重组人Ⅲ型胶原基组织工程角膜植入兔眼生物相容性研究 被引量：2

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作者 戎慧丰 赵青 +3 位作者 颜华 刘贵培 刘源 刘文广 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1065-1070,共6页

背景组织工程角膜由于更接近活体角膜形态，植入体内易于成活而成为当今眼科学关注的热点。目的探讨组织工程角膜重组人Ⅲ型胶原（RHC-Ⅲ）／聚[3-（甲基丙烯酰胺）丙基-二甲基（3-磺丙）胺]（PMPDSAH）互穿聚合物网络（IPN）（RHC-Ⅲ／... 背景组织工程角膜由于更接近活体角膜形态，植入体内易于成活而成为当今眼科学关注的热点。目的探讨组织工程角膜重组人Ⅲ型胶原（RHC-Ⅲ）／聚[3-（甲基丙烯酰胺）丙基-二甲基（3-磺丙）胺]（PMPDSAH）互穿聚合物网络（IPN）（RHC-Ⅲ／PMPDSAHIPN）水凝胶植入兔眼的生物相容性及其作为角膜替代物的可行性。方法中国大耳白兔108只按照随机数字表法分为2个组，实验组90只，正常对照组3只，其他15只兔（30只眼）为同种异体移植组提供供体角膜。实验组根据角膜材料的不同分为RHC-Ⅲ／PMPDSAH IPN组、负载神经生长因子（NGF）的NGFRHC—Ⅲ／PMPDSAH IPN组和同种异体移植组，每组各30只兔，均取右眼为手术眼。将实验组3种材料移植入兔角膜前板层，术后裂隙灯下观察有无排斥反应，对角膜透明度、角膜新生血管（CNV）的变化进行评分，记录各组兔术眼角膜上皮化时间，观察期为6个月。分别于术后3d、1周、2周及术后1、3、6个月每组各取5只兔角膜行苏木精-伊红染色，术后6个月采用免疫组织化学法检测角膜上皮细胞特异性标志蛋白角蛋白K3的表达。对实验组3个亚组各时间点角膜透明度和CNV评分的差异比较进行多组独立样本的Kraskal—WallisH检验，3个亚组角膜上皮化时间比较采用单因素方差分析及LSD—t检验。结果实验的6个月中，RHC—Ⅲ／PMPDSAH IPN组、NGF RHC-Ⅲ／PMPDSAH IPN组和同种异体移植组兔术眼的植片均未脱出，未见免疫排斥反应。术后6个月，RHC—Ⅲ／PMPDSAH IPN组、NGFRHC-Ⅲ／PMPDSAH IPN组和同种异体移植组角膜透明度、CNV与正常对照组比较差异均无统计学意义（H=4．34，P=0．23；H=2．60，P=0．46）。NGFR HC-Ⅲ／PMPDSAH IPN组角膜上皮化时间最短，平均为（4．97±0．63）d，与RHC—Ⅲ／PMPDSAH IPN组和同种异体移植组比较差异均有统计学意义（t=11．97，P=0．00；t=5．80，P=0．00）；RHC-Ⅲ／PMPDSAH IPN组和同种异体移植组比较差异有统计学意义（t=6．32，P=0．00）。RHC—Ⅲ／PMPDSAH IPN组和NGF RHC-Ⅲ／PMPDSAH IPN组移植材料与兔角膜融合较好，术后2周材料部分降解，术后1个月材料均完全降解，术后6个月新生胶原纤维排列整齐，角膜上皮细胞中K3表达阳性。结论RHC—Ⅲ／PMPDSAH IPN与兔眼的生物相容性较好，NGF可以有效地促进角膜创口愈合和上皮再生，提高其力学强度后，有望作为一种安全有效的角膜替代物。 展开更多

关键词 角膜移植 重组人Ⅲ型胶原/聚[3-(甲基丙烯酰胺)丙基-二甲基(3-磺丙)胺]互穿聚合物网络水凝胶 组织工程角膜 神经生长因子 生物相容性

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新型生物组织工程角膜移植治疗犬猫角膜疾病的回顾性分析

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作者 胥辉豪 焦弋恩 +12 位作者 郑小波 张志鹏 杨丽辉 林金洲 王力波 唐静 李启卷 刘江渝 陈子洋 胡小艳 朴雪玲 张慧 甘玲 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期4389-4402,共14页

