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E-box元件对大鼠γ-GCS催化亚单位基因调控作用的组织特异性研究
被引量:
4
1
作者
陈辉
李冰
冉丕鑫
《广州医学院学报》
2007年第1期1-5,共5页
目的:探讨大鼠γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)催化亚单位(GCLC)基因启动子(-745~-705)区段E-box元件对其转录调控是否存在组织细胞差异性。方法:分别将GCLC5’端上游序列驱动的荧光素酶报道基因载体GCLC-Luc、E-box缺失的delE-box-GC...
目的:探讨大鼠γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)催化亚单位(GCLC)基因启动子(-745~-705)区段E-box元件对其转录调控是否存在组织细胞差异性。方法:分别将GCLC5’端上游序列驱动的荧光素酶报道基因载体GCLC-Luc、E-box缺失的delE-box-GCLC-Luc及pGL3-enhancer空载体瞬时转染大鼠不同组织来源的细胞,测得荧光素酶活性;并经蛋白定量及pSV-β-半乳糖苷酶的活性测定,获得校正荧光素酶活性值,通过比较校正荧光素酶活性值差异间接判断E-box元件对GCLC转录活性的影响。结果:在大鼠心肌细胞H9C2(2-1),转染delE-box-GCLC-Luc组荧光素酶活性值较转染GCLC-Luc组明显升高(P<0.001),说明E-box能使其GCLC转录活性下调;在大鼠肾小球细胞HBZY-1,转染delE-box-GCLC-Luc组荧光素酶活性值较GCLC-Luc组明显降低(P<0.02),提示E-box具有上调该细胞GCLC转录活性的作用;而在大鼠神经胶质瘤细胞C6和小肠隐窝上皮细胞IEC-6,组间差异无统计学意义(P>0.05),提示E-box对其GCLC转录活性无影响。结论:E-box元件能组织特异性的调控大鼠GCLC基因的转录,该元件可能是决定GCLC基因存在组织差异性表达的重要顺式作用元件。
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关键词
Γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶
氧化应激
E-box元件
组织特异性转录
大鼠
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职称材料
小叶杨GA20氧化酶基因的克隆、表达及单核苷酸多态性分析
被引量:
7
2
作者
卫尊征
郭琦
+2 位作者
李百炼
张金凤
张德强
《林业科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期19-27,共9页
利用RT-PCR方法,首次从小叶杨未成熟木质部cDNA中分离出PsGA20OxcDNA全长及其基因组DNA,并进行测序和序列分析。结果表明:克隆的小叶杨PsGA20OxcDNA片段总长为1403bp,基因内部含有完整的开放阅读框架,大小为1155bp,编码区可编码长度为38...
利用RT-PCR方法,首次从小叶杨未成熟木质部cDNA中分离出PsGA20OxcDNA全长及其基因组DNA,并进行测序和序列分析。结果表明:克隆的小叶杨PsGA20OxcDNA片段总长为1403bp,基因内部含有完整的开放阅读框架,大小为1155bp,编码区可编码长度为385个AA残基,所推导的蛋白质氨基酸序列与拟南芥和水稻GA20Ox蛋白的同源性分别为66.0%和57.0%。组织特异性RT-PCR结果显示,PsGA20Ox基因在杨树茎、叶片和顶端分生组织中均有表达,但其表达模式却不同:PsGA20Ox在成熟木质部中表达丰度最高,在未成熟木质部和嫩叶中表达丰度较高,在顶端分生组织中有少量表达,在形成层组织中表达丰度极低。在此基础上,组合利用MEGA4.0和DnaSP4.50.4软件对小叶杨36株基因型个体的PsGA20Ox基因组DNA序列进行比对和分析,检测到49个单核苷酸多态性(SNP)位点,频率为1/35bp。其中,15个是常见SNPs,34个为罕见SNPs。在这些SNPs中,37个属于转换,12个属于颠换。在外显子区域,共检测到26个SNP位点,其中23个为同义突变,3个为错义突变。对PsGA20Ox基因内SNPs进行的连锁不平衡分析表明,随着核苷酸序列长度的增加,SNPs的连锁不平衡在基因内部就迅速衰退,因此,在小叶杨中,基于候选基因的连锁不平衡作图是可行的,而基于整个杨树基因组的连锁不平衡作图是不可行的,也是不必要的。
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关键词
小叶杨
赤霉素20氧化酶基因
组织
特
异性
反
转录
PCR表达
单核苷酸多态性
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职称材料
题名
E-box元件对大鼠γ-GCS催化亚单位基因调控作用的组织特异性研究
被引量:
4
1
作者
陈辉
李冰
冉丕鑫
机构
广州医学院第一附属医院广州呼吸疾病研究所
广州医学院实验医学研究中心
出处
《广州医学院学报》
2007年第1期1-5,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30170401)
广东省自然科学基金团队项目(04205342)
文摘
