS组PMVECs中Cdc42、ICAM-1、p-MLC、IQGAP1、ROS及Ca^(2+)水平均显著升高(P<0.01),而VE-cadherin和血管成环能力则显著下降(P<0.01);ML141处理后上述指标显著改善(P<0.05)。结论:Cdc42可能通过调节PMVEC中Ca^(2+)通量影响IQGAP1,从而参与ALI所致肺血管屏障损伤。 展开更多

关键词 急性肺损伤 细胞分裂周期蛋白42 钙黏蛋白 含IQ基元GTP酶激活蛋白1 血管生成

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细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)在人类肿瘤中致癌作用的泛癌分析

3

作者 陈铭 丁勇 高振国 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期98-108,共11页

CDCA5高表达已被发现在多种肿瘤中具有致癌作用.运用生物信息学方法探讨CDCA5在泛癌中的表达特征,通过TCGA和GTEX数据库获得CDCA5在肿瘤样本和癌旁样本中的表达情况,从基因表达、生存分析、基因变异和免疫浸润等方面探讨了CDCA5在不同... CDCA5高表达已被发现在多种肿瘤中具有致癌作用.运用生物信息学方法探讨CDCA5在泛癌中的表达特征,通过TCGA和GTEX数据库获得CDCA5在肿瘤样本和癌旁样本中的表达情况,从基因表达、生存分析、基因变异和免疫浸润等方面探讨了CDCA5在不同肿瘤发病机制中的作用;通过GSCA(Gene Set Cancer Analysis)分析CDCA5表达与药物IC_(50)(半数抑制浓度)的关系并用免疫组化验证了该基因;通过STRING和GEPIA2数据库获取与CDCA5相关的基因并进行KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集分析.结果表明:CDCA5在大多数肿瘤中高表达,且与部分肿瘤患者的预后存在明显的相关性.CDCA5表达与肿瘤浸润免疫细胞(TIICs)显著相关并且TIICs标记物表现出不同的免疫浸润模式.拷贝数变异(CNV)与CDCA5的表达呈正相关,甲基化与CDCA5的表达呈负相关.IC_(50)数据显示多种药物可显著抑制CDCA5的表达.免疫组化实验证实了CDCA5在肝恶性肿瘤和结肠恶性肿瘤中具有促癌作用,可作为肿瘤治疗的生物标志物,为肿瘤治疗提供了一种新的研究方向. 展开更多

关键词 细胞分裂周期相关蛋白5 泛癌分析 免疫浸润 肿瘤

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细胞分裂周期蛋白Cdc14A功能的研究进展 被引量：5

4

作者 苏日古嘎 孟峻 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期1105-1108,共4页

人类基因组编码518个激酶,其中仅有147个蛋白磷酸酶。磷酸酶与来源于同一祖系的蛋白激酶相反,能由若干进化的祖细胞独立进化为不同的磷酸酶家族。由于编码磷酸酶的基因数量相对较少,而且分离的磷酸酶在体外仅表现出低底物特异性,因此磷... 人类基因组编码518个激酶,其中仅有147个蛋白磷酸酶。磷酸酶与来源于同一祖系的蛋白激酶相反,能由若干进化的祖细胞独立进化为不同的磷酸酶家族。由于编码磷酸酶的基因数量相对较少,而且分离的磷酸酶在体外仅表现出低底物特异性,因此磷酸酶已被广泛认为是混杂酶。细胞分裂周期14A(Cdc14A)是真核细胞生物中广泛表达的一类特殊的高度保守的双重特异性磷酸酶,是Cdc14家族的一个亚型。从酵母到人类体细胞的多种研究表明Cdc14涉及的作用广泛,如减数分裂、胞质分裂、有丝分裂、DNA损伤修复和肿瘤发生发展及生殖等。本文就Cdc14A的分型和功能作用方面做简要综述。 展开更多

关键词 细胞分裂周期14A 减数分裂 DNA损伤修复 芽殖酵母 卵母细胞

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新型细胞分裂周期25磷酸酯酶B和蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制剂三唑并噻二唑-均三嗪的合成 被引量：3

5

作者 张成路 李传银 +3 位作者 杨蒙 朱长安 孙晓娜 李益政 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期385-393,共9页

