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组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)抑制剂通过抑制核因子kB减轻乙醇诱导的人肠上皮Caco-2细胞损伤
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作者 任莉 贾皑 +3 位作者 任牡丹 卢桂芳 冯云 和水祥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期800-805,共6页
目的研究组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)在酒精诱导的肠上皮细胞炎症和通透性中的作用和机制。方法培养Caco-2细胞达到分化,采用(10、25、50、100.200)mmol/L乙醇对其进行处理,通过廛哇蓝(MTT法)检测乙醇对细胞活性的影响,实时定量PCR检测Cac... 目的研究组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)在酒精诱导的肠上皮细胞炎症和通透性中的作用和机制。方法培养Caco-2细胞达到分化,采用(10、25、50、100.200)mmol/L乙醇对其进行处理,通过廛哇蓝(MTT法)检测乙醇对细胞活性的影响,实时定量PCR检测Caco-2细胞HDAC3 mRNA水平,Western blot法检测其蛋白水平,从中筛选出适宜的乙醇浓度。将分化的Caco-2细胞分为对照组、乙醇组(50 mmol/L乙醇处理60 min)和RGFP966预处理组(乙醇处理前用2 p.mol/L HDAC3抑制剂RGFP966预处理1 h)。EUSA检测培养的细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量,电阻仪检测跨上皮电阻值(TER),Western blot法检测细胞中闭合蛋白(occludin)、密封蛋白1(claudin-1)以及磷酸化的核因子kBp65(p-NF-i<Bp65)、核因子kB抑制蛋白(IkB)的蛋白水平。结果(10、25、50)mmol/L乙醇对细胞活力无明显影响,这些浓度的乙醇处理后HDAC3 mRNA和蛋白表达均升高,且具有剂量依赖性。与对照组相比,乙醇处理组细胞TNF-α含量和p-NF-KBp65蛋白水平增加,TER值与occludin、claudin-1和IkB蛋白水平均降低;与乙醇处理组相比,RGFP966预处理组细胞TNF-α含量和p-NF-KBp65蛋白水平均降低,TER值与occludin、claudin-1和IkB蛋白水平均增加。结论抑制HDAC3能够减弱乙醇诱导的肠上皮细胞炎症和通透性,可能是通过抑制NF-kB的活化发挥作用的。 展开更多
关键词 组蛋白去乙酰化3(hdac3) 乙醇 肠上皮细胞 炎症 通透性 核因子kB(NF-kB)
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稻瘟病菌组蛋白脱乙酰化酶SIR2 HDACs的功能初探
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作者 符稳群 纪春艳 +2 位作者 杨晓琦 张敏敏 张振华 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期371-377,共7页
利用生物信息学方法对稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)组蛋白脱乙酰化酶SIR2家族成员(SRT3001、SRT3002、SRT3003、SRT3004、SRT3005、SRT3006和SRT3007)的生物学功能进行研究。结果表明,SIR2 HDACs家族成员位于不同的染色体上,分布于细... 利用生物信息学方法对稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)组蛋白脱乙酰化酶SIR2家族成员(SRT3001、SRT3002、SRT3003、SRT3004、SRT3005、SRT3006和SRT3007)的生物学功能进行研究。结果表明,SIR2 HDACs家族成员位于不同的染色体上,分布于细胞的不同部位;它们编码的蛋白均含有蛋白激酶C磷酸化、酪蛋白激酶II磷酸化、N-糖基化、N-豆蔻酰化4个相同的位点;它们均无跨膜区,且为亲水蛋白质,都无信号肽。多序列比对发现稻瘟病菌SIR2 HDACs家族结构域高度保守,均含有SIR2结构域;这些蛋白可能参与病原菌的转录调节、能量代谢和染色质沉默等过程。 展开更多
关键词 稻瘟病菌 组蛋白乙酰化 SIR2 生物信息学
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辣蓼黄酮通过调控核因子E2相关因子2信号通路及组蛋白乙酰化缓解伪狂犬病毒感染小鼠诱导的脾脏和肺脏氧化应激 被引量:6
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作者 韦玉衡 赵雅琪 +3 位作者 陈奇 周家芳 周淑棉 胡庭俊 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期1213-1225,共13页
本研究通过探索辣蓼黄酮对核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路及组蛋白乙酰化的调控效果,以阐明辣蓼黄酮干预伪狂犬病毒(PRV)感染小鼠诱导氧化应激的分子机制。将60只无特定病原体(SPF)级昆明种小鼠,随机分为6个组(每组10只小鼠),即空白... 本研究通过探索辣蓼黄酮对核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路及组蛋白乙酰化的调控效果,以阐明辣蓼黄酮干预伪狂犬病毒(PRV)感染小鼠诱导氧化应激的分子机制。将60只无特定病原体(SPF)级昆明种小鼠,随机分为6个组(每组10只小鼠),即空白对照组、PRV组、维生素C(VC)组(灌服100 mg/kg BW VC)及辣蓼黄酮高、中、低剂量组(灌服200、100和50 mg/kg BW辣蓼黄酮混悬液),各组灌服量均为0.2 mL。