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组织蛋白酶B通过瞬时受体电位黏蛋白-1对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体活化的影响 被引量:1
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作者 段娟娟 张启芳 +2 位作者 黄宗华 曾红梅 柏华 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期208-215,共8页
目的探索在细胞氧化应激模型和特异性基因沉默细胞模型中,组织蛋白酶B(CTSB)通过瞬时受体电位黏蛋白-1(TRPML1)对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化的影响。方法对体外培养的BV2细胞分别用H2O2、钙敏感性受体激动剂... 目的探索在细胞氧化应激模型和特异性基因沉默细胞模型中,组织蛋白酶B(CTSB)通过瞬时受体电位黏蛋白-1(TRPML1)对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化的影响。方法对体外培养的BV2细胞分别用H2O2、钙敏感性受体激动剂GdCl3、CTSB抑制剂CA-074Me单独或同时处理,用酶联免疫吸附实验方法检测白细胞介素-1β(IL-1β)和半胱天冬酶-1-蛋白;用定量PCR方法检测各组BV2细胞的NLRP3mRNA。用MTT法检测各组BV2细胞生长活力。用定量PCR方法检测BV2细胞中胱抑素C和TRPML1的mRNA,用Westernblot检测TRPML1、CTSB、组织蛋白酶D(CTSD)、组织蛋白酶L(CTSL)、组织蛋白酶V(CTSV)蛋白。针对TRPML1基因靶序列设计特异性小干扰RNA(siRNA),在BV2细胞中建立TRPML1基因沉默细胞株(命名为Tr-si-BV2细胞),通过H2O2处理,再用Westernblot检测Tr-si-BV2细胞或对照组细胞中的TRPML1、CTSB和转录因子EB(TFEB)蛋白。结果用H2O2处理后,BV2细胞中半胱天冬酶-1蛋白和NLRP3mRNA表达增加,加用GdCl3处理后,BV2细胞中IL-1β显著增加(P=0.0036);使用CA-074Me处理后,NLRP3mRNA(P=0.037)、半胱天冬酶-1(P=0.021)、IL-1β(P=0.036)均显著减少。H2O2组和H2O2+GdCl3组的细胞生长较慢。在H2O2浓度为200μmol/L的处理组,BV2细胞中CTSBmRNA与TRPML1mRNA、或CTSB与TRPML1蛋白的表达均有相似的变化;沉默TRPML1基因表达水平后能够抑制H2O2诱导的CTSB蛋白表达。组织蛋白酶CTSD、CTSL、CTSV的变化不受H2O2处理浓度高低的影响。在进行TRPML1基因沉默处理的BV2细胞中,H2O2+siRNA处理组与H2O2处理组比较,CTSB蛋白的表达显著减少(P=0.021)。结论在小胶质细胞的氧化应激模型中,CTSB具有调节NLRP3炎症小体活化的作用,这种作用有可能通过钙离子通道蛋白TRPML1介导。 展开更多
关键词 过氧化氢 组织蛋白酶b 炎症小体 基因沉默 瞬时受体电位黏蛋白-1
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烟夜蛾组织蛋白酶B酶原基因的克隆、序列分析和原核表达 被引量:9
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作者 赵艳艳 刘建兵 +2 位作者 罗梅浩 郭线茹 原国辉 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1121-1128,共8页
利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术从烟夜蛾Helicoverpa assulta(Guene)雌虫卵巢中扩增得到了组织蛋白酶B酶原基因(cathepsin B,CB)cDNA片段,将其克隆至pMD19-T载体。测序结果表明,该片段长度为1017bp,含有组织蛋白酶B酶原基因完... 利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术从烟夜蛾Helicoverpa assulta(Guene)雌虫卵巢中扩增得到了组织蛋白酶B酶原基因(cathepsin B,CB)cDNA片段,将其克隆至pMD19-T载体。测序结果表明,该片段长度为1017bp,含有组织蛋白酶B酶原基因完整开放阅读框架(ORF)(Gen Bank登录号:EF154237)。序列分析结果显示:烟夜蛾组织蛋白酶B(HassCB)编码338个氨基酸残基,预测N-末端含有长度为21个氨基酸残基的信号肽序列;去除信号肽序列后,预测成熟蛋白分子量为35.5kDa,等电点为5.96。氨基酸序列比对结果表明,HassCB与其他昆虫的组织蛋白酶B酶原氨基酸序列有较高的一致性。将去除信号肽序列的HassCB(HassCBa)重组到表达载体pGEX-4T-1中,并转入原核细胞中表达,SDS-PAGE和Western印迹分析表明:该基因能在大肠杆菌BL21中表达,电泳检测到一条大约61kDa的目的条带,与预测的融合蛋白分子量相符。用该基因制备多克隆抗体并测得该抗体对重组表达的HassCBa的效价为1∶51200。通过免疫印迹检测证实,此抗体既能识别重组表达的HassCBa,又能识别烟夜蛾卵巢匀浆液中的HassCB。 展开更多
关键词 烟夜蛾 组织蛋白酶b 基因克隆 序列分析 原核表达 免疫印迹
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扶桑绵粉蚧组织蛋白酶B基因的克隆、原核表达和不同发育阶段表达分析 被引量:8
3