本研究旨在大型回顾性分析总结新型生物组织工程角膜(biotissue-engineered cornea,BEC)治疗犬猫角膜疾病的手术方法与长期临床效果。本研究回顾了2018—2022年使用BEC进行眼表移植手术并至少跟踪随访3个月及以上的犬猫的医疗记录。包... 本研究旨在大型回顾性分析总结新型生物组织工程角膜(biotissue-engineered cornea,BEC)治疗犬猫角膜疾病的手术方法与长期临床效果。本研究回顾了2018—2022年使用BEC进行眼表移植手术并至少跟踪随访3个月及以上的犬猫的医疗记录。包括坏死性角膜炎、深度角膜溃疡、后弹力层膨出以及角膜穿孔在内的犬猫患眼被纳入本研究。术后每周定期检查,并在术后0、3、6和12个月对部分患眼进行了光学相干断层扫描检查,根据最后一次检查结果对术眼角膜进行评级。本研究共纳入139只患眼(猫112例,犬27例),其中板层角膜移植103只眼,全层角膜移植36只眼。使用4种不同厚度的BEC植片(200、300、400和450μm),植片的平均直径为7.74 mm(范围为3~13 mm)。术后影响相对较大的并发症包括植片部分松脱或裂开(5例,3.60%)、植片溶解或穿孔(8例,5.76%)、角膜植床坏死(1例,0.72%)和眼球萎缩(1例,0.72%)。术后随访时间为3~50个月(中位数18个月),最终139只眼均保持了角膜和眼球完整性,其中133只眼(95.68%)保留了较敏锐视力。统计学分析显示,角膜植片透明度与动物年龄(P=0.021)、物种(P=0.000)、植片直径(P=0.032)、是否全层移植(P=0.000)以及角膜再上皮时间(P=0.000)显著正相关。BEC是一种安全且有效的角膜植片,可用于犬猫板层或全层角膜移植术,具有广泛的临床应用价值。 展开更多

关键词 犬 猫 角膜移植 生物组织工程角膜

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生物组织工程角膜穿透性移植治疗猫角膜坏死性穿孔 被引量：3

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作者 胥辉豪 郑小波 +7 位作者 金艺鹏 张迪 唐静 冯雪倩 龚雨豪 慎晓军 林珈好 林德贵 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第11期101-104,共4页

为了探讨生物组织工程角膜治疗猫角膜坏死性穿孔病例的效果,使用生物组织工程角膜对1例加菲猫进行了穿透性角膜移植手术。结果显示术后患眼角膜形态稳定,植片逐步恢复透明,未见明显的免疫排斥反应,眼前节稳定。结果表明生物组织工程角... 为了探讨生物组织工程角膜治疗猫角膜坏死性穿孔病例的效果,使用生物组织工程角膜对1例加菲猫进行了穿透性角膜移植手术。结果显示术后患眼角膜形态稳定,植片逐步恢复透明,未见明显的免疫排斥反应,眼前节稳定。结果表明生物组织工程角膜材料具有良好的组织相容性,能够促进角膜各层组织修复并维持角膜稳定性,可安全应用于猫穿透性角膜移植手术。 展开更多

关键词 组织工程角膜 穿透性角膜移植 猫 角膜坏死 角膜穿孔

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猫坏死性角膜炎的组织工程角膜深板层移植治疗 被引量：2

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作者 胥辉豪 郑小波 +5 位作者 李启卷 刘江渝 慎晓军 金艺鹏 林珈好 林德贵 《动物医学进展》 北大核心 2022年第11期135-139,共5页

1例波斯猫左眼出现眼睑痉挛、泪溢以及眼部分泌物增多等症状;基础眼科检查显示左眼患有坏死性角膜炎并伴随角膜糜烂;光学相干断层扫描显示坏死灶深度超过1/2角膜厚度。经角膜清创术联合新型生物组织工程角膜深板层移植术治疗后,植片存... 1例波斯猫左眼出现眼睑痉挛、泪溢以及眼部分泌物增多等症状;基础眼科检查显示左眼患有坏死性角膜炎并伴随角膜糜烂;光学相干断层扫描显示坏死灶深度超过1/2角膜厚度。经角膜清创术联合新型生物组织工程角膜深板层移植术治疗后,植片存活良好,未见明显感染与免疫排斥反应,术后患眼角膜长期保持透明且未见坏死性角膜炎复发。 展开更多

关键词 猫 坏死性角膜炎 生物组织工程角膜 深板层角膜移植术 光学相干断层扫描

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组织工程角膜上皮支架材料研究进展 被引量：4

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作者 王雪 颜华 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2010年第10期998-1002,共5页

体外培养角膜缘干细胞构建组织工程角膜上皮后再行角膜移植是治疗角膜缘干细胞缺乏导致眼表疾病的重要方法,选择理想的支架材料是构建组织工程角膜上皮过程中的一个关键环节。但支架材料的组织相容性、透光度,支架材料的降解与角膜修复... 体外培养角膜缘干细胞构建组织工程角膜上皮后再行角膜移植是治疗角膜缘干细胞缺乏导致眼表疾病的重要方法,选择理想的支架材料是构建组织工程角膜上皮过程中的一个关键环节。但支架材料的组织相容性、透光度,支架材料的降解与角膜修复的同步化,手术的长期有效性等问题仍有待进一步研究。细胞生物学、分子生物学、组织工程学和材料学的发展为构建组织工程角膜上皮的研究开辟了更广阔的前景。从近年来新发现或研制的支架材料的来源、优缺点及应用等方面,就构建组织工程角膜上皮支架材料的研究进展进行综述。 展开更多