PRV感染小鼠7 d后,通过荧光定量PCR测定小鼠脾脏和肺脏组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)、依赖还原型辅酶Ⅰ(Ⅱ)醌氧化还原酶1(NQO1)、乙酰转移酶(HAT)和去乙酰转移酶(HDAC)的mRNA表达水平;通过免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western Blot)测定iNOS、Nrf2、HO-1、NQO1、乙酰化组蛋白H3(AcH3)和乙酰化组蛋白H4(AcH4)的蛋白表达水平。结果表明:与空白对照组相比,PRV组脾脏组织中iNOS、HAT的mRNA表达水平和AcH3的蛋白表达水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),脾脏组织中HO-1、HDAC的mRNA表达水平极显著降低(P<0.01);PRV组肺脏组织中iNOS、Nrf2、HO-1、NQO1、HAT的mRNA表达水平和iNOS、Nrf2、AcH3的蛋白表达水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),肺脏组织中AcH4的蛋白表达水平极显著降低(P<0.01)。与PRV组相比,辣蓼黄酮高、中、低剂量组脾脏组织中Nrf2、HO-1和HDAC的mRNA表达水平和AcH4的蛋白表达水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),脾脏组织中HAT的mRNA表达水平和AcH3的蛋白表达水平显著或极显著下降(P<0.05或P<0.01);辣蓼黄酮高、中、低剂量组肺脏组织中iNOS的mRNA表达水平和AcH3的蛋白表达水平显著或极显著下降(P<0.05或P<0.01),肺脏组织中AcH4的蛋白表达水平极显著升高(P<0.01)。由此可见,辣蓼黄酮对Nrf2信号通路和组蛋白乙酰化修饰具有调控作用,且其通过该调控作用缓解PRV感染小鼠脾脏和肺脏诱导的氧化应激。 展开更多
关键词 辣蓼黄酮 伪狂犬病毒 Nrf2信号通路 组蛋白乙酰化 氧化应激
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香烟烟雾提取物通过氧化应激下调组蛋白去乙酰化酶2诱导小鼠骨骼肌细胞早衰 被引量:5
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作者 刘文婷 苏文燕 +3 位作者 杨霞 白晶 钟小宁 何志义 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期630-633,638,共5页
目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)是否通过氧化应激减少抗衰老分子组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)的表达而诱导骨骼肌细胞早衰。方法诱导C2C12成肌细胞分化成骨骼肌细胞,观察CSE处理对骨骼肌细胞氧化应激、衰老和HDAC2表达的影响,应用氧化剂H2O2... 目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)是否通过氧化应激减少抗衰老分子组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)的表达而诱导骨骼肌细胞早衰。方法诱导C2C12成肌细胞分化成骨骼肌细胞,观察CSE处理对骨骼肌细胞氧化应激、衰老和HDAC2表达的影响,应用氧化剂H2O2和抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)为工具药,检测细胞中丙二醛(MDA)含量、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的变化,应用β半乳糖苷酶染色检测衰老细胞百分率,采用实时荧光定量PCR检测HDAC2 mRNA水平,Western blot法检测HDAC2蛋白水平。结果与对照组相比,CSE和H2O2可增加小鼠骨骼肌细胞MDA含量和ROS水平,而降低SOD、GSH-Px的活性,同时伴有β半乳糖苷酶的水平增加和抗衰老分子HDAC2 mRNA和蛋白水平的降低。NAC预处理后,可降低CSE诱导的MDA含量和ROS活性,提高SOD、GSH-Px的活性,同时β半乳糖苷酶表达降低,HDAC2的水平升高。结论 CSE可能是通过氧化应激降低HDAC2诱导小鼠骨骼肌细胞早衰。 展开更多
关键词 氧化应激 衰老 香烟提取物 组蛋白去乙酰化2 慢性阻塞性肺疾病
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红霉素上调组蛋白去乙酰化酶2表达减轻氧化应激下THP-1细胞的糖皮质激素抵抗 被引量:5
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作者 张扬 何志义 +6 位作者 孙雪皎 黎展华 赵琳 毛从政 黄冬妹 张建全 钟小宁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期384-387,共4页
目的探讨红霉素(EM)对氧化应激下人THP-1单核细胞糖皮质激素抵抗的作用及机制。方法 EM预孵育THP-1细胞后予烟草烟雾提取物(CSE)刺激细胞,用质粒脂质体法将构建好的组蛋白去乙酰化酶2沉默RNA(HDAC2-siRNA)转染细胞,ELISA检测细胞培养上... 目的探讨红霉素(EM)对氧化应激下人THP-1单核细胞糖皮质激素抵抗的作用及机制。方法 EM预孵育THP-1细胞后予烟草烟雾提取物(CSE)刺激细胞,用质粒脂质体法将构建好的组蛋白去乙酰化酶2沉默RNA(HDAC2-siRNA)转染细胞,ELISA检测细胞培养上清白细胞介素8(IL-8)的含量,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分析HDAC2表达情况。结果 EM组的IL-8抑制率明显高于CSE组,而低于对照组(P<0.05),EM组地塞米松半数抑制浓度(IC50-Dex)低于CSE组,而高于对照组(P<0.05)。EM组HDAC2蛋白的表达高于CSE组,而低于对照组(P<0.05)。除此之外,应用HDAC2-siRNA转染细胞后HDAC2 mRNA及HDAC2蛋白的表达均明显低于对照组及空转组,而加用EM后其表达明显升高(P<0.05)。结论 CSE刺激下的THP-1细胞对地塞米松的敏感性明显降低,EM可通过上调HDAC2蛋白的表达减轻氧化应激下THP-1细胞的糖皮质激素抵抗。 展开更多
关键词 红霉素 氧化应激 组蛋白去乙酰化2 糖皮质激素抵抗 慢性阻塞性肺疾病
