人睾丸组织特异表达新基因HSD-9的克隆及其编码蛋白质功能

1

作者 王勇 陈轶男 +2 位作者 乔原 缪时英 王琳芳 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期318-323,I0004,共7页

目的利用本室建立的人睾丸组织中不同细胞特异表达的ESTs文库克隆新基因HSD-9,初步研究HSD-9蛋白的特性及功能。方法采用电子克隆手段获得新基因HSD-9,生物信息学手段分析基因及编码蛋白质的特点,Northern blot研究HSD-9基因的表达谱,... 目的利用本室建立的人睾丸组织中不同细胞特异表达的ESTs文库克隆新基因HSD-9,初步研究HSD-9蛋白的特性及功能。方法采用电子克隆手段获得新基因HSD-9,生物信息学手段分析基因及编码蛋白质的特点,Northern blot研究HSD-9基因的表达谱,原核表达方法得到HSD-9蛋白并制备特异性多克隆抗体,免疫荧光结合激光共聚焦显微镜技术研究HSD-9蛋白在生精细胞中的定位及在哺乳动物细胞中的表达特点。结果HSD-9基因在人睾丸组织特异表达,其大鼠同源物可在大鼠各级生精细胞中表达;HSD-9-EGFP在CHO细胞和S4细胞中表达呈现沿细胞膜分布的小颗粒和偏心分布于胞内一侧的粗大颗粒;HSD-9-EGFP和网格蛋白clathrin可以部分共定位。结论HSD-9是人睾丸组织特异表达新基因,其编码蛋白质在CHO细胞和S4细胞中表达特点非常类似于内吞小体蛋白的表达特点,推测其可能参与了细胞中内吞过程的调节。 展开更多

关键词 HSD-9 人睾丸组织特异表达基因 CLATHRIN 内吞

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普通野生稻绿色组织特异表达启动子的克隆与鉴定 被引量：1

2

作者 赵志强 薛满德 +4 位作者 黄珂 张静文 龙艳 裴新梧 袁潜华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期51-57,共7页

绿色组织特异表达启动子可调控外源基因只在受体作物的绿色组织中定点、高效地表达。以普通野生稻为实验材料,克隆了绿色组织特异表达启动子Or GSP,构建Or GSP和GUS基因融合的表达载体,转入拟南芥中鉴定功能。启动子Or GSP长度为825 bp... 绿色组织特异表达启动子可调控外源基因只在受体作物的绿色组织中定点、高效地表达。以普通野生稻为实验材料,克隆了绿色组织特异表达启动子Or GSP,构建Or GSP和GUS基因融合的表达载体,转入拟南芥中鉴定功能。启动子Or GSP长度为825 bp,含有基本的转录起始元件TATA-box和CAAT-box,以及光响应元件TCCC-motif、Sp1、G-box、I-box、GA-motif和as-2-box等。转基因拟南芥GUS组织化学染色结果表明,启动子Or GSP调控GUS基因只在绿色组织中特异表达。GUS活性测定结果显示,叶和茎中的GUS活性比根中明显提高。普通野生稻中克隆的启动子Or GSP为绿色组织特异表达启动子,可为作物分子育种提供新的调控元件。 展开更多

关键词 启动子 绿色组织特异表达 普通野生稻

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组织特异表达启动子RSS1P在转TiERF1基因小麦中的应用 被引量：2

3

作者 李钊 庄洪涛 +5 位作者 杜丽璞 周淼平 蔡士宾 徐惠君 李斯深 张增艳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1897-1903,共7页