以苯亚氨基为桥,设计合成了18个含有三唑并噻二唑和均三嗪双杂环的新型分子(4a^4i和5a^5i),并利用红外光谱、核磁共振谱和高分辨质谱等技术手段对其进行了结构表征。将吗啉和四氢吡咯分别与三聚氯氰发生双取代反应合成三嗪衍生物(1A和1... 以苯亚氨基为桥,设计合成了18个含有三唑并噻二唑和均三嗪双杂环的新型分子(4a^4i和5a^5i),并利用红外光谱、核磁共振谱和高分辨质谱等技术手段对其进行了结构表征。将吗啉和四氢吡咯分别与三聚氯氰发生双取代反应合成三嗪衍生物(1A和1B),然后将1A和1B分别与对氨基苯甲酸反应,合成重要中间体(2A和2B)。通过熔融法将8种脂肪酸与二氨基硫脲缩合得1,2,4-三唑衍生物3a^3h,最后将2A和2B在三氯氧磷和四丁基溴化铵催化下分别与3a^3h反应得目标产物。为了进一步比较3-脂肪基和3-苯基对药效活性的影响,利用相同方法设计合成了目标产物4i和5i。评价了目标产物对细胞分裂周期25磷酸酯酶B(Cdc25B)和蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制活性。结果发现:所有目标分子对Cdc25B均表现出良好的抑制活性,半抑制浓度(IC_(50)值)在2.40~0.31 mg/L之间,目标分子4a^4f和5a^5i的IC_(50)值均低于阳性参照物Na_3VO_4[(1.25±0.14)mg/L],有望成为潜在的Cdc25B抑制剂;在PTP1B测试中,14个目标分子具有优良的抑制活性,IC_(50)值在0.98~0.37 mg/L之间,低于阳性参照物齐墩果酸[(1.19±0.27)mg/L],有望成为潜在的PTP1B抑制剂。 展开更多

关键词 三唑并噻二唑 三嗪 细胞分裂周期25磷酸酯酶B 蛋白酪氨酸磷酸酶1B

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3,6-二取代三唑并噻二唑衍生物的合成及其对细胞分裂周期25B磷酸酶和蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制活性评价 被引量：2

6

作者 李英俊 杨鸿境 +6 位作者 曹欣 高立信 靳焜 盛丽 刘季红 刘雪洁 李佳 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期994-1002,共9页

合成出了一系列含苯并咪唑/芳氧甲基骨架的3,6-二取代三唑并噻二唑衍生物3a^3l,其结构经傅里叶变换红外光谱仪(FT-IR)、核磁共振波谱仪(NMR)和元素分析得以确认。评价了它们对细胞分裂周期25B磷酸酶(Cdc25B)/蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)... 合成出了一系列含苯并咪唑/芳氧甲基骨架的3,6-二取代三唑并噻二唑衍生物3a^3l,其结构经傅里叶变换红外光谱仪(FT-IR)、核磁共振波谱仪(NMR)和元素分析得以确认。评价了它们对细胞分裂周期25B磷酸酶(Cdc25B)/蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)的抑制活性,讨论了构效关系。生物活性测试结果显示,化合物3a对Cdc25B和PTP1B的抑制活性最高,其半数抑制浓度(IC 50)值分别为(0.46±0.02)μg/mL和(1.77±0.40)μg/mL。所得研究结果为开发新型Cdc25B/PTP1B抑制剂提供了参考依据。 展开更多

关键词 三唑并噻二唑 苯并咪唑 芳氧乙酸 细胞分裂周期25B磷酸酶抑制剂 蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制剂

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细胞分裂周期相关蛋白(CDCAs)与乳腺癌发生、发展和转移的生物信息学分析 被引量：4

7

作者 刘婧婷 隆建萍 +4 位作者 金凤玲 林碧玉 王文第 裴建赢 王晶晶 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期172-179,共8页

目的利用生物信息学方法研究细胞分裂周期相关蛋白(CDCAs)介导乳腺癌的潜在靶向基因、信号传导通路及分子机制。方法从GEO和TCGA数据库下载正常乳腺组织和乳腺癌样本的基因芯片;使用R软件limma包分析正常乳腺组织和乳腺癌样本之间的差... 目的利用生物信息学方法研究细胞分裂周期相关蛋白(CDCAs)介导乳腺癌的潜在靶向基因、信号传导通路及分子机制。方法从GEO和TCGA数据库下载正常乳腺组织和乳腺癌样本的基因芯片;使用R软件limma包分析正常乳腺组织和乳腺癌样本之间的差异表达基因;使用Kaplan-Meier Plotter评估乳腺癌患者的整体生存率、无复发生存率和无远处转移生存率;对筛选出的差异表达基因进行GO和KEGG信号通路富集分析。结果通过对差异表达基因的趋势分析,筛选出2015个显著上调的基因以及864个显著下调的基因,其中CDCA1/2/3/5/7/8可能为介导乳腺癌浸润性进展的相关基因。生存分析表明,乳腺癌CDCA1/2/3/5/7/8高表达与不良预后相关(均P<0.05)。GO分析结果主要富集于细胞有丝分裂周期、染色姐妹单体分离、染色体、着丝粒、纺锤体等;KEGG信号通路富集分析则在卵母细胞减数分裂、p53信号通路、DNA复制显著富集。结论整合生物信息学分析结果,表明CDCAs在乳腺癌组织中表达升高,并且CDCAs表达水平显著影响乳腺癌患者预后,与其他CDCAs相比,CDCA2/3/5/8可能是乳腺癌患者靶向治疗的合适靶点。 展开更多

