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线粒体载体同源蛋白2通过调控线粒体功能促进CAL-27细胞转移
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作者 郑深 刘辉 +2 位作者 武燃 邓云龙 张强 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第7期1308-1316,共9页
目的:探讨线粒体载体同源蛋白2(mitochondrial carrier homolog 2,MTCH2)对口腔鳞状细胞癌转移的影响及其作用机制。方法:选择人舌鳞癌细胞CAL-27作为研究对象,采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术和过表达质粒构建MTCH2敲... 目的:探讨线粒体载体同源蛋白2(mitochondrial carrier homolog 2,MTCH2)对口腔鳞状细胞癌转移的影响及其作用机制。方法:选择人舌鳞癌细胞CAL-27作为研究对象,采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术和过表达质粒构建MTCH2敲减和过表达模型,按照实验设计将细胞分为siRNA阴性对照(siRNA-NC)组、MTCH2 siRNA(siRNA-MTCH2)组、空载体阴性对照(OE-NC)组和MTCH2过表达(OE-MTCH2)组。应用Transwell实验和细胞划痕实验检测各组细胞侵袭和迁移能力;微丝红色荧光探针检测各组细胞纤维型肌动蛋白(F-actin)的表达情况;线粒体膜电位检测试剂盒检测各组细胞线粒体膜电位水平;活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒检测各组细胞ROS水平;三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)检测试剂盒检测各组细胞ATP生成水平;免疫荧光和Western blot检测各组细胞MTCH2和基质金属蛋白酶14(matrix metalloproteinase 14,MMP14)的蛋白表达水平。结果:siRNA-MTCH2组侵袭细胞数量显著减少,细胞迁移率明显降低,OE-MTCH2组侵袭细胞数量显著增多,细胞迁移率明显升高(P<0.01);siRNA-MTCH2组F-actin和MTCH2荧光强度显著降低,OE-MTCH2组F-actin和MTCH2荧光强度显著升高(P<0.01);siRNA-MTCH2组CAL-27细胞ROS水平较siRNA-NC组显著升高,而ATP和线粒体膜电位水平显著降低,OE-MTCH2组ROS水平较OE-NC组显著降低,ATP和线粒体膜电位水平显著升高(P<0.01);siRNA-MTCH2组CAL-27细胞MTCH2和MMP14蛋白表达水平较siRNA-NC组显著降低,OEMTCH2组MTCH2和MMP14蛋白表达水平较OE-NC组显著升高(P<0.01)。结论:MTCH2可通过调控线粒体功能和MMP14蛋白表达促进CAL-27细胞转移,MTCH2可能作为口腔癌治疗的新靶点。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞癌 线粒体功能障碍 线粒体载体同源蛋白2 细胞侵袭 细胞迁移
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肿瘤相关线粒体蛋白12对肝癌细胞凋亡的抑制作用
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作者 金姝 王俐 +7 位作者 王颖 谢国化 陈惠娟 王树军 张惠珍 张勇 葛瑜 葛海良 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期220-225,共6页
目的:探讨肿瘤相关线粒体蛋白12(TAMP12)对肿瘤细胞凋亡的抑制作用。方法:(1)构建重组逆转录病毒表达载体并转染包装细胞PA317,将获得的病毒颗粒感染TAMP12低表达的肝癌细胞株HepG2。应用RT-PCR检测TAMP12 mRNA表达变化;激光扫描共聚焦... 目的:探讨肿瘤相关线粒体蛋白12(TAMP12)对肿瘤细胞凋亡的抑制作用。方法:(1)构建重组逆转录病毒表达载体并转染包装细胞PA317,将获得的病毒颗粒感染TAMP12低表达的肝癌细胞株HepG2。应用RT-PCR检测TAMP12 mRNA表达变化;激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)观察双色荧光标记蛋白的亚细胞定位和定量表达。(2)应用Hoechst 33258染色和FACS检测5-氟尿嘧啶(5-FU)处理后对诱导HepG2细胞凋亡的影响。结果:(1)CLSM检测显示TAMP12主要表达于HepG2细胞线粒体中。转染细胞中TAMP12基因和蛋白呈稳定高表达。(2)5-FU诱导细胞发生凋亡后,转染细胞的核形态较为完整,但对照细胞的染色质发生凝聚、边缘化、核固缩;且FACS检测显示转染细胞的凋亡率显著低于对照细胞(P<0.05或P<0.01)。结论:TAMP12具有抑制肝癌细胞凋亡的作用。 展开更多
关键词 肿瘤相关线粒体蛋白12 线粒体 逆转录病毒载体 HEPG2细胞 氟尿嘧啶 细胞凋亡
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冰岛硫化叶菌β-1,4-内切葡聚糖酶的同源表达、纯化与性质 被引量:3
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作者 朱泾 赵述淼 +1 位作者 彭楠 梁运祥 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期674-679,共6页
利用PCR技术从冰岛硫化叶菌(Sulfolobus islandicus)REY15A中分别扩增得到带有和不带有信号肽编码序列的β-1,4-内切葡聚糖酶基因(S.islandicus eng),将其克隆至硫化叶菌表达载体pZC2中,构建重组表达载体pZC2-eng-YS和pZC2-eng-WS,并转... 利用PCR技术从冰岛硫化叶菌(Sulfolobus islandicus)REY15A中分别扩增得到带有和不带有信号肽编码序列的β-1,4-内切葡聚糖酶基因(S.islandicus eng),将其克隆至硫化叶菌表达载体pZC2中,构建重组表达载体pZC2-eng-YS和pZC2-eng-WS,并转化至S.islandicus E233S(△pyrEF△lacS)。重组菌株经D-阿拉伯糖诱导后,细胞破碎上清经镍离子金属鳌合亲和层析介质(Ni-NTA)柱纯化,得到重组蛋白。SDS-PAGE结果表明:不带有信号肽的葡聚糖酶(ENG-W)分子质量为41ku,带有信号肽的分子质量(ENG-SP)为43ku;酶学性质分析表明前者没有酶活性,后者酶活力为103.4U/L,最适反应温度为90℃,最适pH为4.0。耐热性试验结果表明:在90℃保温60min后酶活力稳定在最高酶活力的40%以上。金属离子试验结果表明:Mn2+对重组酶促进作用最大,使其酶活力提高了约50%,Ca2+对其抑制作用最强,使其酶活力下降了约50%。 展开更多