从水稻叶片中克隆了一个韧皮部组织特异表达的水稻蔗糖合酶启动子(RSS1P),将RSS1P与中间偃麦草乙烯反应因子基因TiERF1相融合构成组织特异表达的TiERF1基因表达盒,取代pAHC20中Ubi::bar基因表达盒,构建成无选择标记的韧皮部组织特异表达... 从水稻叶片中克隆了一个韧皮部组织特异表达的水稻蔗糖合酶启动子(RSS1P),将RSS1P与中间偃麦草乙烯反应因子基因TiERF1相融合构成组织特异表达的TiERF1基因表达盒,取代pAHC20中Ubi::bar基因表达盒,构建成无选择标记的韧皮部组织特异表达的pA20-RSS1P::TiERF1载体。利用基因枪将pA20-RSS1P::TiERF1与pAHC20载体混合、共轰击小麦品种扬麦12的幼胚愈伤组织,获得转RSS1P::TiERF1基因小麦。对该转基因小麦T0和T1代植株进行PCR、PCR-Southern、半定量RT-PCR和荧光定量PCR分析,证实外源RSS1P::TiERF1基因已转入受体,并且具有可遗传性;转入的RSS1P::TiERF1基因仅在根、茎、叶中表达,以根部表达量最高,在种子内不表达。纹枯病抗性鉴定和主要农艺性状考察结果表明,与受体扬麦12相比,转RSS1P::TiERF1基因小麦对纹枯病的抗性有明显提高,与转Ubi::TiERF1基因小麦的抗病性相当,而且转RSS1P::TiERF1基因小麦的农艺性状没有明显改变,说明可以利用RSS1P启动子创造更实用的转基因小麦新种质。 展开更多

关键词 水稻蔗糖合酶启动子 组织特异型表达 转基因小麦 中间偃麦草乙烯反应因子

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脂肪组织特异性表达载体的构建

4

作者 华晓敏 许登高 潘庆杰 《青岛农业大学学报（自然科学版）》 2012年第2期84-88,共5页

采用PCR技术克隆了小鼠脂肪组织特异表达的脂肪酸结合蛋白ap2基因增强子和启动子,通过DNA重组技术将该基因增强子和启动子重组于pEGFP-N1真核表达载体上,构建pEGFP-N1-ap2重组质粒,通过PCR扩增、酶切电泳分析和测序的方法对重组质粒进... 采用PCR技术克隆了小鼠脂肪组织特异表达的脂肪酸结合蛋白ap2基因增强子和启动子,通过DNA重组技术将该基因增强子和启动子重组于pEGFP-N1真核表达载体上,构建pEGFP-N1-ap2重组质粒,通过PCR扩增、酶切电泳分析和测序的方法对重组质粒进行鉴定,并转染小鼠前脂肪细胞,通过荧光素酶活性检测特异性表达强度。结果表明,本实验克隆的ap2基因增强子和启动子的碱基组成与GenBank中的ap2基因序列完全一致,通过DNA重组技术将该基因增强子和启动子重组于pEGFP-N1真核表达载体上,成功构建了脂肪组织特异表达的重组质粒。为以后的转基因动物的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 脂肪组织特异表达载体 增强子 启动子 ap2

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大豆谷氨酰胺合成酶基因的分类及根瘤特异表达GmGS1β2基因功能的初步分析 被引量：6

5

作者 王晓波 滕婉 +1 位作者 何雪 童依平 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2145-2153,共9页

从Phytozome数据库中获得包括大豆在内的12种植物的谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)氨基酸序列,利用MEGA5.10软件进行多序列比对、构建进化树。进化分析表明,植物GS可以分成胞质型(GS1)和质体型(GS2)两大类,GS1可进一步分成分... 从Phytozome数据库中获得包括大豆在内的12种植物的谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)氨基酸序列,利用MEGA5.10软件进行多序列比对、构建进化树。进化分析表明,植物GS可以分成胞质型(GS1)和质体型(GS2)两大类,GS1可进一步分成分5个亚类,包括双子叶植物为主的I、II和III亚类、低等植物类(IV)和单子叶植物类(V)。这5亚类中,第II类是豆科植物特有的一类,大豆的4个GS1(GmGS1β1/2和GmGS1γ1/2)属于该亚类;利用qPCR在大豆盛花期分析GS1基因的组织表达特异性,结果表明不同类型GmGS1基因在表达部位和表达丰度上存在较大差异,而同一类基因之间具有相似的表达规律;4个豆科植物特有的GS1基因在大豆根瘤中都有较高的表达量,其中位于大豆第18染色体上的GmGS1β2基因表达丰度最高;利用原核表达系统体外表达GmGS1β2蛋白,诱导出分子量大小与理论预测值一致的目标蛋白,酶活性分析表明GmGS1β2可以与底物发生催化反应,具有谷氨酰胺合成酶活性,推测该基因在大豆根瘤氮素同化代谢中具有重要作用。 展开更多