作者 罗梅 董章勇 +2 位作者 宾淑英 廖泓之 林进添 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期276-283,共8页
昆虫组织蛋白酶B在昆虫代谢过程中发挥重要作用。本研究利用RACE技术克隆了扶桑绵粉蚧Phenacoccus solenopsis Tinsley组织蛋白酶B基因的开放阅读框(ORF)序列,命名为PsCb(GenBank登录号:JQ727999)。生物信息学分析表明,该基因的开放阅... 昆虫组织蛋白酶B在昆虫代谢过程中发挥重要作用。本研究利用RACE技术克隆了扶桑绵粉蚧Phenacoccus solenopsis Tinsley组织蛋白酶B基因的开放阅读框(ORF)序列,命名为PsCb(GenBank登录号:JQ727999)。生物信息学分析表明,该基因的开放阅读框包含927bp的片段,编码308个氨基酸。多序列比对表明,该基因编码的蛋白在N端变异较大,在C端保守性高。组织蛋白酶B基因的系统进化树结果表明扶桑绵粉蚧组织蛋白酶独自成为一支。原核表达电泳检测到一条大约35kDa的目的条带,与预测的蛋白分子量相符。组织蛋白酶B基因在扶桑绵粉蚧各个虫态均有表达,卵期表达量相对较低,2龄若虫期达到最高峰,然后下降。本研究为进一步研究该基因的功能并开发出组织蛋白酶抑制剂,从而研制出扶桑绵粉蚧杀卵剂和胚胎发育抑制剂等提供理论依据。 展开更多
关键词 扶桑绵粉蚧 组织蛋白酶b 基因克隆 原核表达 基因表达谱
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基质金属蛋白酶-9及其组织抑制物-1与颈动脉粥样斑块稳定性相关研究 被引量:11
4
作者 高峰 宋水江 +2 位作者 吴继敏 闻树群 钟国栋 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1700-1702,共3页
目的:探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、MMP-9/TIMP-1与脑梗死患者颈动脉粥样斑块稳定性的相关性。方法:80例动脉粥样硬化性脑梗死患者按TCD微栓子检测结果分为微栓子阴性组70例和微栓子阳性组10例,20例... 目的:探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、MMP-9/TIMP-1与脑梗死患者颈动脉粥样斑块稳定性的相关性。方法:80例动脉粥样硬化性脑梗死患者按TCD微栓子检测结果分为微栓子阴性组70例和微栓子阳性组10例,20例正常人作为对照组,分别测定血浆MMP-9、TIMP-1水平。结果:脑梗死患者血浆MMP-9、TIMP-1水平明显高于正常对照组(P<0.01),相关性分析发现MMP-9水平与TIMP-1水平呈正相关(r=0.76,P<0.01)。MMP-9/TIMP-1比值仅在微栓子阳性组明显增高。结论:血浆MMP-9参与了脑梗死的病理生理过程,血浆MMP-9和MMP-9/TIMP-1与颈动脉粥样斑块的不稳定性呈正相关。 展开更多
关键词 脑梗塞 颈动脉粥硬化斑块 明胶酶b 金属蛋白酶1组织抑制剂
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亚硝酸盐胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺抗氧化酶、热休克蛋白和组织蛋白酶B基因表达量的影响 被引量:14
5
作者 郭慧 谭翠婷 +3 位作者 游林玉 申玉春 卢芷程 朱春华 《广东海洋大学学报》 CAS 2017年第3期117-122,共6页
用实时荧光定量PCR技术研究在20 mg/L亚硝酸盐胁迫下,凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺中锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和硫氧还蛋白(TRx)等抗氧化相关酶以及热休克蛋白HSP70、组织蛋白酶... 用实时荧光定量PCR技术研究在20 mg/L亚硝酸盐胁迫下,凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺中锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和硫氧还蛋白(TRx)等抗氧化相关酶以及热休克蛋白HSP70、组织蛋白酶B(CTSB)的基因表达量变化。结果表明,与对照组相比,在胁迫24 h时Mn-SOD基因表达量显著升高,CAT基因表达量在12~48 h升高,GPx基因表达量在24和48 h时升高,TRx基因表达量24 h时升高,而后在48和72 h时降低,Hsp70基因表达量在48和72 h时升高,CTSB基因表达量在48 h和72 h时升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。在亚硝酸盐胁迫下,抗氧化酶相关基因、Hsp70和CTSB基因的表达量均被显著诱导进行免疫防御,4种抗氧化相关基因和Hsp70、CTSB基因对亚硝酸盐胁迫敏感度不同,在抗亚硝酸盐胁迫过程中有一定协同作用。 展开更多
关键词 亚硝酸盐 凡纳滨对虾 抗氧化基因 热休克蛋白 组织蛋白酶b 基因表达
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瑞舒伐他汀对载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化及LOX-1、NF-κBp65表达的影响 被引量:12
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作者 朱中生 王海燕 +1 位作者 王登峰 鲁亚丽 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期946-949,共4页