关键词 组织工程角膜上皮 角膜缘干细胞 支架材料

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组织工程角膜透明度检测方法研究与评价 被引量：1

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作者 陶蒙 李文康 +1 位作者 李刚 李宏 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期764-768,共5页

确定组织工程角膜透明度的测量方法,开发一套能实时测量组织工程角膜透明度的仪器.根据光学的基本原理,以虚拟软件为开发平台,采用计算机,数据采集卡,照度传感器等器件,确定并开发一种检测组织工程角膜透明度的方法与装置,通过对不同光... 确定组织工程角膜透明度的测量方法,开发一套能实时测量组织工程角膜透明度的仪器.根据光学的基本原理,以虚拟软件为开发平台,采用计算机,数据采集卡,照度传感器等器件,确定并开发一种检测组织工程角膜透明度的方法与装置,通过对不同光源和被测样品进行检测,评价组织工程角膜透明度测量仪的精度.在确定组织工程角膜透明度测量方法的基础上,完成了基于虚拟仪器技术构建组织工程角膜透明度测量仪器开发,针对可见光、红色激光、有机玻璃、普法玻璃、隐形眼镜和猪角膜的测量计算,确定组织工程角膜透明度测量仪的系统误差修正值为0.009 4,精度误差为0.6％ ～ 1.0％.本研究的组织工程角膜透明度测量方法与仪器可以对组织工程角膜进行定量的检测,比目前使用的方法更科学和方便,有望成为组织工程角膜度透明度测量的新标准;采用红色激光光源测量的角膜透明度比普通可见光测得的值有细微不同;但是对于确定的光源,该仪器不影响被测组织工程角膜透明度的优劣评比;更换不同波长光源,可以获得该种波长情况下角膜透明度的精确值. 展开更多

关键词 组织工程角膜 透明度 虚拟仪器

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组织工程角膜上皮种子细胞的研究进展 被引量：1

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作者 曹静洁 张琛 赵少贞 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期857-860,共4页

对于角膜缘干细胞（LSCs）缺乏导致的眼表疾病,角膜移植是较好的治疗方法,传统角膜移植术的开展受供体来源匮乏、术后排斥反应等因素的影响.构建组织工程角膜上皮进行移植很大程度上解决了供体来源和术后免疫排斥的问题,成为重要和有效... 对于角膜缘干细胞（LSCs）缺乏导致的眼表疾病,角膜移植是较好的治疗方法,传统角膜移植术的开展受供体来源匮乏、术后排斥反应等因素的影响.构建组织工程角膜上皮进行移植很大程度上解决了供体来源和术后免疫排斥的问题,成为重要和有效的治疗方法,而种子细胞的选择是手术成功的关键.随着组织工程技术和细胞培养技术的不断发展,组织工程角膜种子细胞方面的研究越来越多,种子细胞的可选择性也越来越大,如胚胎干细胞（ESCs）、LSCs等研究已经逐步展开.就目前体外重建组织工程角膜上皮研究中使用的种子细胞及其近年来的相关研究进展进行综述。 展开更多

关键词 角膜上皮/移植 组织工程/方法学 干细胞/细胞学 细胞分化 细胞培养 组织工程角膜上皮

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脱细胞角膜基质应用于组织工程角膜的研究 被引量：2

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作者 戴静 陈建苏 +1 位作者 招志毅 谢耀元 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第11期1006-1010,共5页

目的研究磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)联合液氮缺氧冷冻法制备的脱细胞猪角膜(acellular porcine corneal,APC)基质作为组织工程角膜支架材料的可行性。方法使用200 U·mL-1PLA2和液氮缺氧冷冻处理正常猪角膜(native procine co... 目的研究磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)联合液氮缺氧冷冻法制备的脱细胞猪角膜(acellular porcine corneal,APC)基质作为组织工程角膜支架材料的可行性。方法使用200 U·mL-1PLA2和液氮缺氧冷冻处理正常猪角膜(native procine cornea,NPC)以制备APC,对制备的APC及NPC进行组织形态学及透射电镜观察。将实验分为两组,对照组为NPC组,实验组为APC组,分别对两组进行角膜厚度、吸水率、透光率、力学性质检测。结果 PLA2消化联合液氮缺氧冷冻法制备的APC高度透明,脱细胞完全,超微结构保持完整,除吸水率随时间变化的趋势与NPC比较差异有统计学意义(P<0.05)外,APC厚度(849.5±29.6)μm与NPC厚度(875.2±28.9)μm比较,以及透光率、力学性质与NPC比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 PLA2联合液氮缺氧冷冻法制备的APC生物和物理学特性与正常角膜相似,是一种适合组织工程角膜构建的良好支架材料。 展开更多