关键词 大豆 GmGS1基因 组织特异表达 GS酶活性

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烟草甲抗菌肽基因Defensin的鉴定及响应细菌的表达模式分析

6

作者 彭琛 李昂 +5 位作者 许小霞 张舒昊 张学伟 古政坤 梁耀星 金丰良 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2024年第5期1181-1192,共12页

本研究旨在阐明烟草甲Lasioderma serricorne Defensin(LsDef1和LsDef2)基因在响应细菌侵染过程中的功能。利用生物信息学分析了LsDef1和LsDef2编码蛋白的结构、特征和系统进化关系。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测LsDef1和LsDef... 本研究旨在阐明烟草甲Lasioderma serricorne Defensin(LsDef1和LsDef2)基因在响应细菌侵染过程中的功能。利用生物信息学分析了LsDef1和LsDef2编码蛋白的结构、特征和系统进化关系。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测LsDef1和LsDef2在烟草甲不同发育阶段(卵、1龄幼虫、2龄幼虫、3龄幼虫、4龄幼虫、蛹、成虫)、4龄幼虫不同组织(脂肪体、表皮、中肠、血细胞和马氏管)、病原微生物诱导情况、细菌及细菌细胞壁成分胁迫后的表达模式。序列比对发现烟草甲LsDef1和LsDef2具有典型的6个半胱氨酸,形成3对二硫键,属于β防御素。RT-qPCR显示LsDef1和LsDef2基因在烟草甲不同发育阶段均有表达,在幼虫4龄处于高水平表达;主要表达组织为脂肪体(Fat body)和血细胞(Hemocyte),其次为表皮和中肠,而在马氏管的表达水平最低。外来病原物诱导后,LsDef1和LsDef2基因表达量显著增加,对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus诱导最为敏感,进一步得细菌和细菌细胞壁成分诱导表达模式显示金黄色葡萄球菌诱导高峰期出现在诱导后6 h;PGN-SA诱导表达高峰期为3 h。烟草甲LsDef1和LsDef2是一类可被革兰氏阳性菌诱导的抗菌肽,研究结果为进一步研究昆虫防御素类抗菌肽的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 烟草甲 防御素 诱导表达 组织特异表达 免疫反应

