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真核表达质粒pBK-Fas的构建及转染舌鳞癌Tca8113细胞的体外抑瘤效应
被引量：
2
1
作者
胡芳芳
陈乔尔
+2 位作者
孙麟
何志良
祖谷
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2009年第4期437-442,共6页
目的研究Fas基因转染对舌鳞癌Tca8113细胞的体外抑制作用,构建Fas基因真核表达质粒pBK-Fas并将其转导入舌鳞癌Tca8113细胞,为舌鳞癌的Fas基因治疗提供实验基础。方法采用RT-PCR反转录成cDNA扩增Fas基因全长,亚克隆到真核表达载体pBK-CMV...
目的研究Fas基因转染对舌鳞癌Tca8113细胞的体外抑制作用,构建Fas基因真核表达质粒pBK-Fas并将其转导入舌鳞癌Tca8113细胞,为舌鳞癌的Fas基因治疗提供实验基础。方法采用RT-PCR反转录成cDNA扩增Fas基因全长,亚克隆到真核表达载体pBK-CMV内,构建出重组真核表达质粒pBK-Fas,酶切鉴定并测序。脂质体法将pBK-Fas转染入Tca8113细胞,RT-PCR检测FasmRNA表达及半定量分析,琼脂糖凝胶电泳检测Fas转染细胞凋亡,流式细胞仪检测Fas蛋白表达。通过细胞生长曲线描记和软琼脂集落形成实验研究Fas基因的体外抑瘤效应。结果PCR扩增后的产物在约1008bp处出现明显的特异性条带,重组质粒pBK-Fas经酶切和测序鉴定,表明均含有大小正确的Fas基因片段。经检测Fas基因转染能提高FasmRNA表达水平、Fas蛋白表达强度,以及细胞凋亡指数。Fas基因转染能提高Fas蛋白的表达强度,由转染前的34.01±4.76上升到转染后的55.72±7.33,差异有统计学意义(P<0.01)。Fas转染细胞株在Fas抗体作用下能够有效启动Fas介导的细胞凋亡途径。MTT法检测细胞增殖抑制率的结果显示PBK-Fas转染组Tca8113细胞的增殖抑制作用最明显,表明Fas基因转染能增加舌鳞癌Tca8113细胞的增殖抑制率,结果与细胞生长曲线测定(计数法)结果具有一致性。软琼脂集落形成实验结果显示,与未转染细胞相比,重组质粒转染的Tca8113细胞群体倍增时间延长,克隆形成能力降低。结论Fas基因片段被成功插入真核表达载体pBK-Fas质粒的多克隆位点。Fas基因转染能有效的抑制体外培养的舌鳞癌Tca8113细胞的生长。
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关键词
舌肿瘤
癌
鳞状
细胞
转染
基因
疗法
细胞凋亡fas基因
真核表达质粒
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职称材料
题名
真核表达质粒pBK-Fas的构建及转染舌鳞癌Tca8113细胞的体外抑瘤效应
被引量：
2
1
作者
胡芳芳
陈乔尔
孙麟
何志良
祖谷
机构
安徽医科大学口腔医学院
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2009年第4期437-442,共6页
基金
安徽省教育厅自然科学研究重点项目(编号:KJ2007A026)
文摘
目的研究Fas基因转染对舌鳞癌Tca8113细胞的体外抑制作用,构建Fas基因真核表达质粒pBK-Fas并将其转导入舌鳞癌Tca8113细胞,为舌鳞癌的Fas基因治疗提供实验基础。方法采用RT-PCR反转录成cDNA扩增Fas基因全长,亚克隆到真核表达载体pBK-CMV内,构建出重组真核表达质粒pBK-Fas,酶切鉴定并测序。脂质体法将pBK-Fas转染入Tca8113细胞,RT-PCR检测FasmRNA表达及半定量分析,琼脂糖凝胶电泳检测Fas转染细胞凋亡,流式细胞仪检测Fas蛋白表达。通过细胞生长曲线描记和软琼脂集落形成实验研究Fas基因的体外抑瘤效应。结果PCR扩增后的产物在约1008bp处出现明显的特异性条带,重组质粒pBK-Fas经酶切和测序鉴定,表明均含有大小正确的Fas基因片段。经检测Fas基因转染能提高FasmRNA表达水平、Fas蛋白表达强度,以及细胞凋亡指数。Fas基因转染能提高Fas蛋白的表达强度,由转染前的34.01±4.76上升到转染后的55.72±7.33,差异有统计学意义(P<0.01)。Fas转染细胞株在Fas抗体作用下能够有效启动Fas介导的细胞凋亡途径。MTT法检测细胞增殖抑制率的结果显示PBK-Fas转染组Tca8113细胞的增殖抑制作用最明显,表明Fas基因转染能增加舌鳞癌Tca8113细胞的增殖抑制率,结果与细胞生长曲线测定(计数法)结果具有一致性。软琼脂集落形成实验结果显示,与未转染细胞相比,重组质粒转染的Tca8113细胞群体倍增时间延长,克隆形成能力降低。结论Fas基因片段被成功插入真核表达载体pBK-Fas质粒的多克隆位点。Fas基因转染能有效的抑制体外培养的舌鳞癌Tca8113细胞的生长。
关键词
舌肿瘤
癌
鳞状
细胞
转染
基因
疗法
细胞凋亡fas基因
真核表达质粒
Keywords
tongue neoplasms
carcinoma, squamous cell
transduction
gene therapy
apoptosis
fas
gene
eukaryotic expression plasmid
分类号
R739.86 [医药卫生—肿瘤]
R394.33 [医药卫生—医学遗传学]
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作者
出处
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1
真核表达质粒pBK-Fas的构建及转染舌鳞癌Tca8113细胞的体外抑瘤效应
胡芳芳
陈乔尔
孙麟
何志良
祖谷
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2009
2
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