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组蛋白去乙酰化酶参与畜禽病毒感染的作用及机制 被引量:1
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作者 谭磊 彭小烨 +3 位作者 王开心 黄小久 张帆 禹思宇 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1259-1266,共8页
畜禽在养殖过程中易受病毒感染,给养殖业造成严重的经济损失,其中部分畜禽病毒(如乙脑病毒和口蹄疫病毒)属于人兽共患性病原,对养殖工作人员及消费者健康也可造成潜在威胁。因此,防控畜禽病毒不仅可减少养殖业经济损失,同时对保障公共... 畜禽在养殖过程中易受病毒感染,给养殖业造成严重的经济损失,其中部分畜禽病毒(如乙脑病毒和口蹄疫病毒)属于人兽共患性病原,对养殖工作人员及消费者健康也可造成潜在威胁。因此,防控畜禽病毒不仅可减少养殖业经济损失,同时对保障公共健康也十分重要。组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDACs)属于表观遗传修饰酶,可通过调控组蛋白乙酰化过程影响基因表达,继而参与多种生命活动过程。大量研究表明,HDACs可通过与病毒蛋白互作或影响细胞相关信号通路来参与多种畜禽病毒感染过程,且HDACs抑制剂处理可抑制部分病毒(如伪狂犬病病毒和马立克病毒)复制,提示HDACs可作为抗畜禽病毒感染的广谱抗病毒药物靶点。因此,深入了解HDACs参与畜禽病毒感染的过程对防控畜禽病毒感染具有重要意义。作者简要介绍了HDACs及其抑制剂,重点综述了HDACs参与畜禽病毒感染的作用及机制,为深入研究HDACs调控畜禽病毒感染提供参考,为开发新型抗病毒药物提供科学指导。 展开更多
关键词 组蛋白去乙酰化(hdacs) 抑制剂 畜禽病毒感染 作用及机制
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克拉霉素对激素反应性通路中组蛋白去乙酰化酶2及糖皮质激素受体的影响 被引量:1
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作者 尚曙玉 瞿伟 刘勇华 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期688-692,719,共6页
目的观察克拉霉素对激素反应性通路中组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)及糖皮质激素受体(GR)的影响,探讨克拉霉素对烟雾暴露哮喘小鼠可能的治疗作用。方法选择BALB/c小鼠作为研究对象,通过卵蛋白致敏激发建立哮喘模型组(OVA组)、烟雾暴露哮喘组... 目的观察克拉霉素对激素反应性通路中组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)及糖皮质激素受体(GR)的影响,探讨克拉霉素对烟雾暴露哮喘小鼠可能的治疗作用。方法选择BALB/c小鼠作为研究对象,通过卵蛋白致敏激发建立哮喘模型组(OVA组)、烟雾暴露哮喘组(SEA组)以及哮喘接触烟雾暴露后通过克拉霉素治疗组(CAM组),同时设立对照组平行比较。采用组织病理学检测各组小鼠肺组织炎症情况,并通过PCR检测肺组织中HDAC2mRNA的表达情况和Western blot检测肺组织中HDAC2和GR蛋白的表达。结果组织病理学观察OVA组和SEA组均存在肺组织气道炎症,其中SEA组纤毛被严重破坏,而CAM组炎症细胞浸润减弱。与CAM组相比,SEA组小鼠支气管肺泡灌洗液中IL-4和IL-8水平均显著提高(104.36±14.39 vs.65.49±10.82、681.35±66.18 vs.321.49±90.37,P=0.031、0.017)。CAM组HDAC2mRNA表达显著高于SEA组(0.062±0.013 vs.0.031±0.015,P=0.032)。Western blot检测结果显示,与CAM组相比,SEA组HDAC2蛋白(0.23±0.017 vs.0.49±0.022,P=0.033)和GR蛋白(0.19±0.014 vs.0.64±0.023,P=0.011)表达均显著降低。结论克拉霉素能抑制烟雾暴露的哮喘小鼠气道炎症反应,作用机制可能通过与GR相结合,影响下游HDAC2基因表达有关。 展开更多
关键词 克拉霉素 烟雾暴露 哮喘 炎症 组蛋白去乙酰化2 糖皮质激素受体
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克拉霉素对烟雾暴露哮喘小鼠肺组织中组蛋白去乙酰化酶2及糖皮质激素受体α表达的影响 被引量:6
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作者 刘春 邓述恺 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期154-159,共6页
目的探讨克拉霉素对烟雾暴露哮喘小鼠肺组织中组蛋白去乙酰化酶2及糖皮质激素受体α表达的影响。方法将40只SPF级BALB/c雌性小鼠按随机数字表法随机分为对照组(Control group),哮喘组(OVA group),哮喘+烟雾暴露组(SEA group),哮喘+烟雾... 目的探讨克拉霉素对烟雾暴露哮喘小鼠肺组织中组蛋白去乙酰化酶2及糖皮质激素受体α表达的影响。方法将40只SPF级BALB/c雌性小鼠按随机数字表法随机分为对照组(Control group),哮喘组(OVA group),哮喘+烟雾暴露组(SEA group),哮喘+烟雾暴露+克拉霉素干预组(CAM group),每组10只。通过卵蛋白致敏激发建立哮喘模型,哮喘小鼠烟雾暴露建立烟雾暴露哮喘小鼠,给予烟雾暴露小鼠克拉霉素干预。小鼠肺组织切片HE染色,组织病理学观察不同组小鼠肺组织病理变化及炎症评分(UNNDERWOOD标准);Elisa法检测小鼠支气管肺泡灌洗液中白介素(IL-4)及CXCL8炎症介质的表达水平;采用组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)活性检测试剂盒检测不同组小鼠肺组织中组蛋白去乙酰化酶2活性;Western blot法检测小鼠肺组织组蛋白去乙酰化酶2及糖皮质激素受体α蛋白表达。结果肺组织病理切片示哮喘组及烟雾暴露哮喘组小鼠肺组织炎症显著,克拉霉素干预组小鼠肺组织炎症减轻,病理炎症评分克拉霉素干预组炎症评分(1.833±.0373)低于烟雾暴露哮喘组(4.917±0.187)(P=0.031);克拉霉素干预组小鼠肺组织灌洗液中IL-4(60.78411±11.8858)及CXCL8(313.421±96.5448)低于烟雾暴露哮喘组(P=0.042,P=0.027);与烟雾暴露哮喘组(124.444±16.960)相比,克拉霉素干预组小鼠肺组织中HDAC2(266.889±28.205)活性提高(P=0.035),同时HDAC2及GRα表达升高(P=0.041,P=0.035)。结论克拉霉素可降低烟雾暴露哮喘小鼠肺组织炎症反应,改善小鼠肺组织中组蛋白去乙酰化酶2及糖皮质激素受体α的表达。 展开更多
