文摘背景与目的恶性胸腔积液(malignant plural effusion,MPE)是液体活检基因检测的常用标本来源,本研究评估一种从大体积MPE中分离肿瘤细胞方法的分离效果及其在基因检测中的应用前景。方法收集20例伴MPE的晚期肺癌患者一次胸腔积液引流的全部MPE(>500 mL),联合运用细胞分离介质Percoll和Ficoll分离肿瘤细胞,统计分离情况。对其中既往行组织基因检测的肺腺癌患者,分别使用胸腔积液上清游离DNA(tumor derived DNA from pleural effusion supernatant,etDNA),总细胞DNA及分离肿瘤细胞DNA(DNA from tumor cells in pleural effusion,ETC-DNA)3种成分进行二代基因测序,比较检测情况。结果从MPE中分离得到细胞中位数量8.50×104个(上下四分位间距9.25×103-3.75×105),肿瘤细胞纯度85.50%±5.80%。对10例既往行组织表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因检测的患者,etDNA、总细胞DNA及ETC-DNA EGFR基因突变检出率分别为70.00%、50.00%、70.00%。ETC-DNA基因检测阳性率与组织(P>0.999,kappa=1.000)和etDNA(P>0.999,kappa=1.000)一致性均良好。etDNA、总细胞DNA、ETC-DNAEGFR基因突变中位丰度分别为16.05%(4.78%-43.06%)、1.09%(0.00%-2.39%)和33.02%(18.50%-76.70%)。ETC-DNA检测丰度倾向高于etDNA,但差异无统计学意义。结论该提取方法可以有效地从大体积MPE中分离出大量高纯度肿瘤细胞,利用提取出的肿瘤细胞进行基因检测可能可以提高基因检测效能,值得进一步研究。
