组成型启动子P_(ldh)对乳酸菌表达系统外源基因表达的影响研究

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作者 刘芯孜 赵海渊 +7 位作者 鞠宁 陈莹 王梓 孟伟静 李佳璇 姜艳平 崔文 王晓娜 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第6期2937-2947,共11页

旨在利用AmpR(氨苄青霉素抗性)报告基因表达系统,构建不同数量乳酸菌组成型启动子P_(ldh)串联、启动子P_(ldh)与AmpR报告基因不同顺序的乳酸菌表达载体系统,分别检测AmpR报告基因转录水平、蛋白表达量并评价AMPR酶活性,从而筛选出稳定... 旨在利用AmpR(氨苄青霉素抗性)报告基因表达系统,构建不同数量乳酸菌组成型启动子P_(ldh)串联、启动子P_(ldh)与AmpR报告基因不同顺序的乳酸菌表达载体系统,分别检测AmpR报告基因转录水平、蛋白表达量并评价AMPR酶活性,从而筛选出稳定且强表达的组成型多启动子表达系统,为乳酸菌活菌载体表达外源抗原或功能性蛋白提供理论依据。对P_(ldh)启动子进行生物信息学分析,构建不同数量启动子P_(ldh)串联的重组乳酸菌以及启动子与外源基因AmpR不同顺序重组乳酸菌。通过实时荧光定量PCR、Western blot、间接ELISA检测以及氨苄青霉素活菌筛选试验综合评估不同表达系统中外源基因表达的强弱。PCR结果显示重组乳酸菌成功扩增出600、900、2300和2300 bp的P_(ldh)-P_(ldh)、P_(ldh)-P_(ldh)-P_(ldh)、P_(ldh)-AmpR-P_(ldh)-AmpR和P_(ldh)-P_(ldh)-AmpR-AmpR目的片段;Western blot结果显示重组菌均可表达AMPR蛋白,目的蛋白大小均约为28 ku。间接ELISA、荧光定量PCR和AMPR酶活性检测结果均显示,在不同数量启动子P_(ldh)串联乳酸菌表达载体系统中,三启动子驱动AmpR报告基因表达的效率显著高于双启动子(P<0.05),三启动子、双启动子驱动AmpR报告基因表达的效率均极显著高于单启动子(P<0.01),且均极显著高于对照菌pPG-Ampr/HLJ-27(P<0.01);在启动子P_(ldh)与AmpR报告基因不同顺序的乳酸菌表达载体系统中,重组菌pPG-P_(ldh)-P_(ldh)-Ampr-Ampr/HLJ-27驱动AmpR报告基因表达的效率极显著高于重组菌pPG-P_(ldh)-Ampr-P_(ldh)-Ampr/HLJ-27(P<0.01)。本研究利用AmpR报告基因成功构建了5种组成型多启动子P_(ldh)乳酸菌表达系统,结果显示在不同数量启动子P_(ldh)串联驱动单外源蛋白载体系统中,启动子调控转录进而驱动外源基因表达量与启动子数量呈正相关;在双启动子驱动双外源蛋白载体系统中,连续串联两个启动子调控转录进而驱动双外源基因表达效率显著高于两个启动子分别驱动双外源基因表达效率;以上数据为乳酸菌表达载体对外源蛋白的表达效率优化提供了必要的依据。 展开更多

关键词 乳酸菌表达系统 组成型启动子P_(ldh) 启动子活性 外源基因表达效率

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光诱导和组成型启动子控制柠檬酸合酶基因过量表达对转基因烟草耐铝性影响的比较 被引量：6

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作者 王奇峰 胡清泉 +4 位作者 赵玥 易琼 李昆志 玉永雄 陈丽梅 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期31-39,共9页