关键词 组织工程角膜 脱细胞 角膜基质 猪

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角膜组织工程支架壳聚糖基共混膜的制备及性能评价 被引量：7

9

作者 马群 刘万顺 +2 位作者 韩宝芹 杨朝忠 梁晔 《功能材料》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1547-1551,共5页

以脱乙酰度50%左右的水溶性壳聚糖(Cts)为主要成分,添加不同比例的明胶(gel)、硫酸软骨素(CS)共混制备出3组共混膜,测定了共混膜的透光率、含水量、细胞毒性及兔角膜基质细胞在膜上的生长活性,并评价了筛选出的共混膜在大鼠股部肌肉和... 以脱乙酰度50%左右的水溶性壳聚糖(Cts)为主要成分,添加不同比例的明胶(gel)、硫酸软骨素(CS)共混制备出3组共混膜,测定了共混膜的透光率、含水量、细胞毒性及兔角膜基质细胞在膜上的生长活性,并评价了筛选出的共混膜在大鼠股部肌肉和兔眼前房内的组织相容性。实验结果表明,V(Cts)∶V(gel)∶V(CS)=9∶1∶0.1的共混膜具有较好的透光率,合适的含水量,细胞毒性反应为0级,而且适合兔角膜基质细胞生长贴附;植入大鼠股部肌肉和兔眼前房后炎症反应较轻。该种膜片有望作为载体支架用于构建组织工程角膜。 展开更多

关键词 水溶性壳聚糖 支架 组织相容性 组织工程角膜

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组织工程化角膜支架的研究进展 被引量：1

10

作者 张凯(综述) 吴欣怡(审校) 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期945-948,共4页

近20年来，应用组织工程技术构建角膜组织——组织工程化角膜的构建取得了较大的进展。然而，能够广泛应用于临床的组织工程化角膜的构建仍不够完善。组织工程化角膜支架是构建组织工程化角膜的重要组成部分之一。探寻生物相容性好、可... 近20年来，应用组织工程技术构建角膜组织——组织工程化角膜的构建取得了较大的进展。然而，能够广泛应用于临床的组织工程化角膜的构建仍不够完善。组织工程化角膜支架是构建组织工程化角膜的重要组成部分之一。探寻生物相容性好、可降解并具有足够生物力学强度的支架材料是组织工程化角膜研究领域亟待解决的课题。就组织工程化角膜支架的发展历程进行概括总结，评价不同支架材料的优缺点，拓展理想支架材料的研发视野，为可广泛用于临床的组织工程化角膜的研制提供信息。 展开更多

关键词 组织工程化角膜 胶原 角膜基质 支架 角膜移植术

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猪脱细胞角膜基质组织结构特点与生物相容性研究 被引量：1

11

作者 许永根 黄琛 +3 位作者 李颖 冯云 曲洪强 王薇 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期27-31,共5页

背景构建组织工程化角膜时，载体的选择十分重要。目前有多种载体可供选用，但脱细胞角膜基质是公认的较好载体。目的观察猪脱细胞角膜基质的组织结构特点，评价其与异种角膜基质和上皮细胞的生物相容性。方法取猪角膜组织进行组织块培... 背景构建组织工程化角膜时，载体的选择十分重要。目前有多种载体可供选用，但脱细胞角膜基质是公认的较好载体。目的观察猪脱细胞角膜基质的组织结构特点，评价其与异种角膜基质和上皮细胞的生物相容性。方法取猪角膜组织进行组织块培养，经胰蛋白酶-EDTA酶消化角膜上皮、基质、内皮细胞，支架组织于-20℃冷冻干燥后灭菌保存。猪脱细胞角膜基质石蜡切片行常规苏木精一伊红染色，光学显微镜下观察组织的形态学特征；扫描电镜下观察其组织结构特点；并对其物理特性，如抗拉性、膨胀性、含水量和透明度进行评价。将猪脱细胞角膜基质移植到兔角膜基质层内，同时与体外培养的兔角膜上皮细胞共培养4周，分析其组织和细胞生物相容性。结果经酶消化处理后猪角膜组织中未见上皮、基质和内皮细胞，其胶原纤维直径大小、排列与正常角膜组织相同，抗拉性、膨胀性、含水量和透明度等物理特性与正常猪角膜相似。猪脱细胞角膜基质行异种兔角膜基质层间移植1周时可见轻度水肿，2周后水肿基本消退，4周时透明度较好。猪脱细胞角膜基质与兔角膜基质之间贴附良好，未见炎症反应及新生血管。兔角膜上皮细胞接种于猪脱细胞角膜基质上共培养4周后CK3表达阳性。猪脱细胞角膜基质脱水前与脱水2h、4h后及正常猪角膜基质间的抗拉性、膨胀性、含水量的差异均无统计学意义（P〉0．05），但脱水2h、4h后及正常猪角膜基质的透明度明显好于脱水前，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论猪脱细胞角膜基质组织结构与正常猪角膜相似，与兔角膜基质和上皮细胞具有良好的生物相容性。 展开更多