目的探讨3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-Co A)还原酶抑制剂瑞舒伐他汀对载脂蛋白E(Apo E)基因缺陷小鼠动脉粥样硬化及主动脉凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)、核因子-κB p65(NF-κB p65)表达的影响。方法 20只6周龄雄性Apo E基... 目的探讨3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-Co A)还原酶抑制剂瑞舒伐他汀对载脂蛋白E(Apo E)基因缺陷小鼠动脉粥样硬化及主动脉凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)、核因子-κB p65(NF-κB p65)表达的影响。方法 20只6周龄雄性Apo E基因缺陷小鼠随机分为高脂模型组(n=10)、瑞舒伐他汀药物干预组(n=10),高脂饮食喂养13周;10只6周龄C57BL/6J(野生型,W T)雄性小鼠作为正常对照组,正常饮食喂养13周。13周后,摘眼球取血测定血浆总胆固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)的水平。处死小鼠取主动脉,行HE染色;采用Western blotting和RT-PCR检测定量分析主动脉组织LOX-1、NF-κB p65表达变化。结果与高脂模型组比较,瑞舒伐他汀药物干预组血清中TCH、TG、LDL-C水平明显降低(P<0.05)。HE染色结果显示,与正常对照组相比,高脂模型组主动脉粥样硬化病变程度明显加重,瑞舒伐他汀药物干预组主动脉粥样硬化病变程度减轻。与正常对照组相比,高脂模型组主动脉LOX-1、NF-κB p65蛋白和m RNA的表达均明显增加(P<0.05),瑞舒伐他汀药物干预组LOX-1、NF-κB p65蛋白和m RNA的表达均减少(P<0.05)。结论瑞舒伐他汀可明显降低血脂,减轻Apo E基因缺陷小鼠主动脉组织粥样硬化病变程度,其抗动脉粥样硬化作用可能与下调LOX-1、NF-κB p65的表达有关。 展开更多
关键词 瑞舒伐他汀 小鼠 基因敲除 动脉粥硬化 凝集素氧化型低密度脂蛋白受体-1 NF-Κb p65亚基
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α1-抗胰蛋白酶和组织因子途径抑制物基因多态性的交互作用及其与大肠癌侵袭和转移的关系 被引量:3
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作者 张超贤 郭李柯 +1 位作者 秦咏梅 李光艳 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期326-334,共9页
目的:探讨α1-抗胰蛋白酶(α1-antitypsin,α1-AT)基因第5外显子和组织因子途径抑制物(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)基因T287C多态性的交互作用及其与大肠癌侵袭和转移的关系。方法:选择河南省新乡医学院第一附属医院2011年7... 目的:探讨α1-抗胰蛋白酶(α1-antitypsin,α1-AT)基因第5外显子和组织因子途径抑制物(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)基因T287C多态性的交互作用及其与大肠癌侵袭和转移的关系。方法:选择河南省新乡医学院第一附属医院2011年7月至2015年7月期间收治的经病理学确诊的大肠癌TNMⅠ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期患者各180例,以180例TNM 0期患者作为对照组,用PCR-RFLP技术检测各组患者外周血白细胞两基因的多态性,以Hardy-Weinberg平衡检验分析样本的群体代表性,以Khoury和Wagener模型分析两基因多态性的交互作用。ELISA法检测患者血清α1-AT和TFPI蛋白表达,细胞划痕试验和Transwell侵袭试验分别检测α1-AT和TFPI对人结肠癌SW480细胞迁移和侵袭能力的影响,Western blotting检测SW480细胞胰蛋白酶、组织因子(tissue factor,TF)和蛋白酶激活受体-2(protease-actieated receptor 2,PAR-2)表达水平。结果:α1-AT(MZ)、α1-AT(ZZ)、TFPI(TC)和TFPI(CC)基因型者大肠癌侵袭与转移的风险均显著增加,且在α1-AT(MZ)和TFPI(TC)之间、α1-AT(MZ)和TFPI(CC)之间、α1-AT(ZZ)和TFPI(TC)及α1-AT(ZZ)和TFPI(CC)之间均存在正向交互作用(均γ>1)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期患者血清α1-AT(或TFPI)表达明显低于0期组,且Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期患者之间血清α1-AT(或TFPI)表达也有明显差异(P<0.01)。同一组携带突变基因型个体的血清α1-AT(或TFPI)表达明显低于携带野生型个体(P<0.01)。体外细胞培养实验显示,α1-AT可明显抑制SW480细胞胰蛋白酶的表达,而TFPI则明显抑制TF表达,而两者均可明显降低细胞PAR-2的表达及细胞迁移和侵袭能力。结论:α1-AT(MZ)、α1-AT(ZZ)、TFPI(TC)和TFPI(CC)基因型均是大肠癌侵袭与转移的高危因素,基因多态性的交互作用增加了大肠癌侵袭与转移的风险。 展开更多
关键词 大肠癌 α1-抗胰蛋白酶基因 组织因子途径抑制物基因 多态性 侵袭 转移