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高粱隐花色素CRY基因家族鉴定与表达分析

7

作者 果永超 王志芳 +7 位作者 焦志银 王金萍 石燕楠 牛敬田 王新玉 刘皓然 张静 吕芃 《河北农业科学》 2024年第5期68-78,89,共12页

为了研究植物隐花色素基因(CRY)在高粱生长发育、胁迫响应中所起的作用,首先,利用全基因组BLAST对高粱基因组进行分析挖掘潜在CRY同源基因,进一步利用在线网站ExPASy和TBtools软件对其理化性质、基因结构、进化关系、基因共线性、启动... 为了研究植物隐花色素基因(CRY)在高粱生长发育、胁迫响应中所起的作用,首先,利用全基因组BLAST对高粱基因组进行分析挖掘潜在CRY同源基因,进一步利用在线网站ExPASy和TBtools软件对其理化性质、基因结构、进化关系、基因共线性、启动子顺式调控元件进行分析;同时,采用高粱公共转录组数据库及qRT-PCR对其组织表达模式和在不同环境胁迫下的响应模式进行研究。结果表明:通过基因家族鉴定,得到9个SbCRYs家族成员,分布在5条染色体上,命名为SbCRY1—SbCRY9。该基因家族氨基酸长度为447~710个,蛋白质分子质量为48.29~110.13 kD,等电点为5.53~9.44。进化分析结果显示,该家族与拟南芥、水稻、谷子、玉米的CRY成员一起可被分为6个亚家族。SbCRYs成员之间仅存在1对同源基因对,而与水稻、谷子、玉米之间分别存在8、9、11对同源基因对。通过对SbCRYs基因启动子区进行分析,发现存在着激素和环境胁迫响应元件,且这些基因存在明显的组织表达特异性。高粱CRY家族成员能够不同程度地受到高温胁迫、盐胁迫、干旱胁迫和蚜虫侵害的诱导表达,其中SbCRY2、SbCRY3和SbCRY4参与了盐和干旱胁迫的响应,SbCRY2、SbCRY3、SbCRY4、SbCRY6、SbCRY7和SbCRY9参与了高粱蚜虫胁迫的响应。这些结果揭示了高粱SbCRYs基因在不同组织中可能的功能以及对非生物胁迫的响应。 展开更多

关键词 高粱 CRY基因 进化分析 组织特异表达 胁迫响应

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利用电子差异展示方法克隆人类睾丸特异性新基因 被引量：3

8

作者 尹光明 阳建福 +5 位作者 蒋先镇 汤育新 何乐业 蒋志强 钟狂飙 曾青 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期631-634,共4页

目的克隆一个新的人睾丸特异性基因。方法运用电子差异展示方法筛选人类睾丸特异表达新基因,获得有差异显示的代表新基因的克隆重叠群,挑选其中一个克隆重叠群Hs.180197进行多组织RT-PCR验证该重叠群在人睾丸中的表达。然后从包含该重... 目的克隆一个新的人睾丸特异性基因。方法运用电子差异展示方法筛选人类睾丸特异表达新基因,获得有差异显示的代表新基因的克隆重叠群,挑选其中一个克隆重叠群Hs.180197进行多组织RT-PCR验证该重叠群在人睾丸中的表达。然后从包含该重叠群的IMAGE克隆出发,采用生物信息学方法克隆一个人类新基因的全长cDNA序列。结果新基因全长1197bp,开放阅读框为504～806bp,定位于6p21.1-p21.2,编码由100个氨基酸组成,相对分子质量为10000,等电点为6.81的一个蛋白,该蛋白与已知蛋白无同源性。克隆实验验证该基因阅读框完全正确,推测其可能与精子生成相关,暂命名为TDRG1(testis development related gene1),GenBank登录号为DQ168992。结论电子差异展示方法与实验验证相结合用于发现人类功能新基因是行之有效的。 展开更多

关键词 基因克隆 电子差异展示 逆转录聚合酶反应 睾丸 组织特异表达

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小鼠肿瘤/睾丸抗原Biot2的原核表达载体的构建及表达 被引量：1

9

作者 王春婷 张鹏 +1 位作者 彭枫 杨寒朔 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期406-408,共3页

目的构建小鼠睾丸特异表达基因Biot2的原核表达载体,表达pQE30-Biot2融合蛋白。方法提取小鼠睾丸组织总RNA,经RT-PCR扩增Biot2基因片段,并将其克隆入原核表达载体pQE30中,构建重组质粒pQE30-Biot2。经限制性内切酶BamHI、HindIII双酶切... 目的构建小鼠睾丸特异表达基因Biot2的原核表达载体,表达pQE30-Biot2融合蛋白。方法提取小鼠睾丸组织总RNA,经RT-PCR扩增Biot2基因片段,并将其克隆入原核表达载体pQE30中,构建重组质粒pQE30-Biot2。经限制性内切酶BamHI、HindIII双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coliXL-Blue,经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western blot检测。结果构建pQE30-Biot2重组原核表达质粒,表达的融合蛋白经SDS-PAGE分析,在相对分子质量(Mr)约17700处出现了1条蛋白条带,该表达蛋白具有与His-tag单克隆抗体(mAb)特异性的结合能力。结论成功地构建了Biot2基因的原核表达载体,并表达出pQE30-Biot2重组蛋白,为下一步制备多克隆抗体和蛋白功能的深入研究奠定了实验基础。 展开更多