关键词 脱细胞角膜基质 组织工程角膜 生物相容性 异种角膜

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新型组织工程材料细菌纤维素在眼科等医学领域的研究与应用

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作者 李京(综述) 贾卉(审校) 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期798-802,共5页

细菌纤维素（BC）是一种独特的具有应用前景的组织工程支架材料，由细菌产生的纳米纯纤维网状结构组成。BC具有强度大及含水量高的优点，具有更好的生物相容性，BC的机械强度、化学特性和形态学具有可控性，更适用于作为体内的生物材料... 细菌纤维素（BC）是一种独特的具有应用前景的组织工程支架材料，由细菌产生的纳米纯纤维网状结构组成。BC具有强度大及含水量高的优点，具有更好的生物相容性，BC的机械强度、化学特性和形态学具有可控性，更适用于作为体内的生物材料。BC已广泛应用于生物医学领域，包括作为局部携带药物的伤口敷料替代品，在神经外科用于人工皮肤的覆盖和硬脑膜修补术以及动脉涂层支架，在骨科用于骨组织工程支架，在显微外科作为人工血管构建，在心血管外科用于人工心脏瓣膜的构建等，此外，BC的用途也已扩展到眼科领域组织工程化角膜基质的构建和角膜接触镜的生产。就BC在组织工程角膜及其他医学领域的应用进行综述。 展开更多

关键词 组织工程材料 细菌纤维素 生物相容性 组织工程角膜

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天然丝素纤维增强胶原基角膜修复材料的制备及其力学性能研究

13

作者 高闻语 刘杨 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期423-423,共1页

目的胶原蛋白作为天然角膜细胞外基质的主要成分,是组织工程角膜修复的首选原材料。目前常见的胶原基支架材料在临床移植手术中常因无法满足手术缝合的剪切过程而导致移植失败。因此,本研究希望能够通过在胶原基材料中引入天然丝素来改... 目的胶原蛋白作为天然角膜细胞外基质的主要成分,是组织工程角膜修复的首选原材料。目前常见的胶原基支架材料在临床移植手术中常因无法满足手术缝合的剪切过程而导致移植失败。因此,本研究希望能够通过在胶原基材料中引入天然丝素来改善其力学性能。方法首先,配置6.5 mg/m L的胶原蛋白(Col)溶液,并从丝纤维中提取丝素蛋白(SF)溶液;控制复合体系中的Col∶SF=100∶3;接下来,向溶液中加入一定浓度的EDC/NHS,使得EDC∶NHS∶Col三者质量比为1∶1∶6。待混合溶液在4℃条件下搅拌充分反应5 h后,除去混合溶液中的气泡,最后将溶液转移至模具中风干成膜,制备得到丝素蛋白复合胶原基薄膜。结果通过力学拉伸试验测定Col膜和Col-SF复合膜材料的力学性能,结果表明,两种薄膜材料的极限抗张强度分别为7.20±0.9 MPa和9.71±0.14 MPa,添加了丝素纤维的胶原基材料(Col-SF)的抗张强度明显高于纯胶原材料(Col)。同时,Col膜和Col-SF膜的断裂伸长率分别为45.1±0.7%和49.5±0.7%,两者之间没有显著的差异。结论本研究制备得到的Col-SF薄膜具有良好的机械性能,天然丝素纤维可以作为调节胶原基材料物理性质和增强其机械强度的一种合适选择。除此之外,Col-SF还具有良好的吸水性和降解性等理化性能,满足作为角膜修复材料的基本要求。 展开更多

关键词 组织工程角膜 手术缝合 丝素纤维 细胞外基质 抗张强度 支架材料 胶原蛋白 丝纤维

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一种基于胚胎干细胞构建角膜上皮样组织的新方法 被引量：2

14

作者 瞿杨洛娃 欧尚坤 +10 位作者 刘婷婷 张丽颖 邹笃雷 李娟 何卉 贾长凯 左程友 张敏杰 何昕 刘祖国 李炜 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期826-833,共8页