分别用光诱导型启动子（PrbcS）和组成型启动子（Ca MV35S）驱动柠檬酸合酶基因（cs）在转基因烟草中过量表达,比较转基因烟草中柠檬酸的含量和分泌量及其铝耐受性的变化.结果表明：诱导型转基因株系的CS酶活性是野生型的2.3~2.4倍,组... 分别用光诱导型启动子（PrbcS）和组成型启动子（Ca MV35S）驱动柠檬酸合酶基因（cs）在转基因烟草中过量表达,比较转基因烟草中柠檬酸的含量和分泌量及其铝耐受性的变化.结果表明：诱导型转基因株系的CS酶活性是野生型的2.3~2.4倍,组成型转基因株系的酶活性是野生型的1.6~2倍;在30μmol·L-1铝胁迫下,诱导型转基因植株的根相对伸长量是野生型的2.8~2.9倍,组成型的根相对伸长量是野生型的2~2.3倍;在无铝或300μmol·L-1铝胁迫下,转基因烟草叶片和根中柠檬酸含量均高于野生型,其中诱导型转基因植株叶片中柠檬酸含量高于组成型转基因植株,转基因烟草柠檬酸的分泌量分别是野生型的1.8~2.0倍和3.0~3.3倍;在有铝胁迫的珍珠岩基质上培养时,转基因烟草的生长情况好于野生型.这些结果证明,与Ca MV35S相比,采用PrbcS启动子控制cs基因的过量表达可更有效地增加转基因烟草中CS的酶活性及叶片中柠檬酸的合成量,同时也能更有效地提高转基因烟草柠檬酸的分泌量,从而增强其对铝毒害的抵御能力. 展开更多

关键词 柠檬酸合酶 铝耐受性 转基因烟草 光诱导启动子 组成型启动子

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1个新水稻组成型启动子的克隆与功能鉴定 被引量：7

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作者 魏晶 毛伟华 +1 位作者 林拥军 陈浩 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期139-146,共8页

根据基因芯片数据库和RT-PCR验证得到1个高活性的水稻组成型表达基因(TIGR Locus:LOC-Os07g34589),用PCR技术从籼稻品种明恢63基因组中克隆得到其上游启动子PSUI1,长度为1 941bp;将其与β-glucuronidase(GUS)报告基因融合构建植物表达载... 根据基因芯片数据库和RT-PCR验证得到1个高活性的水稻组成型表达基因(TIGR Locus:LOC-Os07g34589),用PCR技术从籼稻品种明恢63基因组中克隆得到其上游启动子PSUI1,长度为1 941bp;将其与β-glucuronidase(GUS)报告基因融合构建植物表达载体DX2181b-PSUI1,利用玉米Ubiquitin启动子融合GUS报告基因构建表达载体DX2181b-PUbi作为对照,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法将DX2181b-PSUI1和DX2181b-PUbi转化粳稻品种中花11。组织化学染色表明,含DX2181b-PSUI1的转基因植株中,GUS基因在幼苗期叶片、叶鞘、根,抽穗期叶片、叶鞘、茎秆、颖壳、雄蕊和成熟期的叶片、叶鞘、茎秆、胚、胚乳中均有表达,说明PSUI1为组成型启动子。对GUS表达活性进行定量分析表明,PSUI1启动子的活性约为玉米Ubiquitin启动子活性的1/3～1/2,但是PSUI1表现出了更好的表达稳定性。 展开更多

关键词 水稻 组成型启动子 GUS报告基因 GUS染色 GUS定量

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诱导型和组成型启动子对酿酒酵母合成紫杉二烯的影响 被引量：3

4

作者 闫慧芳 丁明珠 元英进 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第11期4167-4174,共8页

