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华北大黑鳃金龟几丁质脱乙酰酶HoCDA5的分离及定位分析
1
作者
郜玉杰
赵丹
+2 位作者
郭巍
王伟
张雅昆
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期93-99,共7页
为了获得华北大黑鳃金龟(Holotrichia oblita)幼虫几丁质脱乙酰酶5(HoCDA5)及其在不同组织中的表达情况,本研究利用RACE-PCR方法扩增获得编码华北大黑鳃金龟几丁质脱乙酰酶的cDNA基因hocda5(GenBank登录号:ANI87833),该基因的开放阅读框...
为了获得华北大黑鳃金龟(Holotrichia oblita)幼虫几丁质脱乙酰酶5(HoCDA5)及其在不同组织中的表达情况,本研究利用RACE-PCR方法扩增获得编码华北大黑鳃金龟几丁质脱乙酰酶的cDNA基因hocda5(GenBank登录号:ANI87833),该基因的开放阅读框为1140bp,编码379个氨基酸,属于第V类CDA蛋白。在大肠杆菌BL21(DE3)细胞中成功表达约42kDa的蛋白,制备了HoCDA5蛋白的多克隆抗体并对其进行效价测定。利用western blot方法分析了HoCDA5蛋白在不同组织,不同发育时期的表达情况。结果表明:该蛋白主要分布于围食膜,中肠,并且在中肠的前部含量最高,在幼虫的粪便中也检测到了较大量的HoCDA5蛋白,推测华北大黑鳃金龟幼虫的围食膜为I型,HoCDA5可能随着围食膜的新陈代谢排出体外。本研究成功克隆和表达了HoCDA5重组蛋白,制备了多克隆抗体,对该蛋白进行了组织定位分析,为进一步明确HoCDA5蛋白的功能提供了理论依据。
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关键词
华北大黑鳃金龟
几丁质脱乙酰酶
HoCDA5
组织定位分析
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职称材料
甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶SeCDA7的表达与结合活性分析
2
作者
张伟
毕扬
+2 位作者
赵丹
宗召莉
郭巍
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第8期111-117,共7页
几丁质脱乙酰酶(Chitin deacetylase,CDA)是昆虫几丁质代谢酶系中的重要组分,是害虫防治的重要靶标。通过RT-PCR技术克隆得到编码甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶secda7基因(GenBank登录号为MG604929),该基因长1431bp,包含开放阅读框长1134bp,Se...
几丁质脱乙酰酶(Chitin deacetylase,CDA)是昆虫几丁质代谢酶系中的重要组分,是害虫防治的重要靶标。通过RT-PCR技术克隆得到编码甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶secda7基因(GenBank登录号为MG604929),该基因长1431bp,包含开放阅读框长1134bp,SeCDA7蛋白的预测分子量分别为43.156kD。结构域分析显示,SeCDA7具有一个多聚糖乙酰基转移酶催化区,属于第Ⅴ类CDA蛋白。分别构建了原核和真核重组表达载体,利用大肠杆菌和Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统转染Sf9昆虫细胞,成功表达了SeCDA7蛋白,纯化SeCDA7蛋白并分析几丁质结合活性,结果表明SeCDA7蛋白具有几丁质结合活性;荧光定量PCR结果显示secda7基因主要在中肠组织表达。本研究实现了甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶基因secda7的外源表达,并鉴定出SeCDA7蛋白具有几丁质结合活性,为深入探究甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶的生理功能提供了理论依据。
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关键词
甜菜夜蛾
几丁质脱乙酰酶SeCDA7
外源表达
组织定位分析
几丁质结合活性
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职称材料
题名
华北大黑鳃金龟几丁质脱乙酰酶HoCDA5的分离及定位分析
1
作者
郜玉杰
赵丹
郭巍
王伟
张雅昆
机构
河北农业大学生命科学学院
北京农学院植物科学技术学院
出处
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期93-99,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31471775&30971910)
国家现代农业(花生)产业技术体系项目(CARS-14)
河北省自然科学基金(C2016204082)
文摘
为了获得华北大黑鳃金龟(Holotrichia oblita)幼虫几丁质脱乙酰酶5(HoCDA5)及其在不同组织中的表达情况,本研究利用RACE-PCR方法扩增获得编码华北大黑鳃金龟几丁质脱乙酰酶的cDNA基因hocda5(GenBank登录号:ANI87833),该基因的开放阅读框为1140bp,编码379个氨基酸,属于第V类CDA蛋白。在大肠杆菌BL21(DE3)细胞中成功表达约42kDa的蛋白,制备了HoCDA5蛋白的多克隆抗体并对其进行效价测定。利用western blot方法分析了HoCDA5蛋白在不同组织,不同发育时期的表达情况。结果表明:该蛋白主要分布于围食膜,中肠,并且在中肠的前部含量最高,在幼虫的粪便中也检测到了较大量的HoCDA5蛋白,推测华北大黑鳃金龟幼虫的围食膜为I型,HoCDA5可能随着围食膜的新陈代谢排出体外。本研究成功克隆和表达了HoCDA5重组蛋白,制备了多克隆抗体,对该蛋白进行了组织定位分析,为进一步明确HoCDA5蛋白的功能提供了理论依据。
关键词
华北大黑鳃金龟
几丁质脱乙酰酶
HoCDA5
组织定位分析
Keywords
Holotrichia oblita
chitin deacetylase
HoCDA5
localization analysis
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶SeCDA7的表达与结合活性分析
2
作者
张伟
毕扬
赵丹
宗召莉
郭巍
机构
北京农学院植物科学技术学院
中国农业科学院蔬菜花卉研究所
河北农业大学植物保护学院
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第8期111-117,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31471775)
国家现代农业产业技术体系项目(CARS-13)
文摘
几丁质脱乙酰酶(Chitin deacetylase,CDA)是昆虫几丁质代谢酶系中的重要组分,是害虫防治的重要靶标。通过RT-PCR技术克隆得到编码甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶secda7基因(GenBank登录号为MG604929),该基因长1431bp,包含开放阅读框长1134bp,SeCDA7蛋白的预测分子量分别为43.156kD。结构域分析显示,SeCDA7具有一个多聚糖乙酰基转移酶催化区,属于第Ⅴ类CDA蛋白。分别构建了原核和真核重组表达载体,利用大肠杆菌和Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统转染Sf9昆虫细胞,成功表达了SeCDA7蛋白,纯化SeCDA7蛋白并分析几丁质结合活性,结果表明SeCDA7蛋白具有几丁质结合活性;荧光定量PCR结果显示secda7基因主要在中肠组织表达。本研究实现了甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶基因secda7的外源表达,并鉴定出SeCDA7蛋白具有几丁质结合活性,为深入探究甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶的生理功能提供了理论依据。
关键词
甜菜夜蛾
几丁质脱乙酰酶SeCDA7
外源表达
组织定位分析
几丁质结合活性
Keywords
Spodoptera exigua
chitin deacetylase SeCDA7
exogenous expression
tissue localization analysis
chitin binding activity
分类号
S433.4 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
华北大黑鳃金龟几丁质脱乙酰酶HoCDA5的分离及定位分析
郜玉杰
赵丹
郭巍
王伟
张雅昆
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
0
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职称材料
2
甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶SeCDA7的表达与结合活性分析
张伟
毕扬
赵丹
宗召莉
郭巍
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
0
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