关键词 乳腺癌 细胞分裂周期相关蛋白 生物信息学

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家蚕微孢子虫细胞分裂周期蛋白N端编码序列在酿酒酵母中的启动子活性分析 被引量：1

8

作者 邓远洪 李能章 +3 位作者 林立鹏 潘国庆 李田 周泽扬 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期688-694,共7页

微孢子虫(microsporidia)长期专性细胞内寄生,其基因组表现出显著的减缩性。利用家蚕微孢子虫(Nosema bomby-cis)基因组数据库探究在其显著减缩的基因组中是否有编码序列发挥调控序列的作用,结果发现在DNA转录调控中发挥重要作用的细胞... 微孢子虫(microsporidia)长期专性细胞内寄生,其基因组表现出显著的减缩性。利用家蚕微孢子虫(Nosema bomby-cis)基因组数据库探究在其显著减缩的基因组中是否有编码序列发挥调控序列的作用,结果发现在DNA转录调控中发挥重要作用的细胞分裂周期蛋白(cell division cycle protein)的N端编码序列具有典型的真核生物启动子序列特征。设计引物扩增该基因N端590 bp包含启动子基序的序列(C启动子序列),将该启动子序列克隆到载体启动子(MET25-P)被终止序列(CYC1-T)替代的pUG35载体上,构建由该启动子序列启动下游绿色荧光蛋白(GFP)表达的克隆载体ΔpUG35-CYC1-T-C-yEGFP-CYC1-T,并将其电击转化酿酒酵母CEN.PK2菌株,经筛选及诱导培养后,在荧光显微镜下观察到酵母中有GFP表达,证实了家蚕微孢子虫细胞分裂周期蛋白的N端编码序列包含具有启动子活性的序列,表明家蚕微孢子虫基因组减缩后,部分编码序列可能扮演了调控序列的角色。研究结果也为微孢子虫启动子的活性验证提供了一个简便的途径。 展开更多

关键词 家蚕微孢子虫 细胞分裂周期蛋白基因 启动子 绿色荧光蛋白

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细胞分裂周期蛋白42在肿瘤发生发展和治疗中作用的最新进展

9

作者 张宇 杨德君 颜荣林 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期752-756,共5页

细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)是一类广泛表达的小三磷酸鸟苷(GTP)酶,因其具有GTP酶活性,因而又被称为Rho GTP酶。Cdc42可以调节细胞骨架的形态学改变,并调节诸如细胞生长和增殖、细胞活力、细胞极性等生理过程中涉及的膜运输功能。Cdc42... 细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)是一类广泛表达的小三磷酸鸟苷(GTP)酶,因其具有GTP酶活性,因而又被称为Rho GTP酶。Cdc42可以调节细胞骨架的形态学改变,并调节诸如细胞生长和增殖、细胞活力、细胞极性等生理过程中涉及的膜运输功能。Cdc42在多种恶性肿瘤中呈现高表达,并和肿瘤的发生、侵袭和转移密切相关,提示Cdc42可能为肿瘤治疗的潜在靶点。该文拟从Cdc42的形态结构、功能、信号通路上下游效应分子以及在人类肿瘤侵袭和转移中的作用等方面进行综述。 展开更多

关键词 RHO GTP酶 细胞分裂周期蛋白42 信号通路 微小RNA 肿瘤

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细胞分裂周期蛋白42通过内皮-间充质转化参与动脉型肺动脉高压小鼠右心室纤维化 被引量：4

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作者 王晓彤 秦立龙 +2 位作者 王寒黎 汪丽静 程玉生 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1756-1764,共9页