关键词 睾丸 组织特异表达 重组融合蛋白/表达

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水稻胚乳特异型双向启动子的克隆及功能鉴定 被引量：1

10

作者 杨梅 王睿 林拥军 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期1-6,共6页

以水稻中的1对双向转录基因(TIGR Locus:LOC_Os09g39540和LOC_Os09g39550)的翻译起始位点之间的序列作为研究对象,克隆其序列并进行功能鉴定。以明恢63基因组DNA为模板,采用PCR法扩增该序列(命名为BDP1),以正反两个方向插入启动子功能... 以水稻中的1对双向转录基因(TIGR Locus:LOC_Os09g39540和LOC_Os09g39550)的翻译起始位点之间的序列作为研究对象,克隆其序列并进行功能鉴定。以明恢63基因组DNA为模板,采用PCR法扩增该序列(命名为BDP1),以正反两个方向插入启动子功能分析载体pDX2181,分别命名为BDP11和BDP12;转基因阳性植株的GUS组织化学染色结果证明该启动子为胚乳特异型的双向启动子,两端的表达水平均很低。将启动子片段距离转录起始位点较短的一端向下游延伸123bp(命名为BDP2),以正反两个方向插入启动子功能分析载体pDX2181,分别命名为BDP21和BDP22;转基因阳性植株的GUS组织化学染色结果显示该启动子的胚乳特异型双向表达模式维持不变,表达水平高于BDP1。 展开更多

关键词 水稻 双向启动子 GUS报告基因 组织特异表达

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毛竹PeAP2基因及其启动子的克隆与表达初步分析 被引量：3

11

作者 陈东亮 彭镇华 高志民 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2013年第2期200-206,共7页

APETALA2(AP2)基因在植物生长发育过程中发挥着重要作用。利用RT-PCR和RACE方法,从毛竹中克隆到1个AP2同源基因的全长cDNA序列,命名为PeAP2。序列分析表明:PeAP2基因全长1 750 bp,其中,5'端非编码区106bp,3'端非编码区174 bp,... APETALA2(AP2)基因在植物生长发育过程中发挥着重要作用。利用RT-PCR和RACE方法,从毛竹中克隆到1个AP2同源基因的全长cDNA序列,命名为PeAP2。序列分析表明:PeAP2基因全长1 750 bp,其中,5'端非编码区106bp,3'端非编码区174 bp,开放阅读框1 470 bp,编码1个489 aa的蛋白,该蛋白含有2个AP2结构域,属于AP2/EREBP家族的AP2亚家族。PeAP2蛋白与来自其它单子叶植物的AP2蛋白均有着较高同源性,其中,与二穗短柄草的AP2蛋白同源性最高,达74.85%。实时定量PCR分析显示:PeAP2基因在毛竹的根、茎、叶、鞘和节5种器官中均有表达,其中,叶片中的表达丰度最高,鞘中次之,而在根、茎、节中的表达丰度接近,均较低。利用hiTAIL-PCR方法克隆获得了PeAP2上游启动子区序列1 359 bp,分析显示其含有光、激素等多种信号应答相关的作用元件。 展开更多

关键词 毛竹 AP2基因 组织特异表达 启动子

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参与水稻光合作用的PsbR3基因启动子的功能分析 被引量：4

12

作者 林智敏 苏军 +2 位作者 陈在杰 周淑芬 王锋 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期179-186,共8页