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基质金属蛋白酶组织抑制剂1基因重组腺病毒载体的构建 被引量:7
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作者 周毅 屠冠军 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期805-808,812,共5页
目的为探讨基因治疗逆转或延缓椎间盘退变的可行性,构建及制备人基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP1)cDNA重组腺病毒载体。方法以含TIMP1 cDNA序列的质粒为模板,通过PCR方法扩增TIMP1cDNA片段,将... 目的为探讨基因治疗逆转或延缓椎间盘退变的可行性,构建及制备人基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP1)cDNA重组腺病毒载体。方法以含TIMP1 cDNA序列的质粒为模板,通过PCR方法扩增TIMP1cDNA片段,将TIMP1 cDNA全长定向克隆到Ad5MaxTM腺病毒系统的穿梭质粒pDC316上,构建pDC316-TIMP1穿梭质粒;使用Ad5MaxTM腺病毒包装系统,脂质体介导的穿梭质粒及骨架质粒pBHGlox-E1,3Cre共转染HEK293细胞,同源重组构建含TIMP1 cDNA的重组腺病毒Ad5-TIMP1,通过PCR方法鉴定重组腺病毒Ad5-TIMP1的正确性。通过阴离子柱层析方法纯化重组腺病毒Ad5-TIMP1并测定重组腺病毒感染滴度。结果经PCR及酶切方法证实pDC316-TIMP1穿梭质粒中存在630 bp大小左右的插入片段,与目的基因TIMP1的cDNA大小一致;经PCR鉴定证实TIMP1 cDNA重组腺病毒载体Ad5-TIMP1构建成功,病毒感染性滴度为1×1010IU/mL。结论成功构建TIMP1 cDNA重组腺病毒载体,为应用基因治疗方法逆转或延缓椎间盘退变的研究奠定实验基础。 展开更多
关键词 基质金属蛋白酶组织抑制剂1 腺病毒载体 基因转染 椎间盘
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异质性胞核核糖核蛋白A2/B1 hnRNP A2/B1基因克隆及其在滑膜组织中的表达 被引量:3
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作者 杨玲 于孟学 +2 位作者 林嘉友 高扬 陈杰 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期519-522,I001,共5页
目的获得hnRNPA2/B1cDNA序列,研究其在滑膜组织中的表达水平,探讨它在类风湿滑膜炎中可能的致病作用。方法从人外周血单个核细胞中提取总RNA进行逆转录反应,经PCR扩增目的片段,将其克隆于PUC-T1质粒上,并经酶切电泳、DNA测序鉴定分析。... 目的获得hnRNPA2/B1cDNA序列,研究其在滑膜组织中的表达水平,探讨它在类风湿滑膜炎中可能的致病作用。方法从人外周血单个核细胞中提取总RNA进行逆转录反应,经PCR扩增目的片段,将其克隆于PUC-T1质粒上,并经酶切电泳、DNA测序鉴定分析。采用免疫组化和原位杂交方法,分别利用单克隆抗体和特异的cDNA探针,检测滑膜组织中hnRNPA2/B1的含量及表达水平。结果从人外周血单个核细胞总RNA中扩增得到目的片段,并经测序证实该片段为hnRNPA2/B1的编码序列。免疫组化和原位杂交显示hnRNPA2/B1在类风湿关节炎(RA)滑膜中的表达水平整体上较骨关节炎(OA)和正常对照滑膜组高(P<0.05)。结论成功克隆hnRNPA2/B1cDNA;初步证明hnRNPA2/B1水平在RA关节局部增高,推测它可能参与了类风湿滑膜炎的发病。 展开更多
关键词 异生胞核核糖核蛋白A2/b1 基因克隆 类风湿性关节炎 滑膜组织
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脊髓损伤后热休克蛋白27、表皮脂肪酸结合蛋白和金属蛋白酶组织抑制因子-1的基因表达及甲基强的松龙对其表达的影响 被引量:1
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作者 徐杰 侯铁胜 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 2006年第B07期73-77,共5页
目的:研究脊髓损伤后热休克蛋白27(HSP27)、表皮脂肪酸结合蛋白(FABPs)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的基因表达及甲基强的松龙(MP)对其表达的影响。方法:SD大鼠30只。随机分为假手术组、单纯脊髓损伤组(损伤组)及脊髓损伤+大剂... 目的:研究脊髓损伤后热休克蛋白27(HSP27)、表皮脂肪酸结合蛋白(FABPs)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的基因表达及甲基强的松龙(MP)对其表达的影响。方法:SD大鼠30只。随机分为假手术组、单纯脊髓损伤组(损伤组)及脊髓损伤+大剂量MP治疗组(MP组),每组10只。应用改良的Allen′s打击法致T8脊髓损伤。MP组大鼠伤后即刻从尾静脉内注射大剂量MP(30mg/kg)。损伤后24h切取损伤平面上下0.5cm的脊髓组织,进行RT-PCR反应,检测HSP27、FABPs和TIMP-1的基因表达。结果:术后24h假手术组HSP27、FABPs和TIMP-1的基因表达相对丰度分别为0.0643±0.0152、0.6413±0.1005和0.7091±0.0577;损伤组上述三个因子的表达升高,分别为1.0013±0.3861、1.2187±0.2851和0.8971±0.1092,与假手术组比较差异有显著性(P<0.01、P<0.05、P<0.05);MP组上述三个因子的表达继续升高,分别为1.2858±0.1384、1.7122±0.1766和1.2081±0.1093,与损伤组比较差异有显著性(P<0.05、P<0.01和P<0.01)。结论:脊髓损伤后,邻近损伤处的脊髓组织中HSP27、FABPs及TIMP-1的基因表达显著增高,大剂量MP能进一步促进三个因子表达,发挥组织保护作用。 展开更多
