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日本血吸虫组织蛋白酶L2(SjCL2)基因巴氏毕赤酵母表达载体的构建
被引量：
2
1
作者
易冰
何蔼
+6 位作者
雷智刚
郑小英
张瑞林
孟锦绣
申川军
李卓雅
詹希美
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2004年第5期390-393,共4页
目的 扩增SjCL2基因 ,构建巴氏毕赤酵母表达载体 pPICZαB -SjCL2 ,为进一步研究其蛋白酶的功能奠定基础。方法 运用RT -PCR技术 ,从日本血吸虫 (中国大陆株 )成虫总RNA中扩增获得SjCL2基因 ;将其定向克隆至巴氏毕赤酵母表达载体pPICZ...
目的 扩增SjCL2基因 ,构建巴氏毕赤酵母表达载体 pPICZαB -SjCL2 ,为进一步研究其蛋白酶的功能奠定基础。方法 运用RT -PCR技术 ,从日本血吸虫 (中国大陆株 )成虫总RNA中扩增获得SjCL2基因 ;将其定向克隆至巴氏毕赤酵母表达载体pPICZαB质粒 ;经KpnⅠ、XbaⅠ双酶切分析和PCR鉴定筛选出阳性克隆 ,测序分析SjCL2基因并确定其读码框的正确插入。结果 利用RT -PCR技术从日本血吸虫成虫总RNA中扩增到约 1Kb大小的SjCL2基因 ,通过双酶切分析、PCR鉴定以及DNA序列分析确定SjCL2基因被克隆到巴氏毕赤酵母表达载体 pPICZαB中。 结论 成功构建了含有SjCL2基因编码区序列的巴氏毕赤酵母表达载体 pPICZαB
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关键词
日本血吸虫
组织蛋白酶l2
基因克隆
巴氏毕赤酵母表达载体
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职称材料
日本血吸虫组织蛋白酶L2基因扩增及克隆
被引量：
2
2
作者
雷智刚
何蔼
+3 位作者
李卓雅
孟锦绣
易冰
詹希美
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2003年第6期32-34,共3页
目的 体外扩增日本血吸虫中国大陆株组织蛋白酶L2 (SjCL2 )的编码区基因序列 ,将其克隆到真核表达质粒pcDNA3中 ,为进一步对其进行功能研究奠定基础。方法 用TRIZOL分离日本血吸虫成虫RNA ,RT -PCR扩增目的基因 ,将扩增产物定向克隆...
目的 体外扩增日本血吸虫中国大陆株组织蛋白酶L2 (SjCL2 )的编码区基因序列 ,将其克隆到真核表达质粒pcDNA3中 ,为进一步对其进行功能研究奠定基础。方法 用TRIZOL分离日本血吸虫成虫RNA ,RT -PCR扩增目的基因 ,将扩增产物定向克隆到真核表达载体 pcDNA3中。 结果 RT -PCR特异性扩增出SjCL2编码区基因序列 ,其片段大小为1kb左右 ,经酶切和PCR鉴定表明所构建的质粒pcDNA -SjCL2中含有所扩增的基因序列。 结论 RT -PCR扩增的SjCL2编码区基因序列与预期长度相符合 ,成功构建了含SjCL2编码区基因的真核表达质粒pcDNA -SjCL2。
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关键词
日本血吸虫
组织蛋白酶l2
基因扩增
基因克隆
基因表达
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职称材料
片形吸虫“中间型”组织蛋白酶L2基因的原核表达及鉴定
被引量：
2
3
作者
王晓旭
曾敏浩
+3 位作者
吕庆博
邱鸿宇
常巧呈
王春仁
《黑龙江八一农垦大学学报》
2019年第6期29-34,共6页
组织蛋白酶L2(CathepsinL2,CatL2)存在于片形吸虫发育的各个时期,具有潜在的免疫保护性及诊断性。为了获得片形吸虫"中间型"("intermediate form"of Fasciola,Fsp)CatL2基因的重组蛋白,根据GenBank中公布的肝片形...