关键词 克拉霉素 烟草暴露 组蛋白去乙酰化2 糖皮质激素受体Α
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重组组蛋白去乙酰化酶2-pEGFP-C2质粒的构建及表达
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作者 章慧 黄成 +5 位作者 卞尔保 赵斌 吴宝明 刘昌伟 陈小霞 李俊 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期812-816,共5页
目的将组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)基因克隆入pEGFP-C2载体,探讨构建的质粒转染进非洲绿猴肾成纤维细胞COS-7株相关蛋白和mRNA的表达及蛋白分布部位的情况。方法从人肝癌细胞(HepG2)中获得组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)的cDNA,采用Xho I和Bam... 目的将组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)基因克隆入pEGFP-C2载体,探讨构建的质粒转染进非洲绿猴肾成纤维细胞COS-7株相关蛋白和mRNA的表达及蛋白分布部位的情况。方法从人肝癌细胞(HepG2)中获得组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)的cDNA,采用Xho I和BamH I双酶切,用T4连接酶将该cDNA连接pEGFP-C2质粒,将构建成功的pEGFP-C2-HDAC2质粒经PCR、限制性内切酶酶切和测序鉴定后转染非洲绿猴肾成纤维细胞(COS-7),荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,RT-PCR和Western blot鉴定HDAC2的表达。结果双酶切鉴定可见HDAC2质粒片段,转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达,PCR结果可检测到HDAC2 mRNA表达,同时Western blot可检测HDAC2蛋白和GFP蛋白的表达。结论成功构建了重组pEGFP-C2-HDAC2表达质粒,HDAC2蛋白可与绿色荧光蛋白在COS-7细胞中融合表达。 展开更多
关键词 组蛋白去乙酰化2 COS-7 融合蛋白 PEGFP-C2 HEPG2 绿色荧光蛋白
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小鼠组蛋白去乙酰化酶2多肽抗血清的制备
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作者 朱华 梁良 +3 位作者 盛树力 黄澜 徐艳峰 秦川 《中国比较医学杂志》 CAS 2013年第4期15-18,F0002,共5页
目的利用人工合成小鼠组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)多肽制备特异性抗HDAC2抗血清,用于相关疾病的体内外诊断。方法根据HDAC2基因编码的氨基酸序列合成多肽,与载体偶联后免疫动物,所制备的抗血清用ELISA、Western blo... 目的利用人工合成小鼠组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)多肽制备特异性抗HDAC2抗血清,用于相关疾病的体内外诊断。方法根据HDAC2基因编码的氨基酸序列合成多肽,与载体偶联后免疫动物,所制备的抗血清用ELISA、Western blot及免疫组织化学方法鉴定。结果 ELISA检测表明所制备的抗血清可同多肽抗原发生阳性反应,效价1∶4 000;Western blot结果显示抗血清可与多肽抗原及APP/PS1转基因小鼠的脑组织发生反应;免疫血清1∶100,1∶200,1∶400,1∶800四个稀释度均能与小鼠脑组织中的HDAC2反应。结论所制备的多肽抗血清可识别组织及血清中的HDAC2,可应用于相关领域的体内外研究。 展开更多
关键词 组蛋白去乙酰化2 多肽 抗体
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组蛋白去乙酰化酶SIR2与染色质沉默 被引量:3
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作者 李晓雪 陆军 +1 位作者 罗巅辉 黄百渠 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期484-488,共5页
DNA的大部分区域通过包装成特殊的染色质结构而失去活性称为染色质沉默。这些特殊的染色质结构在维持染色体结构稳定和基因调控中起重要作用。有实验表明,沉默染色质的组蛋白H3和H4的的氨基末端尾部相对于基因组的其他区域是低乙酰化的... DNA的大部分区域通过包装成特殊的染色质结构而失去活性称为染色质沉默。这些特殊的染色质结构在维持染色体结构稳定和基因调控中起重要作用。有实验表明,沉默染色质的组蛋白H3和H4的的氨基末端尾部相对于基因组的其他区域是低乙酰化的。组蛋白去乙酰化酶SIR2(silent information regulator2)是参与染色质沉默的一种重要的蛋白质。SIR2具有两种相关联的酶活性,组蛋白去乙酰化酶活性和NAD高能骨架的断裂活性,并在酶反应过程中产生一种新的产物氧代乙酰基ADP核糖基(O-acetyl-ADP-ribose)。SIR2的组蛋白去乙酰化酶活性为研究SIR2与沉默染色质的组蛋白低乙酰化状态的关系提供了直接证据。而SIR2的这两种酶活性的关系也表明,组蛋白去乙酰化酶活性不是SIR2惟一的功能。SIR2的NAD水解酶活性和O-acetyl-ADP-ribose的合成过程也可能是染色质沉默机制所必需的。 展开更多
关键词 组蛋白去乙酰化 SIR2 染色质沉默 组蛋白乙酰转移 NAD