关键词 脊髓损伤 热休克蛋白 表皮脂肪酸结合蛋白 金属蛋白酶组织抑制因子-1 基因表达 RT—PCR技术
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香蕉穿孔线虫组织蛋白酶B基因的克隆与分析
11
作者 李丹蕾 李宇 +2 位作者 谢辉 徐春玲 黄欣 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期26-33,共8页
为了获得香蕉穿孔线虫的组织蛋白酶B基因,分析该基因的序列、结构及其功能,为进一步研究植物寄生线虫组织蛋白酶的功能及其在线虫防治中的应用提供科学依据。我们应用SMART技术构建了香蕉穿孔线虫cDNA文库;采用SL法,克隆得到香蕉穿孔线... 为了获得香蕉穿孔线虫的组织蛋白酶B基因,分析该基因的序列、结构及其功能,为进一步研究植物寄生线虫组织蛋白酶的功能及其在线虫防治中的应用提供科学依据。我们应用SMART技术构建了香蕉穿孔线虫cDNA文库;采用SL法,克隆得到香蕉穿孔线虫组织蛋白酶B基因全长cDNA,通过测序获得1 257bp全长序列,命名为Rs-cb-1(GenBank:GU360972),该基因cDNA全长序列包括1 071bp的完整ORF,编码356个氨基酸,蛋白质相对分子质量为41 400。对该基因的序列结构及其编码的蛋白2级结构和三维结构与功能进行分析和预测结果表明,Rs-cb-1序列与其他寄生虫的组织蛋白酶B基因序列相比,该基因与秀丽小杆线虫组织蛋白酶B基因的亲缘关系最近;其编码蛋白主要为细胞外分泌蛋白,定位于微体(过氧化物酶体)、内质网膜和内质网管腔上,约有25个氨基酸跨膜区段位于蛋白质的C端,其表面电荷呈明显的极性分布;另外,通过同源建模获得该蛋白的三维结构预测图,这些结构与已报道的组织蛋白酶B生物学功能相符。本研究分离克隆得到的Rs-cb-1,是首个分离克隆得到的香蕉穿孔线虫组织蛋白酶B基因,从而为该线虫组织蛋白酶的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 香蕉穿孔线虫 组织蛋白酶b基因 基因克隆 CDNA文库 序列分析
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大珠母贝组织蛋白酶B基因克隆及其表达分析 被引量:5
12
作者 徐扬 王姿曼 +3 位作者 李俊辉 梁飞龙 邓岳文 杨创业 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1353-1361,共9页
【目的】分析组织蛋白酶B基因(CatB)在大珠母贝(Pinctada maxima)不同组织中的表达模式,明确CatB在大珠母贝中的功能作用,为培育生长快且抗逆性强的大珠母贝提供基础资料。【方法】利用RACE克隆大珠母贝CatB基因,利用ExPASy ProtParam、... 【目的】分析组织蛋白酶B基因(CatB)在大珠母贝(Pinctada maxima)不同组织中的表达模式,明确CatB在大珠母贝中的功能作用,为培育生长快且抗逆性强的大珠母贝提供基础资料。【方法】利用RACE克隆大珠母贝CatB基因,利用ExPASy ProtParam、ExPASy ProtScale、NPS@SOPMA、SWISS-MODEL及SignalP 4.1等在线软件进行生物信息学分析,并以实时荧光定量PCR检测CatB基因在大珠母贝外套膜(套膜区、边缘膜区和中央膜区)、肝胰腺、鳃、足和闭壳肌等组织中的表达情况。【结果】大珠母贝CatB基因cDNA序列全长1365 bp,其开放阅读框(ORF)1026 bp,5'非编码区(5'-UTR)长度81 bp,3'非编码区(3'-UTR)长度258 bp,共编码341个氨基酸残基。大珠母贝CatB蛋白分子量为37.73 kD,理论等电点(pI)为6.66,脂溶性系数为67.48,不稳定指数为31.18,亲水性平均系数(GRAVY)为-0.451,为稳定的亲水性蛋白;在第89~337位氨基酸存在一个Pept-C1结构域。大珠母贝CatB蛋白二级结构以无规则卷曲为主,占51.03%,α-螺旋占26.98%,β-转角占9.09%,延伸链占12.90%;三级结构与马氏珠母贝(P.fucata martensii)CatB蛋白结构相似。大珠母贝CatB氨基酸序列与马氏珠母贝CatB氨基酸序列(ADX32985.1)的相似性高达90.91%;与长牡蛎(Crassostrea gigas,XP_011428258.1)、海湾扇贝(Argopecten irradians,ANG56311.1)、褶纹冠蚌(Cristaria plicata,AEF32260.1)的CatB氨基酸序列相似性分别为79.47%、65.38%和62.18%。CatB基因在大珠母贝外套膜的套膜区、边缘膜区和中央膜区及肝胰腺、鳃、足和闭壳肌等7个组织中均有表达,以肝胰腺中的相对表达量最高,显著高于在其他组织中的相对表达量(P<0.05),其次是外套膜的套膜区和中央膜区。【结论】CatB基因在大珠母贝肝胰腺中高表达,其次是外套膜的套膜区和中央膜区,故推测CatB是通过参与大珠母贝的消化吸收作用而调控其生长代谢过程。 展开更多
关键词 大珠母贝 组织蛋白酶b(Catb) 基因克隆 组织表达 肝胰腺 消化吸收
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胶质瘤中原癌基因转酮醇酶1和组织蛋白酶D的表达及临床意义 被引量:4