近年来利用合成生物学手段生产萜类化合物逐渐成为一种趋势。诱导型和组成型启动子调控萜类的生产各有利弊,而启动子类型的选择需要根据特定体系和产物来进行具体分析。本工作针对紫杉醇关键前体紫杉二烯的合成,分别研究了酵母细胞中诱... 近年来利用合成生物学手段生产萜类化合物逐渐成为一种趋势。诱导型和组成型启动子调控萜类的生产各有利弊,而启动子类型的选择需要根据特定体系和产物来进行具体分析。本工作针对紫杉醇关键前体紫杉二烯的合成,分别研究了酵母细胞中诱导型启动子和组成型启动子的调控。首先通过过表达酵母内源截短的羟甲戊二酰辅酶A基因(thmgr)和法尼基焦磷酸合酶基因(erg20),实现了对酵母内源模块的调控。随后向改造后的底盘细胞中整合入诱导性启动子调控的外源紫杉二烯合成模块,得到了紫杉二烯产量为5.2mg·L-1的人工酵母。而换用组成型启动子tdh3p调控时,产量达到11.5mg·L-1,说明对于这个体系组成型启动子更为适合。通过简单的发酵条件优化,该菌株产量提升了70%,达到19.5mg·L-1。组成型启动子调控的菌株可以利用葡萄糖作为碳源,因而更利于后续大规模发酵。 展开更多

关键词 紫杉二烯 酵母底盘 功能模块 诱导型启动子 组成型启动子

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不同组成型启动子对乳酸菌表达系统外源基因表达影响的比较 被引量：1

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作者 袁世豪 张海琳 +9 位作者 鞠宁 王新乐 赵海渊 邵怡岚 李佳璇 姜艳平 崔文 唐丽杰 李一经 王晓娜 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期4370-4380,共11页

【目的】构建不同组成型启动子的乳酸菌表达载体系统,评价不同启动子驱动外源基因表达的活性,筛选出强表达的启动子,为后续研究乳酸菌作为活菌载体表达外源抗原或功能性蛋白提供理论依据。【方法】以大肠杆菌-乳酸菌穿梭载体pPG为骨架,... 【目的】构建不同组成型启动子的乳酸菌表达载体系统,评价不同启动子驱动外源基因表达的活性,筛选出强表达的启动子,为后续研究乳酸菌作为活菌载体表达外源抗原或功能性蛋白提供理论依据。【方法】以大肠杆菌-乳酸菌穿梭载体pPG为骨架,将表达载体中启动子序列分别替换为组成型强启动子Pldh、PHH和Phce,利用PCR方法扩增报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和氨苄青霉素抗性基因(Ampr),并在下游多克隆位点中分别插入荧光素酶(LUC)、EGFP和Ampr报告基因,构建9种乳酸菌表达质粒,电转入副干酪乳杆菌HLJ-27感受态细胞,筛选获得9株重组乳酸菌。通过实时荧光定量PCR检测报告基因在重组菌中的mRNA转录水平,利用Western blotting和间接ELISA检测蛋白的表达量,并检测表达蛋白的活性,以评估3个启动子的活性强弱。【结果】PCR成功扩增出大小约720 bp的EGFP基因和850 bp的Ampr基因。Western blotting结果显示,在9株重组乳酸菌中,分别成功表达出了58 ku的LUC蛋白、26 ku的EGFP蛋白和28 ku的Ampr蛋白。实时荧光定量PCR和间接ELISA检测结果显示,启动子Pldh启动外源基因转录水平和驱动外源蛋白表达水平均显著高于启动子PHH和Phce(P<0.05;P<0.01)。报告基因检测结果显示,启动子Pldh驱动LUC、EGFP和Ampr外源蛋白的活性显著高于启动子PHH和Phce(P<0.05;P<0.01)。【结论】本研究成功构建了3种启动子报告基因表达系统,确定了3种启动子活性强弱依次为Pldh、PHH和Phce,探究出一种启动子活性筛选的优势筛选系统——Ampr报告系统,为高表达乳酸菌载体系统的建立提供了必要的依据。 展开更多

关键词 乳酸菌表达系统 组成型启动子 报告基因系统 外源蛋白表达

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两种组成型启动子PermE*和PSau3A在变铅青链霉菌中的启动效果比较

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作者 张莹 陶欣艺 +1 位作者 王风清 魏东芝 《化学与生物工程》 CAS 2013年第11期47-50,54,共5页