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂通过下调MCM 2-7表达抑制神经胶质瘤细胞增殖 被引量:2
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作者 李慧锋 袁忠民 +5 位作者 吴森斌 马莹 赵凡一 何伟文 梁建峰 伍健伟 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期530-538,共9页
【目的】探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)抑制神经胶质瘤细胞增殖的机制。【方法】体外培养U251和H4细胞,用组蛋白去乙酰化酶抑制剂:包括帕比司他(LBH589)和M344、伏立诺他(SAHA)处理后,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细... 【目的】探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)抑制神经胶质瘤细胞增殖的机制。【方法】体外培养U251和H4细胞,用组蛋白去乙酰化酶抑制剂:包括帕比司他(LBH589)和M344、伏立诺他(SAHA)处理后,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期进程改变,Western blotting和RT-qPCR法分别检测minichromo⁃some maintenance(MCM)蛋白家族成员MCM2、MCM3、MCM4、MCM5、MCM6和MCM7的mRNA和蛋白表达水平。用组蛋白去乙酰化酶抑制剂:包括帕比司他和曲古霉素(TSA)处理U251细胞后,BrdU掺入实验检测细胞增殖和DNA复制能力。用MCM抑制剂环丙沙星(CPX)处理U251和H4细胞,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期进程改变。【结果】与对照组相比,HDACIs降低了U251和H4活细胞数量(P<0.05);HDACIs组BrdU的掺入率降低(P<0.05);HDACIs减少细胞周期S期的比率(P<0.05);Western blotting和qPCR结果显示,HDACIs降低MCM2-7 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05);与对照组相比,CPX降低了U251和H4活细胞数量(P<0.05),减少细胞周期S期的比率(P<0.05)。【结论】HDACIs通过下调MCM2-7表达抑制神经胶质瘤细胞增殖。 展开更多
关键词 神经胶质瘤 组蛋白去乙酰化抑制剂 MCM2-7 细胞增殖
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香烟烟雾提取物下调小鼠C2C12成肌细胞组蛋白去乙酰化酶2表达并增强炎性细胞因子释放 被引量:1
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作者 麻芝英 钟小宁 +4 位作者 何志义 梁毅 黄冬妹 肖影 毛从政 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期312-315,320,共5页
目的 观察香烟烟雾暴露后, 小鼠C2C12成肌细胞内炎症介质、 组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)和核因子κB(NF-κB)的变化。方法 培养小鼠C2C12成肌细胞, 用香烟烟雾提取物(CSE)进行处理。采用MTT法观察CSE对细胞生长的影响, 以确定作用... 目的 观察香烟烟雾暴露后, 小鼠C2C12成肌细胞内炎症介质、 组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)和核因子κB(NF-κB)的变化。方法 培养小鼠C2C12成肌细胞, 用香烟烟雾提取物(CSE)进行处理。采用MTT法观察CSE对细胞生长的影响, 以确定作用于细胞的合适浓度。将培养6-7 d的C2C12细胞接种到6孔板, 分为对照组和(6.25、12.50、25.0)mL/L CSE组, 培养24 h。ELISA测定各组细胞上清液白细胞介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量; 实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞HDAC2 mRNA的表达; Western blot法检测各组细胞中HDAC2的蛋白相对表达量; 免疫共沉淀技术检测细胞内HDAC2/NF-κB复合物。结果MTT结果提示终浓度为50 mL/L的CSE抑制C2C12细胞的生长; CSE刺激24 h后, C2C12细胞IL-8和TNF-α释放增加, HDAC2的mRNA及蛋白相对表达量减少, 并在一定程度上具有浓度依赖性; 免疫共沉淀技术证实存在HDAC2/NF-κB复合物。结论 CSE下调C2C12细胞HDAC2表达, 引起炎症因子释放增加。 展开更多
关键词 香烟烟雾提取物 C2C12成肌细胞 组蛋白去乙酰化2 核因子ΚB 炎症
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂tubastatin A促进嗜肺军团菌感染RAW264.7细胞自噬的机制 被引量:1
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作者 杨晓辰 曹秀琴 +1 位作者 盛琳琳 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期693-701,共9页