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作者 贾巍 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2014年第17期2792-2794,共3页
目的:检测胶质瘤中原癌基因转酮醇酶1(TKTL1)和组织蛋白酶D(Cath-D)的表达,观察二者的关系及临床意义。方法:选择我院收治的124例胶质瘤患者术后存档的蜡块组织及临床组织作为观察组,选择脑出血患者出血灶周围正常的脑组织80例作为对照... 目的:检测胶质瘤中原癌基因转酮醇酶1(TKTL1)和组织蛋白酶D(Cath-D)的表达,观察二者的关系及临床意义。方法:选择我院收治的124例胶质瘤患者术后存档的蜡块组织及临床组织作为观察组,选择脑出血患者出血灶周围正常的脑组织80例作为对照组。应用免疫组化检测2组中TKTL1和Cath-D的表达,观察二者在不同临床病理特征中的表达差异。结果:观察组TKTL1和Cath-D表达的阳性率明显高于对照组,观察组中TKTL1和Cath-D的表达与肿瘤的最大直径、Ki67增殖指数及分级相关。线性相关分析显示观察组中TKTL1与Cath-D的表达无明显相关性。结论:胶质瘤中TKTL1和Cath-D高表达,对病变进展有一定促进作用,二者与肿瘤的生长、增殖及血管密度相关。但是TKTL1与Cath-D之间无协同作用。 展开更多
关键词 胶质瘤 原癌基因转酮醇酶1 组织蛋白酶D 免疫组化
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丝氨酸蛋白酶抑制剂B1在肝肺综合征大鼠肺组织中的表达变化 被引量:3
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作者 艾祥发 王海英 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期19-24,共6页
目的探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂B1(SerpinB1)在肝肺综合征(HPS)肺组织中的表达情况及其可能存在的调控机制。方法定量PCR免疫组化染色观察SerpinB1、Erk1/2、p-Erk1/2以及微血管内皮细胞表面标志物CD34在肺组织中的分布以及表达。结果 CBDL... 目的探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂B1(SerpinB1)在肝肺综合征(HPS)肺组织中的表达情况及其可能存在的调控机制。方法定量PCR免疫组化染色观察SerpinB1、Erk1/2、p-Erk1/2以及微血管内皮细胞表面标志物CD34在肺组织中的分布以及表达。结果 CBDL(CBDL)大鼠PaO_2下调并且A-aDO2升高(P <0.01);HE染色表明CBDL组大鼠肺内有大鼠肺组织SerpinB1、Erk1/2对应的基因及蛋白表达水平随周期升高(P <0.01);免疫组化结果提示SerpinB1主要高表达于CBDL大鼠肺微血管内皮细胞及炎症细胞,CD34阳性细胞在CBDL组表达上调并且与SerpinB1上调呈正相关(r=0.795,P <0.05)。结论 SerpinB1大鼠肺组织中的表达显著上调,与激活Erk1/2并与肝肺综合征肺血管新生的形成有关。 展开更多
关键词 丝氨酸蛋白酶抑制剂b1 肝肺综合征 组织 表达变化
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日本囊对虾组织蛋白酶B基因的原核表达及纯化
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作者 黄媛 王艺磊 +4 位作者 张子平 岳亮 冯建军 郭松林 林鹏 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期86-92,共7页
采用原核表达的方法得到日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)组织蛋白酶B基因的重组蛋白。以日本囊对虾卵巢组织为试验材料,采用双标签(GST和His)的方法,用带有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点以及6×His-tag的特异引物扩增Cathepsin B的开... 采用原核表达的方法得到日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)组织蛋白酶B基因的重组蛋白。以日本囊对虾卵巢组织为试验材料,采用双标签(GST和His)的方法,用带有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点以及6×His-tag的特异引物扩增Cathepsin B的开放阅读框,并连接至表达质粒pGEX-4T-2中。将重组表达质粒导入大肠杆菌BL21中,在30℃条件下,用终浓度为1mmol/L的IPTG(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside)诱导5h得到最佳诱导量,His亲和柱进行纯化,纯化蛋白依次于8、6、4、2、1、0 mol/L尿素缓冲液中梯度透析,得到复性后可溶于水的重组蛋白,经SDS-PAGE检测,得到单一条带,其分子质量约为63ku。取冻干后的蛋白制备多克隆抗体,抗体效价达50 000,经Western blot检测,同样可在63ku处得到该条带,表明制备的组织蛋白酶B(CB)多克隆抗体具有特异性,该抗体可特异识别CB蛋白。 展开更多
关键词 日本囊对虾 卵巢 组织蛋白酶b基因 原核表达 多克隆抗体
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黄曲霉毒素B_1对肉鸭生长、肝组织结构及免疫相关基因表达的影响 被引量:16