红霉素抗性启动子PermE*和来源于链霉菌核基因组片段的PSau3A启动子均属于链霉菌组成型强启动子,分别将它们插入大肠杆菌-链霉菌穿梭质粒pNW-S1的SD序列和转录起始位点之间,构建成两个稳定的组成型表达质粒:pNW-S3和pNW-S4。以磷脂酰丝... 红霉素抗性启动子PermE*和来源于链霉菌核基因组片段的PSau3A启动子均属于链霉菌组成型强启动子,分别将它们插入大肠杆菌-链霉菌穿梭质粒pNW-S1的SD序列和转录起始位点之间,构建成两个稳定的组成型表达质粒:pNW-S3和pNW-S4。以磷脂酰丝氨酸合成酶PSS基因为报道基因,以蛋白表达水平评价这两个启动子在变铅青链霉菌TK24中的表达效果。结果表明,在两株组成型表达重组菌中,PSS均得到了高效表达,具有在链霉菌系统中高效表达外源基因的功能,其中PermE*的启动效率略高于PSau3A。 展开更多

关键词 组成型启动子 链霉菌 磷脂酰丝氨酸合成酶

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基于短乳杆菌S层启动子组成型乳酸杆菌表达系统的构建 被引量：4

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作者 李一经 秦思 +4 位作者 唐丽杰 葛俊伟 乔薪瑗 崔文 姜艳平 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期125-130,共6页

以大肠杆菌和乳酸菌穿梭分泌表达型载体pPG612为基本模型,用短乳杆菌S层启动子SlpA替换载体上gusA启动子,并以TGEV N蛋白基因为目基因构建一种乳酸杆菌组成型表达载体,用以检测SlpA启动子在三种不同乳酸杆菌中表达能力。结果表明,该组... 以大肠杆菌和乳酸菌穿梭分泌表达型载体pPG612为基本模型,用短乳杆菌S层启动子SlpA替换载体上gusA启动子,并以TGEV N蛋白基因为目基因构建一种乳酸杆菌组成型表达载体,用以检测SlpA启动子在三种不同乳酸杆菌中表达能力。结果表明,该组成型启动子具有表达外源功能蛋白功能,且具有严格宿主选择性,为进一步利用该载体及组成型启动子进行其他应用奠定了基础。 展开更多

关键词 乳酸杆菌 组成型启动子 启动子活性

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植物基因启动子的类型及其应用 被引量：20

8

作者 胡廷章 罗凯 +1 位作者 甘丽萍 石汝杰 《湖北农业科学》 北大核心 2007年第1期149-151,共3页

不同的植物启动子使植物基因具有不同的表达特性,按其作用方式大体可以分为3类,即组成型启动子、诱导型启动子和组织特异性启动子。另外还有两类较为特殊的启动子——双向启动子和可变启动子。在这些启动子中,除了含有基本启动子外,还... 不同的植物启动子使植物基因具有不同的表达特性,按其作用方式大体可以分为3类,即组成型启动子、诱导型启动子和组织特异性启动子。另外还有两类较为特殊的启动子——双向启动子和可变启动子。在这些启动子中,除了含有基本启动子外,还存在一些特异的顺式调节元件,这些顺式调节元件在基因的特异表达中发挥重要作用。不同类型的启动子在植物基因工程中得到广泛的应用。 展开更多

关键词 组成型启动子 诱导型启动子 组织特异性启动子 双向启动子 可变启动子

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高等植物启动子的研究进展 被引量：56

9

作者 王颖 麦维军 +1 位作者 梁承邺 张明永 《西北植物学报》 CAS CSCD 2003年第11期2040-2046,共7页

启动子是基因表达调控的重要顺式元件,综述了高等植物启动子的构成,包括转录起始位点、TATA框和上游启动子元件。并着重从组成型、组织特异型和诱导型启动子3个方面介绍了其结构特征、功能,以及它们在植物基因工程中的应用和研究进展,... 启动子是基因表达调控的重要顺式元件,综述了高等植物启动子的构成,包括转录起始位点、TATA框和上游启动子元件。并着重从组成型、组织特异型和诱导型启动子3个方面介绍了其结构特征、功能,以及它们在植物基因工程中的应用和研究进展,简述了双向启动子、可变启动子和串联启动子的研究情况,提出植物启动子研究中存在的问题与展望。 展开更多