目的探讨组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)在嗜肺军团菌干扰巨噬细胞自噬中的作用及机制。方法采用(10、5、2.5)μmol/L tubastatin A(TubA)处理RAW264.7巨噬细胞,CCK-8法检测RAW264.7巨噬细胞的增殖活性确定TubA的半数抑制浓度(IC50)。建立嗜... 目的探讨组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)在嗜肺军团菌干扰巨噬细胞自噬中的作用及机制。方法采用(10、5、2.5)μmol/L tubastatin A(TubA)处理RAW264.7巨噬细胞,CCK-8法检测RAW264.7巨噬细胞的增殖活性确定TubA的半数抑制浓度(IC50)。建立嗜肺军团菌感染RAW264.7巨噬细胞感染模型,实验分为无TubA组(每组设细胞对照组、灭活菌组、活菌组),(10、5、2.5)μmol/L TubA处理组(每组均设细胞对照组、灭活菌组、活菌组)。嗜肺军团菌感染6、12、24、48 h,收集各组细胞。细菌增殖实验检测嗜肺军团菌在RAW264.7巨噬细胞内增殖的情况;pmCherry-C1-EGFP-LC3B质粒转染RAW264.7小鼠巨噬细胞检测各组内自噬流变化;实时定量PCR和Western blot法检测组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)、P62、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、α微管蛋白(α-tubulin)、含缬酪肽蛋白(p97/VCP)、热休克蛋白90(HSP90)、HSP70、热休克转录因子1(HSF1)和纤维型肌动蛋白(F-actin)的mRNA及蛋白表达水平。结果TubA的IC50为50μmol/L。与RAW264.7细胞正常对照组相比,加入TubA后,嗜肺军团菌在小鼠巨噬细胞内增殖明显减少。在无HDAC6抑制剂组中,与正常对照组相比,活菌组比灭活菌组对自噬流的抑制作用更强。在HDAC6抑制剂TubA组中,活菌组的绿色荧光亮点均减少,自噬流增加。嗜肺军团菌的灭活菌和活菌分别作用于RAW264.7巨噬细胞6、12、24、48 h,与正常对照RAW264.7细胞相比,TubA嗜肺军团菌干扰组HDAC6、α-tubulin、p97/VCP、P62 mRNA和蛋白表达均降低。结论嗜肺军团菌干扰RAW264.7巨噬细胞自噬与HDAC6/P62/LC3B和HDAC6/p97/HSF1信号通路有关。 展开更多
关键词 嗜肺军团菌 组蛋白去乙酰化6(hdac6) Tubastatin A(TubA)
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HDAC6通过介导FLOT2去乙酰化维持其在鼻咽癌中的稳定及促瘤作用
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作者 罗辰骅 温彬斌 +1 位作者 刘洁 杨文龙 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期687-697,共11页
目的:浮舰蛋白(flotillin-2,FLOT2)是典型的致瘤蛋白和潜在的肿瘤治疗靶点,但靶向FLOT2的干预策略仍未确定。翻译后修饰作为表观调控的重要方式,对蛋白质的活性、定位和稳定性等特性具有重要的调控作用,揭示蛋白质翻译后修饰的调控机制... 目的:浮舰蛋白(flotillin-2,FLOT2)是典型的致瘤蛋白和潜在的肿瘤治疗靶点,但靶向FLOT2的干预策略仍未确定。翻译后修饰作为表观调控的重要方式,对蛋白质的活性、定位和稳定性等特性具有重要的调控作用,揭示蛋白质翻译后修饰的调控机制和功能是靶向治疗开发的一种有效手段。本研究旨在研究鼻咽癌中FLOT2赖氨酸乙酰化修饰的调控机制及其功能,为靶向FLOT2的肿瘤干预手段提供新思路。方法:利用PhosphoSitePlus数据库分析FLOT2的赖氨酸乙酰化位点,并构建赖氨酸乙酰化位点突变的FLOT2突变体[FLOT2(K211R)];用组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylases, HDAC)抑制剂曲古菌素A(trichostatin A, TSA)、 Sirt家族去乙酰化酶抑制剂烟酰胺(nicotinamide,NAM)处理鼻咽癌细胞,TSA处理转染FLOT2突变体质粒的人胚肾细胞(human embryonic kidney,HEK)-293T细胞;利用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)检测FLOT2的总赖氨酸乙酰化水平以及特定赖氨酸(K)位点突变对FLOT2总赖氨酸乙酰化水平的影响。用蛋白质印迹法检测TSA处理未转染/转染FLOT2突变体质粒后的鼻咽癌细胞中FLOT2/FLAG-FLOT2的蛋白质表达,实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription PCR,real-time RT-PCR)检测TSA处理后鼻咽癌细胞中FLOT2 mRNA的表达。用TSA分别联合MG132或氯喹(chloroquine,CQ)处理鼻咽癌细胞后,检测FLOT2的蛋白质表达。用放线菌酮(cycloheximide,CHX)分别处理已转染FLAG-FLOT2(WT)或FLAG-FLOT2(K211R)质粒的HEK-293T细胞,检测FLAG-FLOT2、FLOT2(K211R)的蛋白质表达水平以反映蛋白质的降解速率。通过BioGrid数据库查询FLOT2与HDAC6之间是否可能存在相互作用,并采用Co-IP验证。用FLAG-FLOT2(WT)/FLAG-FLOT2(K211R)质粒分别联合空白对照(Vector)/HDAC6质粒转染HEK-293T细胞,分为FLAG-FLOT2(WT)+Vector、 FLAG-FLOT2(WT)+HDAC6、 FLAG-FLOT2(K211R)+Vector、 FLAG-FLOT2(K211R)+HDAC6共4组,分析K211R突变对FLOT2总赖氨酸乙酰化水平的影响。在6-0B细胞中,分别过表达FLOT2(WT)和FLOT2(K211R),用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、平板克隆形成和Transwell侵袭检测FLOT2乙酰化位点突变体的生物学功能。结果:PhosphoSitePlus数据库显示FLOT2的K211位点存在乙酰化修饰,Co-IP结果证实FLOT2蛋白存在明显的乙酰化修饰,且TSA可以显著上调FLOT2的总乙酰化修饰水平,而NAM则无此作用;K211位点突变后FLOT2的总赖氨酸乙酰化水平显著下降,且不受TSA影响。TSA下调鼻咽癌细胞中FLOT2的蛋白质表达水平,而不影响FLOT2 mRNA的表达水平,也不影响转染FLAG-FLOT2(K211R)的鼻咽癌细胞中FLOT2(K211R)的蛋白质表达水平。FLOT2(K211R)的蛋白质降解速率显著慢于FLOT2(WT)的降解速率。蛋白酶体抑制剂MG132可以阻止TSA引起的FLOT2降解,溶酶体抑制剂CQ则无此功能。BioGrid数据库数据显示FLOT2与HDAC6可能存在相互作用,Co-IP结果证实FLOT2与HDAC6抗体可以相互共沉淀对方蛋白。在敲减HDAC6表达的鼻咽癌细胞中,FLOT2的总赖氨酸乙酰化水平显著提高;共转染HDAC6和FLAG-FLOT2(WT)可显著降低总赖氨酸乙酰化水平,而共转染HDAC6和FLAG-FLOT2(K211R)不影响总赖氨酸乙酰化水平。敲减HDAC6可以显著下调FLOT2的蛋白质水平而不影响其mRNA水平;MG132可以阻止敲减HDAC6引起的FLOT2降解。敲减HDAC6,FLOT2的降解速率显著加快。转染FLOT2(K211R)突变体的鼻咽癌细胞增殖速度和侵袭能力显著强于转染FLOT2(WT)的细胞。结论:FLOT2 K211位点存在乙酰化修饰,HDAC6通过介导FLOT2 K211的去乙酰化修饰抑制FLOT2经蛋白酶体途径降解,维持其在鼻咽癌中的稳定和促瘤功能。 展开更多