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作者 吕武兴 贺建华 +3 位作者 宋洪国 刘敏敏 金雪丽 李俊波 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期812-818,共7页
本试验旨在研究饲粮黄曲霉毒素B1(AFB1)对肉鸭生产性能、肝组织结构及免疫相关基因白细胞介素-2(IL-2)和干扰素-γ(IFN-γ)表达的影响。试验选用1日龄健康双鬼头肉鸭240羽,随机分为4组,每组6个重复,每个重复10羽。试验期4周(28 d),对照... 本试验旨在研究饲粮黄曲霉毒素B1(AFB1)对肉鸭生产性能、肝组织结构及免疫相关基因白细胞介素-2(IL-2)和干扰素-γ(IFN-γ)表达的影响。试验选用1日龄健康双鬼头肉鸭240羽,随机分为4组,每组6个重复,每个重复10羽。试验期4周(28 d),对照组饲喂基础饲粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组饲喂在基础饲粮中分别添加50、100和150μg/kg AFB1纯品的试验饲粮,记录采食量和增重数据,计算生产性能;试验结束时屠宰,取肝脏样品,分别进行切片及实时荧光定量PCR检测分析。结果表明:1)饲粮中添加不同水平AFB1极显著降低了肉鸭的平均日增重和平均日采食量(P<0.01),与对照组相比,3个试验组肉鸭末重分别下降了14.67%(P<0.01)、30.38%(P<0.01)和31.83%(P<0.01),且100、150μg/kg AFB1还极显著增加了料重比(P<0.01),显著增加了死亡率(P<0.05);2)随着AFB1添加水平的增加,肉鸭肝脏组织病变程度逐渐增加,肝脏中IL-2和IFN-γ基因mRNA表达水平呈现不同程度的降低,其中100、150μg/kg AFB1极显著下调了IFN-γ基因mRNA的表达水平(P<0.01)。由此可见,饲粮中添加AFB1可导致肉鸭生产性能下降和肝脏组织结构损伤,并通过下调肝脏中IL-2和IFN-γ基因的表达,改变肉鸭机体的免疫水平。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素b1 生产性能 组织 白细胞介素-2基因 干扰素-γ基因 肉鸭
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二巯丙磺钠对百草枯急性中毒大鼠肺组织基质金属蛋白酶-9 mRNA及其金属蛋白酶组织抑制剂-1 mRNA表达的影响 被引量:6
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作者 韩国强 邱俏檬 +4 位作者 卢中秋 贺晓燕 洪广亮 何飞 梁欢 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期25-29,共5页
目的探讨二巯丙磺钠(DMPS)救治百草枯(PQ)急性中毒大鼠作用机制。方法120只雄性SD大鼠随机分为正常对照组,DMPS(200mg.kg-1,ip)对照组,PQ急性中毒(20mg.kg-1,ip)1,3,7,14和28d组以及DMPS干预(先给DMPS,15min后再给PQ)1,3,7,14和28d组。... 目的探讨二巯丙磺钠(DMPS)救治百草枯(PQ)急性中毒大鼠作用机制。方法120只雄性SD大鼠随机分为正常对照组,DMPS(200mg.kg-1,ip)对照组,PQ急性中毒(20mg.kg-1,ip)1,3,7,14和28d组以及DMPS干预(先给DMPS,15min后再给PQ)1,3,7,14和28d组。应用RT-PCR技术检测PQ急性中毒组大鼠及DMPS干预组大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA和金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)mRNA的表达。结果PQ急性中毒组早期肺组织毛细血管扩张充血,炎症细胞浸润,后期出现较大范围慢性炎症病灶,纤维组织增生。与正常对照组比,MMP-9mRNA明显升高,分别为1.13±0.06,1.32±0.04和1.10±0.06,0.85±0.06和0.75±0.05,TIMP-1mRNA明显升高,分别为1.14±0.08,1.29±0.05,1.61±0.09,1.83±0.13和1.73±0.08;7,14和28d MMP-9mRNA/TIMP-1mRNA比值明显低于正常对照,分别为0.68±0.03,0.46±0.04和0.43±0.06;DMPS干预后,MMP-9mRNA1,3和7d和TIMP-1mRNA1,3,7,14和24d表达低于PQ中毒组,MMP-9mRNA分别为1.05±0.03,1.17±0.05和0.93±0.09;TIMP-1mRNA分别为10.0±0.07,1.15±0.09,1.09±0.06,1.16±0.08和1.23±0.09;MMP-9mRNA/TIMP-1mRNA比值略低于DMPS对照组,但高于PQ中毒组,分别为0.85±0.05,0.63±0.04和0.58±0.02(均P<0.05)。结论DMPS可能通过下调大鼠肺组织MMP-9mRNA和TIMP-1mRNA表达,上调肺组织MMP-9mRNA/TIMP-1mRNA比值发挥救治PQ中毒作用。 展开更多
关键词 二巯丙磺钠 百草枯 基质金属蛋白酶9 金属蛋白酶1组织抑制剂 基因表达
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放牧山羊CPT1B基因mRNA的组织分布研究 被引量:7
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作者 杨家大 陈祥 +2 位作者 龙威海 冯文武 丁玫 《上海农业学报》 CSCD 2015年第3期53-57,共5页