目的利用Rock抑制剂联合低氧-常氧培养方式构建基于胚胎干细胞(ESCs)的组织工程角膜上皮。方法应用贴壁培养作为分化方式,用全反式维甲酸(RA)+骨形态发生蛋白4(BMP4)诱导人源ESCs细胞系H1向角膜上皮样细胞分化。以SHEM与KSFM培养基1∶2... 目的利用Rock抑制剂联合低氧-常氧培养方式构建基于胚胎干细胞(ESCs)的组织工程角膜上皮。方法应用贴壁培养作为分化方式,用全反式维甲酸(RA)+骨形态发生蛋白4(BMP4)诱导人源ESCs细胞系H1向角膜上皮样细胞分化。以SHEM与KSFM培养基1∶2混合配比作为扩增基础培养基,分别添加或不添加Rock抑制剂Y27632,扩增ESCs来源的角膜上皮样细胞。将诱导后的角膜上皮样细胞接种于去上皮羊膜载体上,在低氧、常氧、低氧-常氧相结合等不同条件下构建组织工程角膜上皮。通过形态学、实时荧光定量PCR反应(RTFQ-PCR)、免疫荧光法检测诱导效果、ESCs来源角膜上皮样细胞的扩增能力及组织工程角膜上皮表型。结果与对照组比较,诱导组诱导后8 d ESCs标志物Oct4 mRNA,Notch信号通路相关因子Notch1、Jagged1 mRNA以及Wnt信号通路的相关因子c-myc和Cyclin D1 mRNA的相对表达量显著降低,表皮外胚层标志物p63和K18 mRNA的相对表达量显著增加,差异均有统计学意义(t=14.63、20.15、93.50、11.60、19.30、18.44、22.63,均P<0.05)。与Y27632未添加组相比,Y27632添加组细胞的p63、K14 mRNA相对表达量以及Notch信号通路受体Notch1和Jagged1 mRNA相对表达量显著升高,Wnt信号通路下游靶向基因c-myc和CylinD1 mRNA相对表达量明显降低,差异均有统计学意义(t=20.29、59.22、2.90、39.59、5.32、10.14,均P<0.05);2个组K18 mRNA的相对表达量无明显变化,差异无统计学意义(t=1.38,P>0.05)。Y27632添加组用低氧-常氧相结合的方式构建ESCs来源的上皮片较持续低氧或常氧培养复层化更明显,排列更紧密,并全层表达上皮细胞标志物Pan-CK和K18及上皮干细胞标志物p63和K14。结论Y27632的添加可增加ESCs来源角膜上皮样细胞的增生能力,激活Notch信号通路,抑制Wnt信号通路。采用低氧-常氧相结合的方式,利用添加Y27632的培养基扩增构建ESCs来源的组织工程角膜上皮有助于上皮片的复层化。 展开更多

关键词 胚胎干细胞 角膜上皮组织工程 Rock抑制剂 低氧-常氧培养

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种植人骨髓间充质干细胞的猪角膜板层移植治疗兔角膜损伤的初步研究 被引量：7

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作者 施文建 侯光辉 +1 位作者 吴静 徐锦堂 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期300-305,共6页

目的研究种植人骨髓间充质干细胞(MSCs)的猪角膜基质治疗兔角膜损伤的可能性。方法用全骨髓贴壁法分离纯化人MSCs并传代,流式细胞仪检测免疫表型及诱导成脂、成骨分化鉴定。12只新西兰白兔随机分为2组,实验组取第3代MSCs接种于去上皮的... 目的研究种植人骨髓间充质干细胞(MSCs)的猪角膜基质治疗兔角膜损伤的可能性。方法用全骨髓贴壁法分离纯化人MSCs并传代,流式细胞仪检测免疫表型及诱导成脂、成骨分化鉴定。12只新西兰白兔随机分为2组,实验组取第3代MSCs接种于去上皮的猪角膜基质上,培养4 d后移植到广泛损伤的兔角膜上,对照组单纯移植去上皮猪角膜基质。术后2、4、8周,取各实验眼行组织学检查,观察移植的MSCs及猪角膜基质的存活、转归及移植局部的反应。免疫组织化学、免疫荧光染色检测移植后角膜上皮细胞角蛋白12的表达。结果培养获得的MSCs中CD29阳性者占95.97%,CD44阳性者占96.49%,CD90阳性者占92.79%,CD105阳性者占94.66%,CD34阳性者占0.59%,CD45阳性者占0.36%,符合MCSs的免疫表型,并可以诱导成脂及成骨分化。实验组MSCs接种到去上皮猪角膜基质后贴附、生长迅速,术后植片在植床上存活良好,无排斥反应,角膜较对照组透明,新生血管少,而对照组在移植后发生排斥反应。实验组角膜免疫组织化学及免疫荧光染色均检测出CK12阳性细胞。结论种植MSCs的猪角膜基质移植到损伤兔角膜后可以存活,MSCs可以分化为角膜上皮样细胞,具有构建组织工程角膜的潜能。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 猪角膜基质 组织工程角膜 角膜移植

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模拟微重力条件下兔角膜基质细胞在复合材料上的三维培养 被引量：3

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作者 李晓霞 陈建苏 +2 位作者 李沁华 郑佩娥 吴连胜 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期241-244,共4页