本实验旨在研究水稻光合作用蛋白中各基因的表达模式.采用RT-PCR和定量realtimePCR数据分析水稻不同组织的mRNA表达水平.结果显示,PsaK和PsbR3基因仅在茎、叶等绿色组织表达,而胚、胚乳部分均不表达.通过其启动子克隆、植物表达载体构建... 本实验旨在研究水稻光合作用蛋白中各基因的表达模式.采用RT-PCR和定量realtimePCR数据分析水稻不同组织的mRNA表达水平.结果显示,PsaK和PsbR3基因仅在茎、叶等绿色组织表达,而胚、胚乳部分均不表达.通过其启动子克隆、植物表达载体构建,以及农杆菌介导转化后,GUS组织染化分析和GUS荧光定量分析表明,两启动子均为组织特异性优势表达,PsbR3启动报告酶GUS在叶片中的表达活性为Actin启动子的3.29倍,而PsaK启动报告酶GUS在叶片中的表达活性低于Actin启动子的.这些初步结果提示,PsbR3启动子决定水稻绿色组织茎叶的优势表达,PsbR3基因可能参与水稻光合作用. 展开更多

关键词 光合作用 启动子 绿色组织特异表达 GUS基因

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小鼠adiponectin的甲基化敏感性检测及其启动子克隆 被引量：1

13

作者 许登高 张敏 +1 位作者 曲贞晓 潘庆杰 《青岛农业大学学报（自然科学版）》 2013年第1期6-10,共5页

本试验通过对脂肪组织特异表达的脂肪因子adiponectin调控区域4个CpG位点在心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌、腹脂、内脏脂肪中的甲基化程度以及adiponectin mRNA表达水平的检测,表明adiponectin在mRNA水平的表达与其调控位点的甲基化程度... 本试验通过对脂肪组织特异表达的脂肪因子adiponectin调控区域4个CpG位点在心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌、腹脂、内脏脂肪中的甲基化程度以及adiponectin mRNA表达水平的检测,表明adiponectin在mRNA水平的表达与其调控位点的甲基化程度显著相关;同时采用PCR技术克隆了小鼠脂肪组织特异表达的脂联素的启动子,通过DNA重组技术将该基因的启动子重组于pEGFP-N1真核表达载体上,构建pEGFP-N1-P(adi)重组质粒,通过分子克隆测序方法对重组质粒进行鉴定,并转染小鼠前脂肪细胞,通过荧光素酶活性检测表明P(adi)具备驱动报告基因表达的活性,为今后制备转基因动物的研究奠定基础。 展开更多

关键词 脂肪组织特异表达载体 转基因动物 甲基化敏感型

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小鼠肿瘤/睾丸抗原Biot2对NIH3T3细胞增殖的影响

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作者 王春婷 张鹏 +2 位作者 彭枫 阮绪芝 杨寒朔 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期704-706,共3页

目的:研究新发现的小鼠肿瘤/睾丸抗原Biot2对小鼠NIH3T3细胞生物学行为的影响,探讨基因的生物学功能。方法:构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Biot2,由脂质体包裹稳定转染NIH3T3细胞,用Realtime RT-PCR、Western blot等方法筛选和鉴定Biot2... 目的:研究新发现的小鼠肿瘤/睾丸抗原Biot2对小鼠NIH3T3细胞生物学行为的影响,探讨基因的生物学功能。方法:构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Biot2,由脂质体包裹稳定转染NIH3T3细胞,用Realtime RT-PCR、Western blot等方法筛选和鉴定Biot2表达阳性细胞克隆,研究其与细胞增殖相关的生物学特征的变化。结果:成功构建真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)-Biot2,并稳定转染于NIH3T3细胞。与对照组相比,转染了Biot2cDNA的NIH3T3细胞生长速率明显增快。结论:成功地建立稳定转染小鼠新基因Biot2的NIH3T3细胞克隆;Biot2基因能影响细胞增殖的调节,促进NIH3T3细胞的增殖,为进一步研究基因生物学功能奠定了基础。 展开更多

关键词 睾丸 组织特异表达 增殖 Biot2

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