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miR-30b对大鼠糖氧剥夺性视网膜神经节细胞损伤的保护作用
被引量：
7
1
作者
黄婵娟
霍妍
+3 位作者
陈琛
艾李倩玉
周元国
叶剑
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第5期396-401,共6页
背景缺血缺氧损伤是引起大部分视觉系统损害的主要原因，目前尚无有效药物从根本上缓解缺血缺氧带来的损害。研究发现，微小RNA（miR）-30b有助于减轻缺血缺氧导致的心肌损伤，但其对糖氧剥夺的视网膜神经节细胞（RGCs）生存是否有类似...
背景缺血缺氧损伤是引起大部分视觉系统损害的主要原因，目前尚无有效药物从根本上缓解缺血缺氧带来的损害。研究发现，微小RNA（miR）-30b有助于减轻缺血缺氧导致的心肌损伤，但其对糖氧剥夺的视网膜神经节细胞（RGCs）生存是否有类似的保护作用鲜有文献报道。目的研究重组腺相关病毒介导的miR-30b转染对糖氧剥夺RGCs的保护作用。方法取出生后24h的8只sD大鼠眼球，剥离出视网膜组织以进行RGCs的原代培养，将原代培养的细胞分为重组腺相关病毒（rAAV）-miR对照组、rAAV—miR．30b拟似物组、rAAV—miR-30b抑制物组和PBS组，分别在培养液中添加rAAV—miRNA、rAAV—miR-30b拟似物、rAAV—miR-30b抑制物或PBS培养细胞6d，RGCs：AAV为1：10000。各组细胞分别进行低氧培养箱（37℃，体积分数5％CO2、17％N2、3％O2）联合低糖（葡萄糖质量浓度为1．0g／L）培养液进行培养以建立原代糖氧剥夺RGCs模型，并与正常培养（37℃、5％CO2）的细胞进行对照。采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测各组细胞活力，采用免疫荧光染色法检测各组细胞中神经元特异性标志物TubulinⅢ的表达，并计算存活RGCs数目。采用Hoechst／PI染色法检测各组细胞的凋亡和坏死情况。结果培养7d的正常成熟RGCs可见1—3条完整的细长神经元突起及其分支。糖氧剥夺后随着时间延长，培养的RGCs逐渐减少和破坏，突起的主干结构破碎。rAAV·miR-30b拟似物组细胞相对活性分别为3．310±0．162，明显高于rAAV—miR-30b抑制物组和rAAV—miR对照组的0．949±0．141和0．900±0．181，差异均有统计学意义（t=10．508、10．296，均P〈0．001）。存活的RGCs可表达Tubulinm，呈红色荧光。rAAV—miR-30b拟似物组TubulinlI阳性细胞数量为（13．800±1．924）／视野，明显多于rAAV—miR-30b抑制物组的（0．600±0．548）／视野和rAAV—miR对照组的（0．800±1．304）／视野，差异均有统计学意义（t=15．141、14．912，均P〈0．001）。rAAV—miR-30b拟似物组、rAAV—miR对照组和PBS组细胞凋亡率和死亡率的总体比较差异均有统计学意义（F=10．851，P=0．002；F=6．378，P=0．013），rAAV—miR-30b拟似物组细胞凋亡率和死亡率均明显低于rAAV—miR对照组和PBS组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论低氧培养箱联合低糖培养液建立稳定的原代RGCs糖氧剥夺模型；rAAV介导的miR-30b转染可抵抗糖氧剥夺对RGCs的损伤。
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关键词
微小RNA/代谢
视网膜神经节
细胞
细胞
缺氧/生理病理
糖/生理
RNA干扰
细胞保护/药物
SD大鼠
糖氧剥夺
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职称材料
二十二碳六烯酸对人视网膜色素上皮细胞中血红素氧合酶-1表达的诱导作用
被引量：
1
2
作者
刘越峰
罗卫民
+1 位作者
张勇
钟晓东
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第8期677-683,共7页
背景 氧化应激是年龄相关性黄斑变性发生的重要机制.研究表明,二十二碳六烯酸（DHA）在视网膜光感受细胞的发育中发挥重要作用,并可上调血红素氧合酶1（HO-1）的表达,从而发挥抗氧化效应,但DHA是否能影响人视网膜色素上皮（RPE）细胞表...