目的探讨在模拟微重力条件下兔角膜基质细胞在复合材料上的三维生长特性,为构建组织工程角膜提供新的途径。方法Ⅱ型胶原酶消化法获取原代兔角膜基质细胞,以密度为1×105/mL将第5代细胞种植于无菌复合载体材料上。以模拟微重力条件... 目的探讨在模拟微重力条件下兔角膜基质细胞在复合材料上的三维生长特性,为构建组织工程角膜提供新的途径。方法Ⅱ型胶原酶消化法获取原代兔角膜基质细胞,以密度为1×105/mL将第5代细胞种植于无菌复合载体材料上。以模拟微重力条件下培养兔角膜基质细胞为实验组与传统静态培养系统进行细胞培养作对照。分别在6、12、18d取细胞和载体行苏木精-伊红染色光镜观察和扫描电镜观察;在3、6、9、12、15、18d取出行CCK-8法检测细胞增生功能。结果对照组只在材料表面可见单层细胞;实验组大量细胞与载体黏附紧密且生长入载体内部,载体材料降解显著。扫描电镜下实验组可见细胞胞体小且突触丰富,培养第18d细胞在材料表面分泌大量胶原膜样物;模拟微重力系统促进了细胞增生(P=0.004)。结论模拟微重力环境中在复合材料上培养的兔角膜基质细胞接近生理状态,更适用于组织工程三维构建,为构建更接近生理状态的组织工程角膜提供了依据。 展开更多

关键词 模拟微重力 基质细胞 组织工程角膜

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诱导人脐带间充质干细胞分化为角膜上皮样细胞的研究 被引量：3

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作者 徐舒怡 侯光辉 +1 位作者 吴静 徐锦堂 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期882-887,共6页

背景眼表疾病导致的角膜盲已成为全球致盲性角膜疾病中的主要原因之一。随着组织工程技术的发展和进步，组织工程角膜为眼表疾病的治疗开辟了新的途径。目的观察体外培养的人脐带间充质干细胞（UC—MSCs）移植到兔角膜基质后的分化发育... 背景眼表疾病导致的角膜盲已成为全球致盲性角膜疾病中的主要原因之一。随着组织工程技术的发展和进步，组织工程角膜为眼表疾病的治疗开辟了新的途径。目的观察体外培养的人脐带间充质干细胞（UC—MSCs）移植到兔角膜基质后的分化发育情况，探讨人UC-MSCs分化为角膜上皮细胞以及治疗兔角膜损伤的可行性。方法获取人脐带组织，采用Ⅳ型胶原酶消化法分离纯化人UC—MSCs并传代，取第3代细胞用于扩增和实验。流式细胞仪检测细胞的免疫表型及诱导成骨分化鉴定。24只新西兰大白兔按随机数字表法随机分为2个组，将人UC—MSCs接种于去上皮的猪角膜基质上，培养4d后行实验组兔左眼板层角膜移植；对照组以相同的手术方法单纯移植去上皮猪角膜基质。术后对角膜定期行活体激光共焦显微镜检查，并分别于术后2、4、8周摘除各组实验眼行组织病理学和免疫荧光检查，评价移植到兔角膜基质的人UC-MSCs的存活、分化以及移植局部的反应等；应用免疫荧光技术检测移植后角膜上皮细胞中角蛋白3（CK3）、CKl2以及转运蛋白G超家族成员（ABCG2）的表达。结果消化培养的人UC—MSCs呈圆形，细胞胞体较大，贴壁后细胞呈长梭形。培养获得的人UC—MSCs的细胞表型CD105^＋／CD29^＋／CD44^＋／CD34^-／CD45^-，并可诱导分化为成骨细胞。实验组人ISC—MSCs接种到去上皮猪角膜基质后贴附良好、生长迅速，术后植片在植床上存活良好，种植了人UC-MSCs的去上皮猪角膜移植到兔眼，可见实验组受体角膜较对照组透明，未见明显新生血管，在活体共焦显微镜下可见新生的角膜上皮样细胞，未发生免疫排斥反应。免疫荧光检测可见在重建的角膜上皮层检测到CK3及CKl2的阳性表达，而未见ABCG2的表达。结论将种植了人UC—MSCs的猪角膜基质移植到损伤的兔角膜后，人UC—MSCs可以存活、增生并分化为角膜上皮样细胞，可用于修复甚至重建损伤的角膜表层。 展开更多

关键词 人脐带间充质干细胞 猪角膜基质 组织工程角膜 上皮 细胞分化

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培养兔角膜基质细胞的一种新方法——悬浮基质片法 被引量：2

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作者 陈义 侯光辉 +1 位作者 吴静 徐锦堂 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第2期124-127,共4页