目的:探讨细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)是否通过内皮-间充质转化(EndMT)参与动脉型肺动脉高压(PAH)小鼠右心纤维化。方法:健康雄性C57BL/6小鼠(5~8周龄)18只,随机分成常氧对照(NC)组、PAH模型[SU5416(血管内皮生长因子受体2抑制剂)+低氧,S... 目的:探讨细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)是否通过内皮-间充质转化(EndMT)参与动脉型肺动脉高压(PAH)小鼠右心纤维化。方法:健康雄性C57BL/6小鼠(5~8周龄)18只,随机分成常氧对照(NC)组、PAH模型[SU5416(血管内皮生长因子受体2抑制剂)+低氧,SuHx]组和SuHx+ML141(Cdc42抑制剂)组,每组6只。所有存活小鼠在4周后用异氟烷麻醉,行心脏超声检查及右心室收缩压(RVSP)监测,之后处死小鼠。用HE和Masson染色观察小鼠右室心肌细胞改变及纤维化程度。使用磁珠分选小鼠心脏内皮细胞并用不同条件处理。通过Western blot检测小鼠心脏组织Cdc42表达水平及内皮细胞Cdc42和EndMT相关蛋白[波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血小板内皮细胞黏附分子1(PECAM-1/CD31)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)和锌指蛋白Snail]表达水平,同时用倒置显微镜观察各组内皮细胞形态。结果:体内实验结果显示,与NC组相比,SuHx组小鼠心脏组织Cdc42表达水平显著升高(P<0.05);预防给予ML141(8 mg/kg)可降低小鼠RVSP,增大三尖瓣环平面收缩期位移(TAPSE),减轻心脏(尤其是血管旁)纤维化(P<0.01)。体外实验结果显示,SuHx组和低氧72 h组小鼠心脏内皮细胞Cdc42表达水平显著升高,EndMT增强,EndMT相关蛋白vimentin和α-SMA的表达显著增加,CD31和VE-cadherin的表达显著降低(P<0.05);预防给予ML141(10μmol/L)后可缓解低氧72 h诱导的EndMT。结论:Cdc42可能通过上调EndMT参与PAH小鼠右心纤维化。 展开更多

关键词 动脉型肺动脉高压 细胞分裂周期蛋白42 内皮-间充质转化 低氧

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14-3-3蛋白调节1-细胞期小鼠受精卵有丝分裂 被引量：1

11

作者 崔城 秦鑫 +1 位作者 任秀丽 于秉治 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期19-22,共4页

目的研究14-3-3蛋白在1-细胞期小鼠受精卵有丝分裂中的作用。方法 RT-PCR技术鉴定小鼠受精卵14-3-3蛋白亚型。采用显微注射方法将14-3-3 siRNA注射入小鼠受精卵G1期,观察受精卵的卵裂率、形态学变化及MPF活性。结果小鼠受精卵中的14-3-... 目的研究14-3-3蛋白在1-细胞期小鼠受精卵有丝分裂中的作用。方法 RT-PCR技术鉴定小鼠受精卵14-3-3蛋白亚型。采用显微注射方法将14-3-3 siRNA注射入小鼠受精卵G1期,观察受精卵的卵裂率、形态学变化及MPF活性。结果小鼠受精卵中的14-3-3蛋白亚型是14-3-3ε。小鼠受精卵注射pSUPER-14-3-3εsiRNA后,与对照组相比,卵裂率下降,有丝分裂延迟,有更多的受精卵发生形态异常,MPF活性最高值显著下降。结论 14-3-3蛋白在调节小鼠受精卵有丝分裂中发挥重要作用。 展开更多

关键词 14—3—3蛋白 1-细胞期受精卵 细胞周期

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半滑舌鳎细胞分裂周期蛋白42基因克隆与结构预测

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作者 刘厚孚 谭静 +3 位作者 胡秀彩 管振国 吕爱军 孙敬锋 《天津农学院学报》 CAS 2022年第3期36-42,共7页

细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)是Rho超家族酶中的一个亚类,具有调节细胞骨架和肌动蛋白作用,并参与免疫与炎症反应。设计半滑舌鳎Cdc42基因(即CsCdc42)特异性引物,采用RT-PCR方法、生物信息学方法等进行CsCdc42基因克隆及结构预测。结果获... 细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)是Rho超家族酶中的一个亚类,具有调节细胞骨架和肌动蛋白作用,并参与免疫与炎症反应。设计半滑舌鳎Cdc42基因(即CsCdc42)特异性引物,采用RT-PCR方法、生物信息学方法等进行CsCdc42基因克隆及结构预测。结果获得CsCdc42基因片段长度为847 bp,推测编码191个氨基酸,含有7个抗原表位(27-28、61-63、90-92、120-122、131-133、164-166和181-183 aa)、1个RHO结构域(6-179 aa),其中含有1个ATP/GTP结合位点和1个酰基化位点;蛋白结构预测主要为α螺旋(30.9%)、β折叠(24.6%)和无规则卷曲(44.5%)。序列比对结果表明,CsCdc42与斑马鱼、青鳉、虹鳟、大菱鲆和虾等氨基酸序列同源性分别为99.43%、97.91%、95.81%、94.76%和91.10%;构建系统发育树显示CsCdc42与斑马鱼、人和海水鱼类Cdc42亲缘关系最近,自然聚为一支。以上结果为研究半滑舌鳎细胞分裂周期蛋白相关基因功能提供科学参考。 展开更多

