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一种酿酒酵母组成型分泌表达载体的构建及应用
1
作者
王国平
欧阳蓓
+2 位作者
胡紫艳
刘启铃
赵喜华
《江西师范大学学报(自然科学版)》
北大核心
2024年第5期509-513,共5页
该文利用重叠延伸PCR和无缝分子克隆技术构建酿酒酵母组成型分泌表达载体pYAT21,该载体由酿酒酵母组成型分泌表达组件(翻译延伸因子1组成型启动子、α因子N-末端分泌信号肽DNA序列和乙醇脱氢酶2终止子所组成)、2μ复制子、大肠杆菌复制...
该文利用重叠延伸PCR和无缝分子克隆技术构建酿酒酵母组成型分泌表达载体pYAT21,该载体由酿酒酵母组成型分泌表达组件(翻译延伸因子1组成型启动子、α因子N-末端分泌信号肽DNA序列和乙醇脱氢酶2终止子所组成)、2μ复制子、大肠杆菌复制元件以及URA3筛选标记所组成.将草酸青霉16的β-葡萄糖苷酶与pYAT21连接并转化到酿酒酵母中,其发酵上清液粗酶活达到106.8 U·mL^(-1).酿酒酵母组成型分泌表达载体pYAT21可应用于异源蛋白的组成型分泌表达.
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关键词
酿酒酵母
组成型分泌表达
载体
异源蛋白
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职称材料
组成型分泌表达嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶的重组粪肠球菌的构建
2
作者
曾静
袁林
+1 位作者
郭建军
魏国汶
《中国酿造》
CAS
北大核心
2020年第4期67-72,共6页
该研究以高效组成型启动子P10替换pSIP401-gtamyhds中诱导型启动子,构建重组载体pSIP401Z-gtamyhds,并以其为基础框架,分别导入粪肠球菌(Enterococcus faecalis)来源的8种信号肽(s1~s8),采用电转化法将信号肽筛选载体转入具有优良益生...
该研究以高效组成型启动子P10替换pSIP401-gtamyhds中诱导型启动子,构建重组载体pSIP401Z-gtamyhds,并以其为基础框架,分别导入粪肠球菌(Enterococcus faecalis)来源的8种信号肽(s1~s8),采用电转化法将信号肽筛选载体转入具有优良益生特性的粪肠球菌EXW27,构建组成型分泌表达嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的重组粪肠球菌。以发酵上清液中α-淀粉酶活性为评价指标,对8种信号肽进行筛选,并对嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy进行分离纯化和酶学性质研究。结果表明,信号肽s7对嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的分泌效率最高,发酵上清液中α-淀粉酶活性达到310 U/m L。重组Gt-amy的最适反应pH值为5.0,在pH 4.0~8.0范围内具有较好的稳定性,最适反应温度为80℃,于80℃的半衰期为3 h,在40℃条件下反应3 h,对玉米淀粉的降解率可达55.8%。
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关键词
嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy
粪肠球菌
信号肽
组成型分泌表达
酶学性质
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职称材料
题名
一种酿酒酵母组成型分泌表达载体的构建及应用
1
作者
王国平
欧阳蓓
胡紫艳
刘启铃
赵喜华
机构
江西师范大学生命科学学院
出处
《江西师范大学学报(自然科学版)》
北大核心
2024年第5期509-513,共5页
基金
国家自然科学基金(22068014,21666010)资助项目.
文摘
该文利用重叠延伸PCR和无缝分子克隆技术构建酿酒酵母组成型分泌表达载体pYAT21,该载体由酿酒酵母组成型分泌表达组件(翻译延伸因子1组成型启动子、α因子N-末端分泌信号肽DNA序列和乙醇脱氢酶2终止子所组成)、2μ复制子、大肠杆菌复制元件以及URA3筛选标记所组成.将草酸青霉16的β-葡萄糖苷酶与pYAT21连接并转化到酿酒酵母中,其发酵上清液粗酶活达到106.8 U·mL^(-1).酿酒酵母组成型分泌表达载体pYAT21可应用于异源蛋白的组成型分泌表达.
关键词
酿酒酵母
组成型分泌表达
载体
异源蛋白
Keywords
Saccharomyces cerevisiae
constitutive secretory expression vector
heterologous protein
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
组成型分泌表达嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶的重组粪肠球菌的构建
2
作者
曾静
袁林
郭建军
魏国汶
机构
江西省科学院微生物研究所
出处
《中国酿造》
CAS
北大核心
2020年第4期67-72,共6页
基金
国家自然科学基金青年科学基金项目(31501422)
江西省重点研发计划(20171BBF60006)
+1 种基金
江西省科学院项目(2018-JCQN-02
2018-YCXY-02)。
文摘
该研究以高效组成型启动子P10替换pSIP401-gtamyhds中诱导型启动子,构建重组载体pSIP401Z-gtamyhds,并以其为基础框架,分别导入粪肠球菌(Enterococcus faecalis)来源的8种信号肽(s1~s8),采用电转化法将信号肽筛选载体转入具有优良益生特性的粪肠球菌EXW27,构建组成型分泌表达嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的重组粪肠球菌。以发酵上清液中α-淀粉酶活性为评价指标,对8种信号肽进行筛选,并对嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy进行分离纯化和酶学性质研究。结果表明,信号肽s7对嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的分泌效率最高,发酵上清液中α-淀粉酶活性达到310 U/m L。重组Gt-amy的最适反应pH值为5.0,在pH 4.0~8.0范围内具有较好的稳定性,最适反应温度为80℃,于80℃的半衰期为3 h,在40℃条件下反应3 h,对玉米淀粉的降解率可达55.8%。
关键词
嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy
粪肠球菌
信号肽
组成型分泌表达
酶学性质
Keywords
thermoacidiphilic raw starch α-amylase Gt-amy
Entercoccus faecalis
signal peptide
constitutive secretory expression
enzymatic property
分类号
Q814 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
一种酿酒酵母组成型分泌表达载体的构建及应用
王国平
欧阳蓓
胡紫艳
刘启铃
赵喜华
《江西师范大学学报(自然科学版)》
北大核心
2024
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
组成型分泌表达嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶的重组粪肠球菌的构建
曾静
袁林
郭建军
魏国汶
《中国酿造》
CAS
北大核心
2020
0
在线阅读
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职称材料
已选择
0
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