关键词 启动子 顺式作用元件 组成型启动子 组织特异型启动子 诱导型启动子

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枯草芽孢杆菌表达系统及其启动子研究进展 被引量：39

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作者 余小霞 田健 +1 位作者 刘晓青 伍宁丰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期35-44,共10页

枯草芽孢杆菌作为一种革兰氏阳性细菌,由于其具有非致病性、分泌蛋白能力强的特性和良好的发酵基础及生产技术,是目前原核表达系统中表达和分泌外源蛋白的理想宿主,成为原核表达系统中的一种重要的模式菌株。而实现外源蛋白的高效表达... 枯草芽孢杆菌作为一种革兰氏阳性细菌,由于其具有非致病性、分泌蛋白能力强的特性和良好的发酵基础及生产技术,是目前原核表达系统中表达和分泌外源蛋白的理想宿主,成为原核表达系统中的一种重要的模式菌株。而实现外源蛋白的高效表达的关键因素之一是使用强并可控制的启动子。目前,枯草芽孢杆菌中常用的启动子为组成型、诱导物诱导型、时期特异性及自诱导型。详细介绍枯草芽孢杆菌表达系统以及其常用启动子的优缺点,并对克隆新的启动子的方法做了总结,旨为完善枯草表达系统和工业生产外源蛋白奠定基础。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 表达系统 组成型启动子 诱导型启动子

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高等植物启动子功能和结构研究进展 被引量：29

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作者 夏江东 程在全 +1 位作者 吴渝生 季鹏章 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第1期7-14,共8页

启动子是控制植物基因表达的重要DNA序列结构,文章简述了启动子的定义、分类和启动子的研究策略。并着重从组成型启动子、组织特异型启动子和诱导型启动子3个方面介绍了它们的功能和结构的研究现状。提出了植物基因工程中启动子研究存... 启动子是控制植物基因表达的重要DNA序列结构,文章简述了启动子的定义、分类和启动子的研究策略。并着重从组成型启动子、组织特异型启动子和诱导型启动子3个方面介绍了它们的功能和结构的研究现状。提出了植物基因工程中启动子研究存在的问题与展望。 展开更多

关键词 启动子 组成型启动子 组织特异型启动子 诱导型启动子

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昆虫种群遗传控制技术中启动子的研究 被引量：1

12

作者 刘桂清 严盈 +2 位作者 王玉生 张桂芬 万方浩 《生物安全学报》 2015年第2期115-125,共11页

利用昆虫遗传转化技术对害虫进行遗传控制是害虫防治研究的新方向,该技术具有物种特异、防效高且对环境友好的特点。启动子是基因表达调控的重要元件,选择合适的启动子是外源基因高效、准确表达的关键,对获得高效、稳定的遗传修饰昆虫... 利用昆虫遗传转化技术对害虫进行遗传控制是害虫防治研究的新方向,该技术具有物种特异、防效高且对环境友好的特点。启动子是基因表达调控的重要元件,选择合适的启动子是外源基因高效、准确表达的关键,对获得高效、稳定的遗传修饰昆虫品系至关重要。本文简要介绍了昆虫基因启动子的结构特征,重点描述了昆虫种群遗传防治中组成型启动子、性别和组织特异型启动子、特定发育时期启动子和诱导型启动子的研究和应用概况,并对这几类启动子在害虫遗传控制中的应用前景进行了展望。 展开更多

关键词 遗传防治 昆虫不育技术 遗传转化 组成型启动子 特异性启动子 诱导型启动子

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酿酒酵母组成型表达甜叶菊糖基转移酶UGT76G1及相关性质研究