目的:探讨大鼠γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)催化亚单位(GCLC)基因启动子(-745~-705)区段E-box元件对其转录调控是否存在组织细胞差异性。方法:分别将GCLC5’端上游序列驱动的荧光素酶报道基因载体GCLC-Luc、E-box缺失的delE-box-GCLC-Luc及pGL3-enhancer空载体瞬时转染大鼠不同组织来源的细胞,测得荧光素酶活性;并经蛋白定量及pSV-β-半乳糖苷酶的活性测定,获得校正荧光素酶活性值,通过比较校正荧光素酶活性值差异间接判断E-box元件对GCLC转录活性的影响。结果:在大鼠心肌细胞H9C2(2-1),转染delE-box-GCLC-Luc组荧光素酶活性值较转染GCLC-Luc组明显升高(P<0.001),说明E-box能使其GCLC转录活性下调;在大鼠肾小球细胞HBZY-1,转染delE-box-GCLC-Luc组荧光素酶活性值较GCLC-Luc组明显降低(P<0.02),提示E-box具有上调该细胞GCLC转录活性的作用;而在大鼠神经胶质瘤细胞C6和小肠隐窝上皮细胞IEC-6,组间差异无统计学意义(P>0.05),提示E-box对其GCLC转录活性无影响。结论:E-box元件能组织特异性的调控大鼠GCLC基因的转录,该元件可能是决定GCLC基因存在组织差异性表达的重要顺式作用元件。
关键词
Γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶
氧化应激
E-box元件
组织特异性转录
大鼠
Keywords
γ-glutamate-cysteine synthase
oxidative stress
E-box element
tissue-specific transcription
rat
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
小叶杨GA20氧化酶基因的克隆、表达及单核苷酸多态性分析
被引量:
7
2
作者
卫尊征
郭琦
李百炼
张金凤
张德强
机构
北京林业大学林木花卉遗传育种教育部重点实验室
北京林业大学林木育种国家工程实验室
美国北卡罗莱纳州立大学林学系
出处
《林业科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期19-27,共9页
基金
教育部新世纪优秀人才支持计划专项基金(NCET-07-0084)
人事部留学回国人员优秀类专项基金
+4 种基金
国家自然科学基金(30600479
30872042)
教育部科学技术研究重大项目(307006)
全国百篇优秀博士论文专项基金(200770)
长江学者专项基金资助
文摘
利用RT-PCR方法,首次从小叶杨未成熟木质部cDNA中分离出PsGA20OxcDNA全长及其基因组DNA,并进行测序和序列分析。结果表明:克隆的小叶杨PsGA20OxcDNA片段总长为1403bp,基因内部含有完整的开放阅读框架,大小为1155bp,编码区可编码长度为385个AA残基,所推导的蛋白质氨基酸序列与拟南芥和水稻GA20Ox蛋白的同源性分别为66.0%和57.0%。组织特异性RT-PCR结果显示,PsGA20Ox基因在杨树茎、叶片和顶端分生组织中均有表达,但其表达模式却不同:PsGA20Ox在成熟木质部中表达丰度最高,在未成熟木质部和嫩叶中表达丰度较高,在顶端分生组织中有少量表达,在形成层组织中表达丰度极低。在此基础上,组合利用MEGA4.0和DnaSP4.50.4软件对小叶杨36株基因型个体的PsGA20Ox基因组DNA序列进行比对和分析,检测到49个单核苷酸多态性(SNP)位点,频率为1/35bp。其中,15个是常见SNPs,34个为罕见SNPs。在这些SNPs中,37个属于转换,12个属于颠换。在外显子区域,共检测到26个SNP位点,其中23个为同义突变,3个为错义突变。对PsGA20Ox基因内SNPs进行的连锁不平衡分析表明,随着核苷酸序列长度的增加,SNPs的连锁不平衡在基因内部就迅速衰退,因此,在小叶杨中,基于候选基因的连锁不平衡作图是可行的,而基于整个杨树基因组的连锁不平衡作图是不可行的,也是不必要的。
关键词
小叶杨
赤霉素20氧化酶基因
组织
特
异性
反
转录
PCR表达
单核苷酸多态性
Keywords
Populus simonii
GA20 Oxidase
tissue differential expression with RT-PCR
single nucleotide polymorphisms
分类号
S718.46 [农业科学—林学]
Q943.2 [生物学—植物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
E-box元件对大鼠γ-GCS催化亚单位基因调控作用的组织特异性研究
陈辉
李冰
冉丕鑫
《广州医学院学报》
2007
4
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职称材料
2
小叶杨GA20氧化酶基因的克隆、表达及单核苷酸多态性分析
卫尊征
郭琦
李百炼
张金凤
张德强
《林业科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2009
7
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职称材料
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引证文献
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