为摸清放牧山羊CPT1B基因mRNA的组织分布特点,以贵州省雷公山山区放牧饲养的黔东南小香羊、贵州白山羊、贵州黑山羊、黔北麻羊和南江黄羊为研究对象,采用TaqMan法对心、肝、肺、肾、背最长肌、半膜肌和皮下脂肪CPT1B基因的mRNA进行定量... 为摸清放牧山羊CPT1B基因mRNA的组织分布特点,以贵州省雷公山山区放牧饲养的黔东南小香羊、贵州白山羊、贵州黑山羊、黔北麻羊和南江黄羊为研究对象,采用TaqMan法对心、肝、肺、肾、背最长肌、半膜肌和皮下脂肪CPT1B基因的mRNA进行定量分析。结果表明:黔东南小香羊的心肌和半膜肌、贵州白山羊的心肌背最长肌和半膜肌、贵州黑山羊的心肌背最长肌和半膜肌、贵州麻羊的心肌背最长肌和半膜肌、南江黄羊的心肌中CPT1B mRNA水平均显著高于各自品种的肝、肺、肾和皮下脂肪对应值。结果表明:放牧山羊CPT1B基因mRNA主要分布在心肌、背最长肌和半膜肌。本研究为探索放牧山羊的肉质性状与CPT1B基因表达水平的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 放牧山羊 CPT1b 基因表达 组织分布
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组织蛋白酶B在宫颈鳞癌中表达及意义 被引量:3
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作者 吴丹 李柱南 +4 位作者 许颖 王丽华 丁李 吴佳浩 黄勇 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1330-1332,共3页
目的探讨宫颈各级病变组织中组织蛋白酶B(Cathepsin B,CB)的表达及其与宫颈鳞癌临床病理因素的关系。方法采用免疫组化方法(SP法)检测56例宫颈鳞癌组织、85例宫颈上皮内瘤样变(CIN)和28例正常宫颈上皮组织中CB的表达,并分析其表达与宫... 目的探讨宫颈各级病变组织中组织蛋白酶B(Cathepsin B,CB)的表达及其与宫颈鳞癌临床病理因素的关系。方法采用免疫组化方法(SP法)检测56例宫颈鳞癌组织、85例宫颈上皮内瘤样变(CIN)和28例正常宫颈上皮组织中CB的表达,并分析其表达与宫颈鳞癌组织分化级别、宫颈浸润深度及淋巴结转移的关系。结果宫颈鳞癌组织、CIN和正常宫颈上皮组织中CB蛋白阳性表达率分别为87.5%(49/56)、48.3%(38/85)和3.6%(2/28),宫颈癌组织中CB蛋白阳性表达率分别与CIN及正常宫颈相比有显著差异(P<0.01)。CB蛋白在宫颈浸润深度<2/3的阳性表达率为62.79%(27/43),浸润突破2/3患者的阳性表达率为81.81%(12/13),两组比较有显著差异(P<0.05);CB蛋白在无淋巴结转移和有淋巴结转移的癌组织中阳性表达率分别为60.52%(23/38)和88.89%(16/18),有淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组织(P<0.05);CB蛋白阳性率与宫颈鳞癌组织分化级别无明显相关性。结论 CB表达增强与宫颈鳞癌的局部浸润及淋巴结转移有关。 展开更多
关键词 宫颈鳞癌 宫颈上皮内瘤 组织蛋白酶b 淋巴结转移
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SARS冠状病毒PLpro蛋白酶对泛素样分子的DUB活性 被引量:4
20
作者 陈晓娟 杨宇东 +3 位作者 孙莉 胡日查 邢雅玲 陈忠斌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期664-670,共7页
SARS冠状病毒基因组中非结构基因nsp3编码的木瓜样蛋白酶(PLpro)在病毒基因组复制及逃避宿主天然免疫中发挥重要作用,是研发抗病毒药物的重要靶标.SARS冠状病毒PLpro是一种病毒编码的去泛素化酶(DUB).为深入研究SARS冠状病毒PLpro对泛... SARS冠状病毒基因组中非结构基因nsp3编码的木瓜样蛋白酶(PLpro)在病毒基因组复制及逃避宿主天然免疫中发挥重要作用,是研发抗病毒药物的重要靶标.SARS冠状病毒PLpro是一种病毒编码的去泛素化酶(DUB).为深入研究SARS冠状病毒PLpro对泛素样分子(ubiquitin-likeprotein,UBL)的DUB特性,本研究构建缺失PLpro N末端泛素样结构域(Ubl)和下游跨膜结构域(TM)的PLpro构建体(constructs),并构建3种缺失蛋白酶催化活性的突变体,检测PLpro对泛素样分子干扰素刺激基因15(ISG15)及SUMO-1的作用.实验结果表明,PLpro和PLpro-TM在细胞内具有很强的去ISG(DeISGylation)活性;缺失PLpro N末端泛素样结构域(Ubl)对PLpro的去ISG15活性没有影响;对PLpro蛋白酶活性位点C1651和H1812突变后,PLpro-TM的去ISG15活性消失,而对D1826位点突变后不影响此活性.PLpro不具有去SUMO(DeSUMOylation)活性,而PLpro-TM具有一定的去SUMO活性;PLpro催化活性相关的3个关键氨基酸残基Cys-His-Asp突变后对去SUMO活性有一定的影响.研究结果提示,SARS PLpro除了具有DUB的活性,还具有体内去ISG活性和去SUMO活性;PLpro蛋白酶活性与其去ISG活性之间有一定相关性;PLpro去SUMO-1活性具有TM依赖性.SARS冠状病毒PLpro对泛素样分子作用特性的研究为阐明病毒逃避宿主天然免疫机制和开发新型抗病毒药物提供重要的理论依据. 展开更多
关键词 SARS冠状病毒 木瓜蛋白酶(PLpro) 去泛素化酶 干扰素刺激基因15(ISG15) SUMO-1
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