背景 氧化应激是年龄相关性黄斑变性发生的重要机制.研究表明,二十二碳六烯酸（DHA）在视网膜光感受细胞的发育中发挥重要作用,并可上调血红素氧合酶1（HO-1）的表达,从而发挥抗氧化效应,但DHA是否能影响人视网膜色素上皮（RPE）细胞表达HO-1尚未阐明. 目的 观察DHA对体外培养的RPE中HO-1表达的影响及其分子机制. 方法 对人RPE细胞系ARPE-19进行培养,分别用30、50、100和120 μmol/L DHA作用4～24 h,以不含DHA培养的细胞作为对照组.采用乳酸脱氢酶（LDH）法检测DHA对细胞的毒性;分别采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测各组细胞中HO-1 mRNA及其蛋白的相对表达;采用比色法分析各组细胞中HO-1酶活性变化情况;采用荧光探针H2DCFDA检测细胞中活性氧簇（ROS）的相对比例,并采用免疫荧光技术检测各组培养细胞中核转录因子-E2相关因子2（Nrf2）的核转位情况;分别采用ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）干预法和Nrf2小干扰RNA（siRNA）转染法作用于培养的细胞,采用Western blot法检测细胞中Nrf2蛋白的表达,并观察其对细胞中HO-1蛋白表达量的影响. 结果 0、30、50、100和120 μmol/L DHA作用于ARPE-19细胞后24 h,培养上清液中LDH漏出率的总体比较差异有统计学意义（F=8.14,P＜0.05）,其中120 μmol/L DHA作用后细胞中LDH漏出率明显高于0、30、50、100 μmol/L DHA组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.不同浓度DHA作用ARPE-19细胞后8h,HO-1mRNA及其蛋白的相对表达量以及HO-1的酶活性总体比较差异均有统计学意义（F=16.24,P＜0.05;F=11.34,P＜0.05;F=11.81,P＜0.05）,其中30、50、100 μmol/L DHA组细胞中HO-1 mRNA及其蛋白的相对表达量以及HO-1的酶活性均明显高于0μmol/L DHA组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.不同浓度DHA作用ARPE-19细胞后4h细胞内ROS相对荧光强度、细胞核Nrf2阳性细胞比例的总体比较差异均有统计学意义（F=11.08,P＜0.05;F=16.42,P＜0.05）,其中30、50和100μmol/L DHA组细胞中ROS相对荧光强度、细胞核Nrf2阳性细胞比例均明显高于0μmol/L DHA组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.100 μ.mol/L DHA处理条件下,NAC预处理后细胞中HO-1蛋白的相对表达量和细胞核Nrf2阳性细胞比例均明显低于单纯100μmol/L DHA组,Nrf2 siRNA转染组细胞中HO-1的相对表达量和细胞核Nrf2阳性细胞比例均明显低于空白siRNA转染组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）. 结论 低于100 μmol/L的DHA可能通过ROS/Nrf2途径诱导RPE细胞表达HO-1,从而发挥对细胞的保护作用.