关键词 半滑舌鳎 细胞分裂周期蛋白42 基因克隆 结构预测

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沉默CDC20基因通过抑制Wnt/β-连环蛋白信号通路对子宫内膜癌细胞增殖和细胞周期的影响 被引量：2

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作者 刘春静 杨钰杰 +2 位作者 赵薇 刘丽晶 王娜 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1305-1312,共8页

目的:探讨细胞分裂周期蛋白20 (CDC20)对子宫内膜癌(EC)细胞增殖和细胞周期的影响,并阐明其作用机制。方法:实时荧光定量PCR (RT-qPCR)和Western blotting法检测人子宫内膜基质T-HESC细胞和人EC细胞(KLE、RL95-2、ZJB-ENC1和ECC-1细胞)... 目的:探讨细胞分裂周期蛋白20 (CDC20)对子宫内膜癌(EC)细胞增殖和细胞周期的影响,并阐明其作用机制。方法:实时荧光定量PCR (RT-qPCR)和Western blotting法检测人子宫内膜基质T-HESC细胞和人EC细胞(KLE、RL95-2、ZJB-ENC1和ECC-1细胞)中CDC20 mRNA及蛋白表达水平,选择RL95-2细胞用于后续实验。将CDC20 shRNA干扰慢病毒转染至RL95-2细胞中,分为对照组、sh-NC组(感染阴性对照慢病毒)、sh-CDC20组(感染CDC20 shRNA干扰慢病毒)、sh-NC+SM04690组(感染阴性对照慢病毒后,加入64 nmol·L^(-1) Wnt/β-连环蛋白信号通路抑制剂SM04690干预48h)和sh-CDC20+SM04690组(感染CDC20shRNA干扰慢病毒后,加入64 nmol·L^(-1) SM04690干预48 h)。RT-qPCR法和Western blotting法检测不同细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,BrdU法检测各组细胞中BrdU阳性细胞百分率,流式细胞术检测各组G2/M期细胞百分率,Western blotting法检测各组细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平。结果:与T-HESC细胞比较,KLE、RL95-2、ZJB-ENC1和ECC-1细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),其中RL95-2细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平最高。与sh-NC组比较,sh-CDC20组和sh-NC+SM04690组细胞增殖活性和BrdU阳性细胞百分率明显降低(P<0.05),G2/M期细胞百分率明显升高(P<0.05),细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与sh-CDC20组比较,sh-CDC20+SM04690组细胞增殖活性和BrdU阳性细胞百分率明显降低(P<0.05),G2/M期细胞百分率明显升高(P<0.05),细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:EC细胞中CDC20呈高表达,沉默CDC20可能通过调控Wnt/β-连环蛋白信号转导诱导RL95-2细胞G2/M期阻滞,抑制细胞增殖。 展开更多

关键词 子宫内膜癌 细胞分裂周期蛋白20 细胞周期 细胞增殖 Wnt/β-连环蛋白信号通路

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CDC14B在小鼠1-细胞期受精卵各细胞周期的动态表达及其定位 被引量：1

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作者 刘岚清 李瑞林 +1 位作者 周晓敏 孟峻 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期675-679,共5页