关键词 浮舰蛋白2 赖氨酸乙酰化 鼻咽癌 组蛋白去乙酰化6
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微小RNA-362通过调控组蛋白去乙酰化酶6抑制大鼠骨癌痛 被引量:2
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作者 郭池华 王湘 +4 位作者 刘焕 赵妍 郭玉芳 王爽 王文涛 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期706-712,共7页
目的探讨骨癌痛(BCP)大鼠模型中微小RNA(miR)-362和组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)的表达变化,以及上调miR-362产生的镇痛效应和潜在作用机制。方法大鼠骨髓腔内注射Walker 256乳腺癌细胞建立BCP模型。用质粒转染方法调控miR-362和HDAC6表达,... 目的探讨骨癌痛(BCP)大鼠模型中微小RNA(miR)-362和组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)的表达变化,以及上调miR-362产生的镇痛效应和潜在作用机制。方法大鼠骨髓腔内注射Walker 256乳腺癌细胞建立BCP模型。用质粒转染方法调控miR-362和HDAC6表达,用Van Frey纤维丝和热痛刺激仪检测大鼠机械缩足阈值(PWT)和热缩组潜伏期(PWL)变化,用qRT-PCR检测脊髓miR-362和HDAC6 mRNA表达,Western blotting检测HDAC6和核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达,用ELISA检测炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白水平,最后用荧光素酶活性实验明确miR-362与HDAC6的上下游关系。结果与sham组相比,BCP组大鼠PWT和PWL显著下降,脊髓miR-362表达显著减少,HDAC6 mRNA和蛋白显著增加(均P<0.05)。与BCP组相比,BCP+LV-miR-362组大鼠出现PWT和PWL显著上升,脊髓HDAC6 mRNA和蛋白显著减少(均P<0.05)。与BCP+LV-miR-362组比较,BCP+LV-miR-362+LV-HDAC6组大鼠PWT和PWL显著下降(均P<0.05)。此外,与BCP组相比,BCP+LV-HDAC6 siRNA组大鼠脊髓NF-κB p65、IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白显著减少(均P<0.05)。最后,与mimic miR-362+HDAC63’UTR^(MUT)组相比,mimic miR-362+HDAC63’UTR^(WT)组荧光素酶活性明显降低(P<0.05)。结论在大鼠BCP模型中,miR-362可通过“HDAC6-NF-κB p65”通路抑制BCP,提示miR-362有可能成为BCP分子治疗的新靶点。 展开更多
关键词 骨癌痛 镇痛 miR-362 组蛋白去乙酰化6(hdac6)
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组蛋白乙酰化修饰调控RAR-β2表达与宫颈病变的相关性 被引量:3
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作者 伍娇娇 冯定庆 +3 位作者 田园 徐汉杰 李兵 凌斌 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期300-304,共5页
目的:探讨组蛋白乙酰化修饰与RAR-β2表达及宫颈病变发生发展的关系。方法:收集正常宫颈、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅱ-Ⅲ和宫颈鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)组织,分别采用免疫组... 目的:探讨组蛋白乙酰化修饰与RAR-β2表达及宫颈病变发生发展的关系。方法:收集正常宫颈、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅱ-Ⅲ和宫颈鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)组织,分别采用免疫组织化学和WesternBlot方法检测AcH3、RAR—B:和Involucrin的表达;分析组蛋白乙酰化水平与RAR-β2表达及宫颈病变程度的关系。结果:随着宫颈病变的进展,AcH3、RAR-β2和Involucrin的表达逐渐降低,甚至缺失,组间差异有统计学意义(P〈0.05);组蛋白乙酰化水平与RAR-β2表达呈正相关(r=0.797,P〈0.05),AcH3和RAR-β2的表达均与宫颈病变程度呈负相关[r=-0.5479(Ach3),r=-0.585(RAR-β2),P〈0.05]。结论:组蛋白乙酰化修饰与RAR-β2表达调控有关,并可能参与宫颈癌的发生。 展开更多
关键词 组蛋白乙酰化修饰 RAR-β2 宫颈上皮内瘤变 宫颈鳞状细胞癌 分化
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组蛋白脱乙酰酶2介导的组蛋白乙酰化失衡在压力过载性心肌重构中的作用 被引量:5
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作者 罗孝美 彭昌 +2 位作者 吴书琪 张焕婷 田小春 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期584-591,共8页