组织蛋白酶L2(CathepsinL2,CatL2)存在于片形吸虫发育的各个时期,具有潜在的免疫保护性及诊断性。为了获得片形吸虫"中间型"("intermediate form"of Fasciola,Fsp)CatL2基因的重组蛋白,根据GenBank中公布的肝片形吸虫组织蛋白酶L2基因设计特异性引物,应用RT-PCR获得虫体的FspCatL2基因,经TA克隆后,进行测序及生物学分析;进一步构建原核表达重组质粒PET-28a(+)-FspCatL2,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行诱导表达,将纯化后的蛋白进行SDS-PAGE和Western Blot分析。结果表明扩增得到的FspCatL2基因的大小为933 bp,编码311个氨基酸,生物信息学显示FspCatL2有较多的α-螺旋,具有较好的抗原表位,推测该蛋白应有较好的抗原性。SDS-PAGE结果显示在35 kDa处有目的条带,Western Blot分析发现重组FspCatL2与片形吸虫"中间型"阳性血清发生反应,而与阴性血清不发生反应。实验成功克隆表达了片形吸虫"中间型"组织蛋白酶L2,为进一步研究其功能奠定了基础。
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关键词
片形吸虫中间型
组织蛋白酶l2
表达分析
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职称材料
题名
日本血吸虫组织蛋白酶L2(SjCL2)基因巴氏毕赤酵母表达载体的构建
被引量：
2
1
作者
易冰
何蔼
雷智刚
郑小英
张瑞林
孟锦绣
申川军
李卓雅
詹希美
机构
中山大学中山医学院寄生虫学教研室
出处
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2004年第5期390-393,共4页
基金
国家自然科学基金项目 (No 3 0 170 83 77)
广东省高教厅2 11工程重点学科建设基金资助项目
文摘
目的 扩增SjCL2基因 ,构建巴氏毕赤酵母表达载体 pPICZαB -SjCL2 ,为进一步研究其蛋白酶的功能奠定基础。方法 运用RT -PCR技术 ,从日本血吸虫 (中国大陆株 )成虫总RNA中扩增获得SjCL2基因 ;将其定向克隆至巴氏毕赤酵母表达载体pPICZαB质粒 ;经KpnⅠ、XbaⅠ双酶切分析和PCR鉴定筛选出阳性克隆 ,测序分析SjCL2基因并确定其读码框的正确插入。结果 利用RT -PCR技术从日本血吸虫成虫总RNA中扩增到约 1Kb大小的SjCL2基因 ,通过双酶切分析、PCR鉴定以及DNA序列分析确定SjCL2基因被克隆到巴氏毕赤酵母表达载体 pPICZαB中。 结论 成功构建了含有SjCL2基因编码区序列的巴氏毕赤酵母表达载体 pPICZαB
关键词
日本血吸虫
组织蛋白酶l2
基因克隆
巴氏毕赤酵母表达载体
Keywords
Schistosoma japonicum
proteinase cathepsin
l
2
gene c
l
oning
Pichia pastoris yeast expression vector
分类号
R383.24 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
日本血吸虫组织蛋白酶L2基因扩增及克隆
被引量：
2
2
作者
雷智刚
何蔼
李卓雅
孟锦绣
易冰
詹希美
机构
中山大学中山医学院寄生虫学教研室
出处
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2003年第6期32-34,共3页
基金
国家自然科学基金 (批准号 :3 0 170 83 77)
广东省高教厅"2 11"工程科研项目基金资助
文摘
目的 体外扩增日本血吸虫中国大陆株组织蛋白酶L2 (SjCL2 )的编码区基因序列 ,将其克隆到真核表达质粒pcDNA3中 ,为进一步对其进行功能研究奠定基础。方法 用TRIZOL分离日本血吸虫成虫RNA ,RT -PCR扩增目的基因 ,将扩增产物定向克隆到真核表达载体 pcDNA3中。 结果 RT -PCR特异性扩增出SjCL2编码区基因序列 ,其片段大小为1kb左右 ,经酶切和PCR鉴定表明所构建的质粒pcDNA -SjCL2中含有所扩增的基因序列。 结论 RT -PCR扩增的SjCL2编码区基因序列与预期长度相符合 ,成功构建了含SjCL2编码区基因的真核表达质粒pcDNA -SjCL2。
关键词
日本血吸虫
组织蛋白酶l2
基因扩增
基因克隆
基因表达
Keywords
Schistosoma japonicum
proteinase cathepsin
RT-PCR
gene c
l
oning
分类号
R383.24 [医药卫生—医学寄生虫学]
R394 [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
片形吸虫“中间型”组织蛋白酶L2基因的原核表达及鉴定
被引量：
2
3
作者
王晓旭
曾敏浩
吕庆博
邱鸿宇
常巧呈
王春仁
机构
黑龙江八一农垦大学动物科技学院
出处
《黑龙江八一农垦大学学报》
2019年第6期29-34,共6页
基金
国家“十三五”重点研发计划资助项目(2017YFD0501200)
文摘
组织蛋白酶L2(CathepsinL2,CatL2)存在于片形吸虫发育的各个时期,具有潜在的免疫保护性及诊断性。为了获得片形吸虫"中间型"("intermediate form"of Fasciola,Fsp)CatL2基因的重组蛋白,根据GenBank中公布的肝片形吸虫组织蛋白酶L2基因设计特异性引物,应用RT-PCR获得虫体的FspCatL2基因,经TA克隆后,进行测序及生物学分析;进一步构建原核表达重组质粒PET-28a(+)-FspCatL2,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行诱导表达,将纯化后的蛋白进行SDS-PAGE和Western Blot分析。结果表明扩增得到的FspCatL2基因的大小为933 bp,编码311个氨基酸,生物信息学显示FspCatL2有较多的α-螺旋,具有较好的抗原表位,推测该蛋白应有较好的抗原性。SDS-PAGE结果显示在35 kDa处有目的条带,Western Blot分析发现重组FspCatL2与片形吸虫"中间型"阳性血清发生反应,而与阴性血清不发生反应。实验成功克隆表达了片形吸虫"中间型"组织蛋白酶L2,为进一步研究其功能奠定了基础。
关键词
片形吸虫中间型
组织蛋白酶l2
表达分析
Keywords
intermediate form of Fascio
l
a
Cathepsin
l
2
expression ana
l
ysis
分类号
R383.24 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
日本血吸虫组织蛋白酶L2(SjCL2)基因巴氏毕赤酵母表达载体的构建
易冰
何蔼
雷智刚
郑小英
张瑞林
孟锦绣
申川军
李卓雅
詹希美
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2004
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
日本血吸虫组织蛋白酶L2基因扩增及克隆
雷智刚
何蔼
李卓雅
孟锦绣
易冰
詹希美
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2003
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
片形吸虫“中间型”组织蛋白酶L2基因的原核表达及鉴定
王晓旭
曾敏浩
吕庆博
邱鸿宇
常巧呈
王春仁
《黑龙江八一农垦大学学报》
2019
2
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职称材料
已选择
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条
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参考文献
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