目的:检测小鼠1-细胞期受精卵各细胞周期中细胞分裂周期蛋白14B(CDC14B)的表达水平及其定位,初步阐明CDC14B对哺乳动物受精卵早期发育调控的机制。方法:通过超排卵技术分别收集小鼠1-细胞期受精卵,采用RT-PCR和Western blotting法检测... 目的:检测小鼠1-细胞期受精卵各细胞周期中细胞分裂周期蛋白14B(CDC14B)的表达水平及其定位,初步阐明CDC14B对哺乳动物受精卵早期发育调控的机制。方法:通过超排卵技术分别收集小鼠1-细胞期受精卵,采用RT-PCR和Western blotting法检测小鼠不同细胞周期1-细胞期受精卵中CDC14B mRNA和蛋白表达水平;采用细胞免疫荧光法观察小鼠不同细胞周期1-细胞期受精卵中CDC14B和β微管蛋白(β-tubulin)的共定位情况。结果:与G 1期比较,小鼠S、G 2和M期1-细胞期受精卵中CDC14B mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。间接免疫荧光实验,CDC14B(红色荧光)和β-tubulin(绿色荧光)在G 1期和S期共定位于小鼠受精卵皮质;在G 2早期,CDC14B和β-tubulin共定位于皮质和细胞质;在G 2晚期,部分CDC14B入核;在M期,CDC14B和β-tubulin共定位于纺锤体。结论:CDC14B在小鼠不同细胞周期1-细胞期受精卵中动态表达,CDC14B存在核浆纺锤体转位,CDC14B的定位变化可能调控纺锤体的功能。 展开更多

关键词 细胞分裂周期蛋白14B 受精卵 有丝分裂细胞周期 小鼠

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高迁移率族蛋白1通过调控Erk1/2、Cyclin D1及MMP14蛋白促进肝内胆管细胞癌进展 被引量：10

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作者 王艳军 王高雄 +1 位作者 黄天从 李新丰 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期430-436,共7页

目的探讨高迁移率族蛋白1(high mobility group box1, HMGB1)在肝内胆管细胞癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)进展中的作用及机制。方法运用免疫组化法检测75例ICC癌组织石蜡标本中HMGB1蛋白表达情况,分析其表达水平与临床病理... 目的探讨高迁移率族蛋白1(high mobility group box1, HMGB1)在肝内胆管细胞癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)进展中的作用及机制。方法运用免疫组化法检测75例ICC癌组织石蜡标本中HMGB1蛋白表达情况,分析其表达水平与临床病理特征关系;在体外,外源性HMGB1处理细胞及siRNA抑制HMGB1表达后运用CCK-8、细胞迁移、侵袭试验研究HMGB1对肝内胆管癌细胞恶性生物学行为的影响;运用western-blot检测细胞内蛋白。结果免疫组化检测结果显示54.67%(41/75)的肝内胆管细胞癌组织过表达HMGB1蛋白,HMGB1过表达与肿瘤分化程度(P=0.019)、临床分期(P=0.017)及血管侵犯(P=0.033)有明显正相关性。CCK-8结果显示HMGB1可以促进肝内胆管癌细胞HuCCT-1的增殖(P<0.05)。细胞迁移试验显示外源性HMGB1处理后细胞迁移数目增加到空白组的(1.85±0.08)倍(P<0.01);同时,siRNA抑制细胞HMGB1表达后细胞迁移数目减弱到空白组的(0.48±0.04)倍(P<0.01)。同样地,细胞侵袭试验结果显示外源性HMGB1处理后的HuCCT-1细胞穿过基质胶的数目增加到空白组的(1.46±0.05)倍(P<0.01);siRNA抑制细胞HMGB1表达后细胞侵袭数目减弱到空白组的(0.67±0.07)倍(P<0.01)。Western blot结果显示外源性HMGB1处理HuCCT-1细胞后细胞内Erk1/2、Cyclin D1及MMP14蛋白表达明显增加;siRNA沉默HMGB1表达后细胞内MMP14蛋白表达减弱。结论 HMGB1在肝内胆管细胞癌的进展中发挥作用,其机制可能与调控Erk1/2、Cyclin D1及MMP14蛋白相关。 展开更多

关键词 肝内胆管细胞癌 高迁移率族蛋白1 细胞外信号调控激酶 细胞周期蛋白1 基质金属蛋白酶14

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细胞分裂素与细胞的分裂增殖 被引量：3

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作者 吴晓霞 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第36期11755-11756,共2页

细胞分裂素对细胞的分裂增殖起着重要的调节作用,在细胞周期中的G1/S期,细胞分裂素促进D型细胞周期蛋白CycD的表达;在G2/M期,其作用与CDK的磷酸化有关。植物通过体内细胞分裂素的代谢影响细胞分裂素水平,调节植物生长发育调控基因,影响... 细胞分裂素对细胞的分裂增殖起着重要的调节作用,在细胞周期中的G1/S期,细胞分裂素促进D型细胞周期蛋白CycD的表达;在G2/M期,其作用与CDK的磷酸化有关。植物通过体内细胞分裂素的代谢影响细胞分裂素水平,调节植物生长发育调控基因,影响植物的根尖、茎尖等器官的生长发育。 展开更多