目的:探讨组蛋白脱乙酰酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)介导的组蛋白乙酰化修饰失衡在压力过载性心肌重构中的调控作用。方法:选取SPF级成年昆明小鼠,通过部分结扎胸主动脉(transverse aortic con⁃striction,TAC)建立小鼠压力过载性... 目的:探讨组蛋白脱乙酰酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)介导的组蛋白乙酰化修饰失衡在压力过载性心肌重构中的调控作用。方法:选取SPF级成年昆明小鼠,通过部分结扎胸主动脉(transverse aortic con⁃striction,TAC)建立小鼠压力过载性心肌重构模型,应用表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)腹腔注射干预模型小鼠。根据随机数字表法将小鼠分为正常组、TAC组、溶剂组、假手术组和EGCG+TAC组,每组6只小鼠。收集各组小鼠心脏组织进行如下检测:Western blot检测HDAC2、第27位赖氨酸乙酰化的组蛋白H3(acetylated histone H3 at lysine 27,H3K27ac)、心肌细胞增强因子2A(myocyte enhancer factor 2A,MEF2A)和脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)蛋白表达水平;超声心动图检测小鼠心功能;ES420生物系统检测小鼠左室收缩末期压力(left ventricular end-systolic pressure,LVESP)。结果:Western blot结果显示,TAC组小鼠心肌H3K27ac水平及心脏发育相关蛋白MEF2A和BNP表达水平较假手术组显著降低(P<0.05),而EGCG+TAC组小鼠心肌H3K27ac水平及MEF2A和BNP表达水平较TAC组显著升高(P<0.05)。HDAC2表达水平在TAC组较假手术组显著升高,而EGCG+TAC组HDAC2表达水平较TAC组显著降低(P<0.05);超声心动图及LVESP结果显示,TAC组小鼠心功能及LVESP较假手术组显著降低(P<0.05),而EGCG+TAC组小鼠心功能及LVESP与TAC组相比显著升高(P<0.05)。结论:EGCG能够抑制小鼠压力过载性心肌重构。HDAC2介导的H3K27乙酰化修饰可能是EGCG抑制压力过载性心肌重构的调控靶点之一。 展开更多
关键词 组蛋白脱乙酰2 心肌重构 表没食子儿茶素没食子酸酯
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UHRF2通过其PHD结构域与组蛋白H3K9乙酰化相互作用 被引量:2
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作者 张婷 赵灵琳 +1 位作者 曾盛源 段昌柱 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1485-1490,共6页
目的:探讨UHRF2蛋白与组蛋白组蛋白H3第9位赖氨酸残基乙酰化(Histone H3 Lys9 acetylation,H3K9ac)的相互作用及两者相互作用结合区域的测定。方法:在LO2和Hep G2细胞中转染p CMV-FLAG-UHRF2,激光共聚焦分别检测UHRF2与组蛋白H3、H3K9ac... 目的:探讨UHRF2蛋白与组蛋白组蛋白H3第9位赖氨酸残基乙酰化(Histone H3 Lys9 acetylation,H3K9ac)的相互作用及两者相互作用结合区域的测定。方法:在LO2和Hep G2细胞中转染p CMV-FLAG-UHRF2,激光共聚焦分别检测UHRF2与组蛋白H3、H3K9ac和H3K14ac在细胞内的共定位。采用免疫沉淀技术分别检测UHRF2与组蛋白H3、H3K9ac和组蛋白H3第14位赖氨酸基乙酰化(Histone H3 Lys14 acetylation,H3K14ac)在细胞中的相互作用,以及用UHRF2的不同缺失体层粒分别与组蛋白H3K9ac相结合方法来检测UHRF2与之相互作用的功能性结合区域。结果:(1)UHRF2与组蛋白H3、H3K9ac和H3K14ac在LO2和Hep G2细胞中存在共定位现象。(2)在LO2和Hep G2细胞中,UHRF2与H3K9ac相互结合。(3)在正常肝细胞LO2中,UHRF2与H3K9ac相互作用的结合区域为PHD结构域。而在肝癌细胞Hep G2中,除了PHD结构域以外,YDG/SRA结构域也是UHRF2与H3K9ac的关键结构域。结论:UHRF2通过其PHD结构域与H3K9ac相互作用。 展开更多
关键词 UHRF2 组蛋白H3 组蛋白H3K9乙酰化 组蛋白H3K14乙酰化 表观遗传学
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人类N-乙酰化酶2蛋白质分子的计算机三维模拟 被引量:2
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作者 朱志远 李金恒 +1 位作者 冷伟卫 陈莹 《医学研究生学报》 CAS 2006年第8期682-684,i0010,共4页
目的:对人类N-乙酰化酶2(NAT2)蛋白质分子进行计算机三维模拟。方法:将下载的蛋白质序列结合计算机三维模拟技术对NAT2进行三维模拟,并对其进行物理、化学、生物学等特征分析,初步判断蛋白质分子的部分化学和物理学性质,对其某些功能作... 目的:对人类N-乙酰化酶2(NAT2)蛋白质分子进行计算机三维模拟。方法:将下载的蛋白质序列结合计算机三维模拟技术对NAT2进行三维模拟,并对其进行物理、化学、生物学等特征分析,初步判断蛋白质分子的部分化学和物理学性质,对其某些功能作出预测。结果:利用蛋白质序列分析软件包ANTHEPORT5.0模拟出NAT2可能的结构;预测到NAT2的蛋白等电点(pH i)=5.495,相对分子质量=33 544以及NAT2的滴定曲线和物理化学特征性曲线;对NAT2第282个氨基酸位点附近的片段绘制出HelicalW heel图。结论:能利用计算机模拟出NAT2的可能结构,并可作出一定的分析和预测,此种方法可用于NAT2基因多态性的分析。 展开更多
关键词 N-乙酰化2 蛋白质结构 计算机模拟
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