目的寻找一种新的、简易的兔角膜基质细胞培养方法。方法去除兔角膜上皮层、后弹力层及内皮细胞层,将处理后剩下的全层基质(简称基质片)置于6孔板中,分别进行悬浮培养(悬浮基质片法)、组织块贴壁培养法培养、Ⅱ型胶原蛋白酶消化法培养... 目的寻找一种新的、简易的兔角膜基质细胞培养方法。方法去除兔角膜上皮层、后弹力层及内皮细胞层,将处理后剩下的全层基质(简称基质片)置于6孔板中,分别进行悬浮培养(悬浮基质片法)、组织块贴壁培养法培养、Ⅱ型胶原蛋白酶消化法培养。观察所培养细胞的体外生长特性,并进行波形蛋白免疫组化鉴定。结果采用悬浮基质片法可成功培养出兔角膜基质细胞,细胞具有长短不等的数个突起,呈梭形、不规则三角形或纺锤形,核椭圆、居中,胞浆清亮,未见其他细胞混杂其中。悬浮培养8～10d贴壁,贴壁后约5d基本融合。其生物学特性与组织块贴壁培养法及Ⅱ型胶原蛋白酶消化法培养的细胞一致。波形蛋白免疫组化染色显示3种方法均为阳性。结论悬浮基质片法培养角膜基质细胞,不需用酶,且具有简便、可靠、不易污染、成功率高等明显优势,为角膜基质细胞的培养提供了新的途径,值得推广。 展开更多

关键词 角膜基质细胞 兔 培养 组织工程角膜

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脱细胞猪角膜基质体外支持皮肤细胞生长的实验研究 被引量：2

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作者 林旭初 孙涛 +2 位作者 金岩 惠延年 孟浩 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2009年第8期565-567,共3页

目的探讨脱细胞猪角膜基质体外是否支持皮肤细胞的生长。方法制备脱细胞猪角膜基质(前期实验已完成)。体外培养人皮肤表皮细胞和成纤维细胞,取第3代人皮肤成纤维细胞接种在脱细胞猪角膜基质的中间基质面,培养3d后,将材料翻转,取第3代人... 目的探讨脱细胞猪角膜基质体外是否支持皮肤细胞的生长。方法制备脱细胞猪角膜基质(前期实验已完成)。体外培养人皮肤表皮细胞和成纤维细胞,取第3代人皮肤成纤维细胞接种在脱细胞猪角膜基质的中间基质面,培养3d后,将材料翻转,取第3代人皮肤表皮细胞接种在材料的上皮面上,再培养10d后,取细胞-支架复合体制作石蜡切片,HE染色后光镜下观察。结果组织学观察显示皮肤的表皮细胞和成纤维细胞体外均可在脱细胞猪角膜基质上黏附生长。接种10d后,皮肤表皮细胞在材料表面形成复层结构,可见角化的细胞。接种13d可见成纤维细胞存活并在支架层间生长。结论脱细胞猪角膜基质有良好的细胞相容性,在体外能支持皮肤细胞的生长和增生。 展开更多

关键词 脱细胞猪角膜基质 皮肤 表皮细胞 成纤维细胞 组织工程角膜

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转谷氨酰胺酶交联胶原凝胶构建三维角膜基质 被引量：2

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作者 李燕 陈建苏 +1 位作者 李晓霞 王伟 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期839-843,共5页

目的检测转谷氨酰胺酶交联胶原凝胶对三维培养的角膜基质细胞的影响,探讨可提高机械性能的组织工程角膜基质层新途径。方法胶原酶消化法获取原代兔角膜基质细胞,以加入转谷氨酰胺酶与胶原凝胶交联为实验组,不加酶交联为对照组。倒置显... 目的检测转谷氨酰胺酶交联胶原凝胶对三维培养的角膜基质细胞的影响,探讨可提高机械性能的组织工程角膜基质层新途径。方法胶原酶消化法获取原代兔角膜基质细胞,以加入转谷氨酰胺酶与胶原凝胶交联为实验组,不加酶交联为对照组。倒置显微镜下每日观察细胞生长情况、Alamar-Blue试剂检测细胞增生、免疫荧光法检测凝胶内细胞波形蛋白、检测透光度、酶消化法检测胶原凝胶抗消化能力。结果实验组细胞胶原凝胶内附着和生长优于对照组,细胞在凝胶内呈树枝状生长。2组细胞均随培养时间延长明显增生(P=0.000)。共焦显微镜下见2组细胞胞浆波形蛋白均阳性表达,实验组细胞伪足更丰富。实验组透光度稍差于对照组。实验组抵抗胶原酶消化的能力显著增强。结论酶交联的胶原凝胶对角膜基质细胞无毒性作用,重构的基质层结构更加稳定,有利于组织工程角膜基质层的构建。 展开更多

关键词 转谷氨酰胺酶 交联 胶原凝胶 组织工程角膜

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