关键词 细胞分裂素 细胞周期蛋白 细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶 细胞分裂素氧化酶

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SGK3在小鼠卵母细胞第一次减数分裂恢复中的作用及其机制

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作者 郭文秀 庄妍 +2 位作者 张慧灵 何文宁 孟峻 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期891-899,共9页

目的:探讨血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶3(SGK3)在小鼠卵母细胞第一次减数分裂恢复中的作用,初步阐明SGK3在哺乳动物卵母细胞早期发育中的调控机制。方法:利用超排卵技术获取生发泡(GV)期小鼠卵母细胞,利用显微注射技术将表达质粒体... 目的:探讨血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶3(SGK3)在小鼠卵母细胞第一次减数分裂恢复中的作用,初步阐明SGK3在哺乳动物卵母细胞早期发育中的调控机制。方法:利用超排卵技术获取生发泡(GV)期小鼠卵母细胞,利用显微注射技术将表达质粒体外转录获得的SGK3 mRNA注射至GV期卵母细胞,分为对照组、Tris-EDTA缓冲液(TE)组和SGK3 mRNA组,采用Western blotting法检测各组小鼠卵母细胞中SGK3蛋白表达水平,显微注射SGK3 mRNA后1、2、3和4 h观察并计算各组卵母细胞生发泡破裂(GVBD)率,采用SGK3抗体稀释抑制实验观察各组卵母细胞形态表现,采用Western blotting法检测体外培养不同时间点卵母细胞中磷酸化SGK3(pSer48)(SGK3-pSer48)和磷酸化细胞分裂周期蛋白2(CDC2)(pTyr15)(CDC2-pTyr15)蛋白表达水平。结果:与对照组和TE组比较,SGK3 mRNA组小鼠卵母细胞中SGK3蛋白表达水平升高(P<0.01),显微注射后1和2 h时GVBD率升高(P<0.01)。SGK3抗体稀释抑制实验,随着SGK3抗体浓度增加,各组小鼠卵母细胞GVBD率呈浓度依赖性降低。过表达SGK3后,与对照组比较,SGK3 mRNA组小鼠卵母细胞中检测不到CDC2-pTyr15蛋白表达的时间至少提前1 h。不同稀释浓度SGK3抗体作用后,与对照组比较,随着SGK3抗体浓度升高和时间的延长,小鼠卵母细胞中CDC2-pTyr15蛋白表达水平逐渐降低(P<0.01),SGK3-pSer486蛋白表达水平逐渐升高(P<0.01)。结论:过表达SGK3可以增加小鼠卵母细胞GVBD率,加快CDC2-pTyr15的脱磷酸化,而CDC2-pTyr15的脱磷酸化晚于SGK3-Ser486的磷酸化。SGK3可能作为CDC2上游调节因子参与调控小鼠卵母细胞第一次减数分裂的恢复。 展开更多

关键词 血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶3 小鼠卵母细胞 减数分裂 细胞分裂周期蛋白2 生发泡 生发泡破裂

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14-3-3蛋白对其他功能蛋白亚细胞定位的调控作用

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作者 任晓莉 于士柱 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2008年第1期12-15,共4页

14—3—3蛋白是所有真核细胞均表达的一组相对分子质量为（28～33）×10^3的酸性蛋白，该蛋白家族成员的氨基酸序列及功能等均具有高度保守性。已在哺乳动物的细胞中发现分别由不同基因编码的7种14—3—3蛋白亚型（β、γ、ε、δ... 14—3—3蛋白是所有真核细胞均表达的一组相对分子质量为（28～33）×10^3的酸性蛋白，该蛋白家族成员的氨基酸序列及功能等均具有高度保守性。已在哺乳动物的细胞中发现分别由不同基因编码的7种14—3—3蛋白亚型（β、γ、ε、δ、ξ、τ、η），它们主要存在于细胞质中，可自行组装成纯合型或杂合型二聚体。14—3—3蛋白能与200多种磷酸化功能蛋白结合，通过影响这些靶蛋白的亚细胞定位参与新陈代谢、信号传递、细胞周期进程、细胞增殖和凋亡、 展开更多

关键词 亚细胞定位 功能蛋白 14-3-3蛋白 调控作用 相对分子质量 细胞周期进程 氨基酸序列 酸性蛋白

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细胞分裂周期蛋白20通过激活PI3K/Akt/mTOR通路驱动非小细胞肺癌吉非替尼耐药

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作者 李之坚 张冰 刘宁 《中国生物化学与分子生物学报》 2025年第8期1159-1168,共10页