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关键词
抗氧化剂/药理
细胞保护/药物
作用
氧化应激
眼色素上皮
/药物
作用
血红素氧合酶-1
核转录因子-E2相关因子2/代谢
活性氧簇/代谢
二十二碳六烯酸
Heme
oxygenase-1
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职称材料
题名
miR-30b对大鼠糖氧剥夺性视网膜神经节细胞损伤的保护作用
被引量：
7
1
作者
黄婵娟
霍妍
陈琛
艾李倩玉
周元国
叶剑
机构
第三军医大学大坪医院眼科
出处
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第5期396-401,共6页
基金
国家自然科学基金项目（81371006、81300762）
文摘
背景缺血缺氧损伤是引起大部分视觉系统损害的主要原因，目前尚无有效药物从根本上缓解缺血缺氧带来的损害。研究发现，微小RNA（miR）-30b有助于减轻缺血缺氧导致的心肌损伤，但其对糖氧剥夺的视网膜神经节细胞（RGCs）生存是否有类似的保护作用鲜有文献报道。目的研究重组腺相关病毒介导的miR-30b转染对糖氧剥夺RGCs的保护作用。方法取出生后24h的8只sD大鼠眼球，剥离出视网膜组织以进行RGCs的原代培养，将原代培养的细胞分为重组腺相关病毒（rAAV）-miR对照组、rAAV—miR．30b拟似物组、rAAV—miR-30b抑制物组和PBS组，分别在培养液中添加rAAV—miRNA、rAAV—miR-30b拟似物、rAAV—miR-30b抑制物或PBS培养细胞6d，RGCs：AAV为1：10000。各组细胞分别进行低氧培养箱（37℃，体积分数5％CO2、17％N2、3％O2）联合低糖（葡萄糖质量浓度为1．0g／L）培养液进行培养以建立原代糖氧剥夺RGCs模型，并与正常培养（37℃、5％CO2）的细胞进行对照。采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测各组细胞活力，采用免疫荧光染色法检测各组细胞中神经元特异性标志物TubulinⅢ的表达，并计算存活RGCs数目。采用Hoechst／PI染色法检测各组细胞的凋亡和坏死情况。结果培养7d的正常成熟RGCs可见1—3条完整的细长神经元突起及其分支。糖氧剥夺后随着时间延长，培养的RGCs逐渐减少和破坏，突起的主干结构破碎。rAAV·miR-30b拟似物组细胞相对活性分别为3．310±0．162，明显高于rAAV—miR-30b抑制物组和rAAV—miR对照组的0．949±0．141和0．900±0．181，差异均有统计学意义（t=10．508、10．296，均P〈0．001）。存活的RGCs可表达Tubulinm，呈红色荧光。rAAV—miR-30b拟似物组TubulinlI阳性细胞数量为（13．800±1．924）／视野，明显多于rAAV—miR-30b抑制物组的（0．600±0．548）／视野和rAAV—miR对照组的（0．800±1．304）／视野，差异均有统计学意义（t=15．141、14．912，均P〈0．001）。rAAV—miR-30b拟似物组、rAAV—miR对照组和PBS组细胞凋亡率和死亡率的总体比较差异均有统计学意义（F=10．851，P=0．002；F=6．378，P=0．013），rAAV—miR-30b拟似物组细胞凋亡率和死亡率均明显低于rAAV—miR对照组和PBS组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论低氧培养箱联合低糖培养液建立稳定的原代RGCs糖氧剥夺模型；rAAV介导的miR-30b转染可抵抗糖氧剥夺对RGCs的损伤。
关键词
微小RNA/代谢
视网膜神经节
细胞
细胞
缺氧/生理病理
糖/生理
RNA干扰
细胞保护/药物
SD大鼠
糖氧剥夺
Keywords
MicroRNAs/metabolism
Retinal ganglion cells
Cell hypoxia/physiology
Glucose/physiology
RNA interference
Cytoprotection/drug effects
Rats, Sprague-Dawley
Oxygen-glucose deprivation
分类号
R774.1 [医药卫生—眼科]
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职称材料
题名
二十二碳六烯酸对人视网膜色素上皮细胞中血红素氧合酶-1表达的诱导作用
被引量：
1
2
作者
刘越峰
罗卫民
张勇
钟晓东
机构
湖北医药学院附属十堰市太和医院眼科中心
湖北医药学院附属十堰市太和医院心胸外科
出处
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第8期677-683,共7页
基金
十堰市科学技术研究与开发计划项目（14Y40）
文摘