13

作者 王钰 陈量量 +4 位作者 杜婷 李艳 严明 郝宁 许琳 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第13期162-165,170,共5页

本研究将酿酒酵母穿梭质粒p ESC-Leu的诱导型启动子GAL1和GAL10分别替换为PGK1和TEF1启动子,构建了组成型双启动子表达载体p ESCD,再将甜叶菊糖基转移酶UGT76G1的编码基因亚克隆到p ESCD的Sal I和Xho I酶切位点之间,构建了组成型表达UGT... 本研究将酿酒酵母穿梭质粒p ESC-Leu的诱导型启动子GAL1和GAL10分别替换为PGK1和TEF1启动子,构建了组成型双启动子表达载体p ESCD,再将甜叶菊糖基转移酶UGT76G1的编码基因亚克隆到p ESCD的Sal I和Xho I酶切位点之间,构建了组成型表达UGT76G1的重组质粒p ESCD-UGT。将p ESCD-UGT转化到酿酒酵母YPH499中进行表达,结果确定该重组酵母在SD-L液体培养基培养24h达到稳定期,菌体培养8h蛋白表达量高,选用1%的甲苯作为重组菌全细胞催化的通透剂时,催化15h产生288mg/L的莱鲍迪甙A,其产量是对照组的5倍。 展开更多

关键词 酿酒酵母 组成型启动子 糖基转移酶UGT76G1 全细胞催化 莱鲍迪甙A

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平衡磷酸烯醇式丙酮酸节点通量强化筑波链霉菌合成他克莫司 被引量：1

14

作者 吕蒙蒙 刘蛟 +3 位作者 刘欢欢 陈红 王成 闻建平 《化工进展》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第6期2347-2353,共7页

他克莫司(FK506)是最重要的免疫抑制剂之一,然而前体代谢供应不足制约着工业化生产。通过优化平衡磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)节点支路通量可提高FK506产量。本文首先在S.tsukubaensis D852中过表达基因fkb O(编码分支酸水合还原酶)和fkb L(... 他克莫司(FK506)是最重要的免疫抑制剂之一,然而前体代谢供应不足制约着工业化生产。通过优化平衡磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)节点支路通量可提高FK506产量。本文首先在S.tsukubaensis D852中过表达基因fkb O(编码分支酸水合还原酶)和fkb L(编码赖氨酸环化酶)得到S.tsukubaensis-OL1,FK506的产量仅从158.7mg/L提高到163.9mg/L。随后调节PEP节点支路回补途径和莽草酸途径通量强化FK506的合成:先分别将不同菌株中编码磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PPC)和3-脱氧-D-阿拉伯糖基-heptulosonate-7-磷酸合酶(DAHPS)的基因在S.tsukubaensis-OL1中过表达,FK506的产量分别提高40%(ppc,S.tsukubaensis)和47%(dah P,S.roseosporus);然后采用4个不同强度的组成型启动子(Perm E*,Psco4503,Psco3410 and Psco5768)平衡ppc和dah P的表达水平获得9株工程菌,最终使FK506的产量由163.9mg/L显著提高到350.3mg/L。这个结果说明优化平衡PEP节点竞争支路通量是提高FK506产量的有效策略。 展开更多