吉非替尼是第一代表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI),通过靶向突变型EGFR,在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)治疗中表现出显著疗效。然而,耐... 吉非替尼是第一代表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI),通过靶向突变型EGFR,在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)治疗中表现出显著疗效。然而,耐药性的出现限制了其长期临床获益。细胞分裂周期蛋白20(cell division cycle 20,CDC20)是调控细胞周期的关键蛋白质,在多种肿瘤的发生发展中发挥重要作用,但其在NSCLC耐药性获得中的调控机制尚未见报道。本研究旨在揭示CDC20驱动非小细胞肺癌吉非替尼耐药的分子机制。通过吉非替尼诱导构建耐药细胞株HCC827/GR(IC_(50)0.05±0.01μmol/L vs 36.24±6.21μmol/L)和PC9/GR(IC_(50)0.02±0.01μmol/L vs 25.36±5.57μmol/L)。通过生物信息学技术分析证实,CDC 20的转录水平在肺癌样本中呈现表达水平显著上调现象,其异常表达特征与患者总生存期缩短存在明显关联。Western印迹检测证实,耐药细胞HCC827/GR和PC9/GR中CDC20蛋白水平明显高于亲本细胞(HCC827和PC9)。为深入探究CDC20在非小细胞肺癌吉非替尼耐药中的作用机制,我们首先通过CRISPR/Cas9技术敲除CDC 20,发现该干预可显著恢复耐药细胞对吉非替尼的敏感性(IC_(50)37.08±6.15μmol/L vs 10.49±1.83μmol/L,7.23±1.55μmol/L),并同时促进细胞凋亡和诱导G 2/M期阻滞。与之相反,过表达CDC20不仅降低敏感细胞的药物敏感性,还能显著抑制吉非替尼诱导的细胞周期阻滞和凋亡。进一步机制研究表明,CDC 20敲除可抑制PI3K/Akt/mTOR通路活化,同时显著上调促凋亡蛋白质截断胱天蛋白酶3和Bax的表达,下调抗凋亡蛋白质Bcl-2的表达。这些结果证实,CDC20通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调控非小细胞肺癌吉非替尼耐药,为克服靶向治疗耐药提供了新靶点。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 吉非替尼耐药 细胞分裂周期蛋白20 PI3K/Akt/mTOR信号通路

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Rock2对细胞周期检查点Cdc25A的调节作用 被引量：5

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作者 刘天德 余新 +3 位作者 袁荣发 王庆诺 杨志强 邵江华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期961-968,共8页

目的:探讨肝癌细胞中Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock2)对细胞周期检查点细胞分裂周期蛋白25A(Cdc25A)的调节作用。方法:Western blotting检测51对肝癌及癌旁组织中Rock2与Cdc25A的蛋白表达情况。构建并筛选shRock2干扰质粒,稳定转染... 目的:探讨肝癌细胞中Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock2)对细胞周期检查点细胞分裂周期蛋白25A(Cdc25A)的调节作用。方法:Western blotting检测51对肝癌及癌旁组织中Rock2与Cdc25A的蛋白表达情况。构建并筛选shRock2干扰质粒,稳定转染到人肝细胞癌Huh-7和HepG2细胞中,Western blotting检测Cdc25A蛋白表达变化;针对Rock2干扰序列,利用PCR定点突变技术进行碱基突变,构建Rock2突变质粒从而"恢复"Rock2表达,分析Cdc25A蛋白表达变化并用MTT法检测肝癌细胞增殖的改变。Western blotting检测Rock2稳定低表达的肝癌细胞中检查点激酶1(Chk1)和检查点激酶2(Chk2)蛋白的变化,免疫共沉淀及免疫荧光分析Rock2与Cdc25A的相互作用。结果:Rock2与Cdc25A蛋白在肝癌组织中较癌旁组织呈现高表达,而且两者呈正相关。肝癌细胞中稳定低表达Rock2后,Cdc25A蛋白表达明显下降;"恢复"Rock2表达后,Cdc25A蛋白表达增加而且肝癌细胞也出现增殖加快现象。Rock2低表达对Chk1和Chk2蛋白变化无明显影响。免疫共沉淀表明Rock2与Cdc25A直接相互作用,免疫荧光检测表明Rock2与Cdc25A存在共定位。结论:Rock2对细胞周期检查点Cdc25A起直接的正向调控作用,而且不依赖于Chk1/Chk2,可能为肝癌基因表达调控研究提供新的靶基因。 展开更多

关键词 Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶2 细胞分裂周期蛋白25A 细胞周期 肝肿瘤

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