背景 氧化应激是年龄相关性黄斑变性发生的重要机制.研究表明,二十二碳六烯酸（DHA）在视网膜光感受细胞的发育中发挥重要作用,并可上调血红素氧合酶1（HO-1）的表达,从而发挥抗氧化效应,但DHA是否能影响人视网膜色素上皮（RPE）细胞表达HO-1尚未阐明. 目的 观察DHA对体外培养的RPE中HO-1表达的影响及其分子机制. 方法 对人RPE细胞系ARPE-19进行培养,分别用30、50、100和120 μmol/L DHA作用4～24 h,以不含DHA培养的细胞作为对照组.采用乳酸脱氢酶（LDH）法检测DHA对细胞的毒性;分别采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测各组细胞中HO-1 mRNA及其蛋白的相对表达;采用比色法分析各组细胞中HO-1酶活性变化情况;采用荧光探针H2DCFDA检测细胞中活性氧簇（ROS）的相对比例,并采用免疫荧光技术检测各组培养细胞中核转录因子-E2相关因子2（Nrf2）的核转位情况;分别采用ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）干预法和Nrf2小干扰RNA（siRNA）转染法作用于培养的细胞,采用Western blot法检测细胞中Nrf2蛋白的表达,并观察其对细胞中HO-1蛋白表达量的影响. 结果 0、30、50、100和120 μmol/L DHA作用于ARPE-19细胞后24 h,培养上清液中LDH漏出率的总体比较差异有统计学意义（F=8.14,P＜0.05）,其中120 μmol/L DHA作用后细胞中LDH漏出率明显高于0、30、50、100 μmol/L DHA组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.不同浓度DHA作用ARPE-19细胞后8h,HO-1mRNA及其蛋白的相对表达量以及HO-1的酶活性总体比较差异均有统计学意义（F=16.24,P＜0.05;F=11.34,P＜0.05;F=11.81,P＜0.05）,其中30、50、100 μmol/L DHA组细胞中HO-1 mRNA及其蛋白的相对表达量以及HO-1的酶活性均明显高于0μmol/L DHA组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.不同浓度DHA作用ARPE-19细胞后4h细胞内ROS相对荧光强度、细胞核Nrf2阳性细胞比例的总体比较差异均有统计学意义（F=11.08,P＜0.05;F=16.42,P＜0.05）,其中30、50和100μmol/L DHA组细胞中ROS相对荧光强度、细胞核Nrf2阳性细胞比例均明显高于0μmol/L DHA组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.100 μ.mol/L DHA处理条件下,NAC预处理后细胞中HO-1蛋白的相对表达量和细胞核Nrf2阳性细胞比例均明显低于单纯100μmol/L DHA组,Nrf2 siRNA转染组细胞中HO-1的相对表达量和细胞核Nrf2阳性细胞比例均明显低于空白siRNA转染组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）. 结论 低于100 μmol/L的DHA可能通过ROS/Nrf2途径诱导RPE细胞表达HO-1,从而发挥对细胞的保护作用.
关键词
抗氧化剂/药理
细胞保护/药物
作用
氧化应激
眼色素上皮
/药物
作用
血红素氧合酶-1
核转录因子-E2相关因子2/代谢
活性氧簇/代谢
二十二碳六烯酸
Heme
oxygenase-1
Keywords
Antioxidants/pharmacology
Cytoprotection/drug effects
Oxidative stress
Pigmentepithelium of eye/drug effects
Heme oxygenase-1
Nuclear factor-E2-related factor 2/metabolism
Reactive oxygenspecies/metabolism
Docosahexaenoic acid
分类号
R774.5 [医药卫生—眼科]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
miR-30b对大鼠糖氧剥夺性视网膜神经节细胞损伤的保护作用
黄婵娟
霍妍
陈琛
艾李倩玉
周元国
叶剑
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
7
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职称材料
2
二十二碳六烯酸对人视网膜色素上皮细胞中血红素氧合酶-1表达的诱导作用
刘越峰
罗卫民
张勇
钟晓东
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
1
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