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细粒棘球绦虫原头蚴、包囊壁和成虫circRNA差异表达分析
1
作者 王正荣 马勋 +3 位作者 张艳艳 孙艳 孟季蒙 薄新文 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期3474-3489,共16页
旨在解析circRNA在细粒棘球绦虫原头蚴、包囊壁和成虫的表达谱特性,为进一步阐明circRNA分子在细粒棘球绦虫生长发育中的作用提供理论依据。采集细粒棘球绦虫的原头蚴、包囊壁和成虫,提取总RNA,构建circRNA、miRNA以及mRNA文库,采用全... 旨在解析circRNA在细粒棘球绦虫原头蚴、包囊壁和成虫的表达谱特性,为进一步阐明circRNA分子在细粒棘球绦虫生长发育中的作用提供理论依据。采集细粒棘球绦虫的原头蚴、包囊壁和成虫,提取总RNA,构建circRNA、miRNA以及mRNA文库,采用全转录组测序方法进行测序分析。通过生物信息学分析和功能预测筛选出差异表达的circRNA,并进行GO、KEGG以及ceRNA调控网络分析,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对其进行验证。结果在细粒棘球绦虫原头蚴、包囊壁和成虫共鉴定得到636个circRNA分子,其中差异表达的circRNA分子有140个,在原头蚴、包囊壁和成虫特异性表达的circRNA分子分别为44、2和0个。GO分析结果显示,成虫和原头蚴以及包囊壁相比,差异表达的circRNA分子主要富集于生物学过程的有性生殖、精子发生、雄性配子产生、轴系发生以及神经生成、分化等。KEGG分析结果显示,原头蚴和成虫相比,差异表达的circRNA的显著富集于Notch、三羧酸循环、磷脂酰肌醇、核黄素代谢通路以及脂肪酸合成和降解等信号通路。原头蚴和包囊壁相比,差异表达的circRNA显著富集于背腹轴形成、Notch、wnt以及FoxO信号通路等。成虫和包囊壁相比,差异表达的circRNA的显著富集于Notch、碳代谢、三羧酸循环以及糖酵解/糖异生通路。靶向预测circRNA-miRNA-mRNA调控网络结果显示,有24个差异表达circRNAs与14个miRNAs和54个mRNAs形成164个up-down-up的circRNA-miRNA-mRNA调控网路,有13个差异表达的circRNAs与7个miRNAs以及16个mRNAs构成36个down-up-down的circRNA-miRNA-mRNA调控网络。对部分circRNA分子的qRT-PCR验证结果表明,其mRNA转录水平与测序结果一致。综上所述,本研究首次系统解析了circRNA分子在细粒棘球绦虫原头蚴、包囊壁和成虫的差异表达谱特性,筛选了在原头蚴、包囊壁和成虫各阶段高表达及特异表达的circRNA分子,预测了差异表达circRNA潜在的circRNA-miRNA-mRNA调控网络,为进一步研究circRNA分子在细粒棘球绦虫生长发育中的作用于调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 circRNA 原头蚴 成虫 包囊壁 表达谱
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细粒棘球绦虫表膜糖抗原HSP70基因的克隆、表达及免疫特性分析 被引量：1
2
作者 古努尔.吐尔逊 米晓云 +6 位作者 赵莉 张旭 张壮志 石保新 吐尔洪.依米提 艾力麦麦提.麦麦提力 马合木提.塔力普 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期949-958,共10页
【目的】克隆细粒棘球绦虫(Eg)表膜糖抗原的热休克蛋白70(HSP70)基因,构建原核表达载体,鉴定EgHSP70蛋白的免疫学特性。【方法】以Eg表膜糖抗原高免鼠血清为探针,从Eg成虫cDNA文库中筛选得到阳性克隆EgHSP70。构建EgHSP70基因的原核表... 【目的】克隆细粒棘球绦虫(Eg)表膜糖抗原的热休克蛋白70(HSP70)基因,构建原核表达载体,鉴定EgHSP70蛋白的免疫学特性。【方法】以Eg表膜糖抗原高免鼠血清为探针,从Eg成虫cDNA文库中筛选得到阳性克隆EgHSP70。构建EgHSP70基因的原核表达载体pET28a-EgHSP70,诱导表达重组蛋白,纯化,免疫鼠,ELISA、Western-blot和IFA法分别检测血清抗体效价、特异性及抗原在虫体组织中的位置。【结果】从Eg成虫cDNA文库中筛选获得特异性EgHSP70基因,酶切和测序结果均表明该基因已克隆到pET28a。EgHSP70融合蛋白在A600=0.6,0.4 mmol IPTG,37℃表达5 h为最佳表达。经His亲和层析法纯化获得了HSP70融合蛋白相对分子质量约为33 kDa。免疫小鼠可产生高滴度(最高1:640 000)特异性抗体。Westernblot分析结果表明,制备的抗血清与EgHSP70融合蛋白、原头蚴粗提抗原、Eg虫体蛋白和Eg虫体表面蛋白均能特异性结合,其他带科绦虫有此蛋白表达IFA检测结果证实EgHSP70在细粒棘球绦虫成虫体表膜及体表内有表达。【结论】实验得到的EgHSP7O融合蛋白具有较好的免疫原性和抗原性,可用于研制包虫病疫苗及相关诊断试剂为包虫病的防控提供技术支持。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫成虫cdna文库 细粒棘球绦虫表膜糖抗原 热休克蛋白HSP70 EgHSP70融合蛋白 免疫学特性
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用抗虫体表膜抗原抗体测定犬细粒棘球绦虫粪抗原 被引量：6
3
作者 古努尔·吐尔逊 米晓云 +8 位作者 张壮志 石保新 吐尔洪·依米提 张旭 巫剑 赵莉 阿曼古丽·马木提 金映红 张文宝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期845-850,共6页
利用Echinococcus granulosus(Eg)成虫表膜抗原抗体夹心ELISA方法检测犬细粒棘球绦虫感染的粪抗原。首先提取E g成虫表膜抗原,制备抗E g成虫表膜抗原的血清,然后用间接ELISA和Western blotting方法检测其抗原抗体反应及免疫原性,用间接... 利用Echinococcus granulosus(Eg)成虫表膜抗原抗体夹心ELISA方法检测犬细粒棘球绦虫感染的粪抗原。首先提取E g成虫表膜抗原,制备抗E g成虫表膜抗原的血清,然后用间接ELISA和Western blotting方法检测其抗原抗体反应及免疫原性,用间接免疫组化方法对E g成虫表膜蛋白进行组织定位。利用双抗体夹心ELISA方法检测感染E g的犬粪抗原。ELISA结果表明E g成虫表膜抗原具有良好的抗原性并能产生高效价抗体,抗体不与多头绦虫和泡状带绦虫抗原反应;Western blotting结果表明E g成虫表膜抗原与原头蚴、不成熟E g有共同蛋白成分。免疫组化结果证实虫体表膜蛋白分布在虫体表皮。该抗原抗体系统能检测到感染后13d的犬细粒棘球绦虫。结果表明该E g成虫表膜抗原抗体系统可用于诊断犬细粒棘球绦虫感染。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫成虫表膜抗原抗体 双抗体夹心ELISA 粪抗原
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