关键词 他克莫司 回补途径 莽草酸途径 组成型启动子 筑波链霉菌

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代谢工程改造大肠杆菌增产酪醇 被引量：6

15

作者 曾娇娇 余世琴 周景文 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第22期8-15,共8页

酪醇是橄榄苦苷、红景天苷和羟基酪醇等许多重要价值天然产物的前体物质,建立一个酪醇高产的平台菌株具有重要意义。由于大肠杆菌(Escherichia coli)具有繁殖速度快、易于基因操作等优点,该研究选择E.coli BL21(DE3)作为宿主菌株。通过... 酪醇是橄榄苦苷、红景天苷和羟基酪醇等许多重要价值天然产物的前体物质,建立一个酪醇高产的平台菌株具有重要意义。由于大肠杆菌(Escherichia coli)具有繁殖速度快、易于基因操作等优点,该研究选择E.coli BL21(DE3)作为宿主菌株。通过在质粒pRSFDuet-1中应用组成型启动子P_(cspA)过量表达来自荷兰芹的芳香醛合成酶(aromatic aldehyde synthase,AAS),得到105.97 mg/L酪醇。在敲除苯丙氨酸竞争途径(pheA)、丙酮酸竞争途径(ptsG、crr、pykF)及对羟基苯乙酸(feaB)竞争途径以及解除反馈抑制(tyrR)的菌株中过量表达AAS,获得1055.36 mg/L酪醇。为了进一步强化代谢流,对E.coli来源的乙醇脱氢酶AdhE、AdhP、YahK及FrmA和酿酒酵母来源的Adh6进行了筛选。结果表明,酿酒酵母来源的Adh6表现最佳的脱氢酶活性,产生了1516.86 mg/L酪醇,产量提升了43.73%。基于启动子组合调控策略平衡代谢流,酪醇产量达到1810.46 mg/L,提升了19.40%。最后,对培养基中碳源浓度、氮源浓度以及CaCO_(3)浓度进行优化,得到2120.58 mg/L酪醇,产量提升了17.13%。研究结果为后续采用发酵法生产酪醇和相关的下游产物奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 酪醇 大肠杆菌 代谢工程 组成型启动子 芳香醛合成酶

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解肝磷脂土地杆菌(Pedobacter heparinus)源唾液酸醛缩酶基因的异源表达及其活性研究

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作者 郭娟 曹翠 +2 位作者 李玉泉 刘丽 Josef Voglmeir 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第5期136-143,共8页

为发掘新型唾液酸醛缩酶,使其在大肠杆菌中得到高效表达,本研究首次从菌株Pedobacter heparinus中克隆疑似编码唾液酸醛缩酶的PhNeuLy3300基因片段,并构建可自主表达异源蛋白的组成型表达载体pRSF-EM5。在此基础上将克隆的目的基因分别... 为发掘新型唾液酸醛缩酶,使其在大肠杆菌中得到高效表达,本研究首次从菌株Pedobacter heparinus中克隆疑似编码唾液酸醛缩酶的PhNeuLy3300基因片段,并构建可自主表达异源蛋白的组成型表达载体pRSF-EM5。在此基础上将克隆的目的基因分别导入该pRSF-EM5载体和常用的诱导型载体p ET-30a,构建重组质粒pET30aPhNeuLy3300和pRSF-EM5-PhNeuLy3300,经大肠杆菌表达系统异源表达目的蛋白,并进一步对两种重组蛋白酶进行电泳分析和活性研究。结果表明:编码唾液酸醛缩酶的基因片段全长为945 bp,共编码314个氨基酸残基;聚丙烯酰胺凝胶电泳显示两种重组蛋白表观分子量约为36.4 kDa,纯化后的pET30a-Ph Neu Ly3300重组蛋白浓度为3.29 mg/mL,证明经异源表达获得了两种重组目的蛋白酶;活性研究显示两种重组唾液酸醛缩酶均能在1 h内催化N-乙酰神经氨酸生成N-乙酰甘露糖胺,证明两种重组蛋白酶均具有较高的活性。 展开更多

关键词 唾液酸醛缩酶 诱导型启动子 组成型启动子 大肠杆菌表达 活性鉴定

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农业其它

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1989年第1期81-84,共4页

来自黄绿青霉(Penicillium citreo-vi-ride(HUPC)和微紫青霉(P.janthinellum(HUPj)的酶制剂具有很高的分解纤维活性。

关键词 黄绿青霉 基因表达载体 转座子 报道基因 PENICILLIUM 组成型启动子 根癌土壤杆菌 突变子 定点诱变 大亚基

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