关键词 冰岛硫化叶菌 Β-1 4-内切葡聚糖酶 同源表达 硫化叶菌表达载体pZC2 重组蛋白
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卵巢癌中MPC2的表达及其生物学功能 被引量:1
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作者 程润芬 孙保存 +1 位作者 杨海翠 杨烨 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2018年第15期774-779,共6页
目的:检测线粒体丙酮酸载体蛋白2(mitochondrial pyruvate carrier 2,MPC2)在卵巢癌组织中的表达,并分析MPC2在卵巢癌进展过程中可能的生物学功能。方法:利用http://kmplot.com/analysis/数据库分析卵巢癌组织中MPC2 mRNA表达水平与患... 目的:检测线粒体丙酮酸载体蛋白2(mitochondrial pyruvate carrier 2,MPC2)在卵巢癌组织中的表达,并分析MPC2在卵巢癌进展过程中可能的生物学功能。方法:利用http://kmplot.com/analysis/数据库分析卵巢癌组织中MPC2 mRNA表达水平与患者生存预后的关系,收集天津医科大学肿瘤医院2009年至2011年137例卵巢癌组织,采用免疫组织化学方法测定MPC2在卵巢癌组织中的蛋白表达水平,采用SPSS 16.0软件统计分析MPC2蛋白表达水平与卵巢癌患者年龄、临床分期、病理分级、腹水、有无远处转移等临床病理指标之间的关系,分析MPC2蛋白表达水平与患者生存预后的关系。构建MPC2过表达细胞,观察MPC2对细胞生物学功能的影响作用。结果:MPC2 mRNA与卵巢癌患者的总生存期(ovall survival,OS)和无进展生存期(progression free survival,PFS)均存在显著的相关性,MPC2 mRNA低表达的患者预后较差。在卵巢癌组织中MPC2的蛋白表达水平与临床分期、腹水和远处转移有关(P<0.05),MPC2低表达的患者临床分期较高、有腹水产生、出现远处转移,MPC2表达与患者生存预后显著相关,MPC2低表达的患者预后较差(P<0.01)。MPC2过表达可以显著抑制细胞的增殖和迁移能力。结论:MPC2与卵巢癌的恶性进展密切相关,MPC2低表达的卵巢癌患者预后较差,且MPC2可显著抑制卵巢癌细胞的增殖能力,提示MPC2有望成为卵巢癌治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 线粒体丙酮酸载体蛋白2 卵巢癌 临床病理 预后
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NLRP3炎性小体在治疗性浅低温后处理大鼠心肌缺血-再灌注中的作用
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作者 李亚琦 陈祎轩 +1 位作者 张静 余树春 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期178-184,共7页
目的 分析NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体在治疗性浅低温(34℃)后处理的大鼠离体心肌缺血-再灌注模型中的作用并探讨其机制。方法 选择清洁级成年雄性SD大鼠60只,7~10周龄,体重250~300 g。采用随机数字表法将大鼠分为五... 目的 分析NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体在治疗性浅低温(34℃)后处理的大鼠离体心肌缺血-再灌注模型中的作用并探讨其机制。方法 选择清洁级成年雄性SD大鼠60只,7~10周龄,体重250~300 g。采用随机数字表法将大鼠分为五组:空白对照组(S组)、心肌缺血-再灌注组(IR组)、34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注组(MH组)、34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注+3-TYP组(HT组)和34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注+3-TYP+MCC950组(HTM组),每组12只。S组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏180 min;IR组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min, 37℃灌注液再灌注120 min;MH组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min, 34℃灌注液再灌注120 min;HT组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min,在灌注液中加入沉默信息调节因子2同源蛋白3(sirt3)抑制剂3-TYP后行34℃灌注液再灌注120 min;HTM组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min,在灌注液中加入sirt3抑制剂3-TYP和NLRP3抑制剂MCC950后行34℃灌注液再灌注120 min。再灌注120 min后取离体心脏,采用ELISA法测定灌注后心脏漏液中IL-1β、IL-6浓度,Western blot法检测心肌组织中NLRP3和sirt3蛋白相对含量,1%氯化三苯基四氮唑染色计算心肌梗死面积,HE染色观察心肌病理变化。结果 与S组比较,IR组、MH组、HT组和HTM组再灌注30、60、90、120 min时HR明显减慢,LVSP、dp/dt_(max)明显降低,LVEDP明显升高;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比明显升高(P<0.05);IR组、HT组和HTM组心肌组织中sirt3蛋白含量明显降低,NLRP3蛋白含量明显升高(P<0.05);MH组心肌组织中sirt3和NLRP3蛋白含量明显升高(P<0.05)。与IR组比较,MH组和HTM组再灌注30、60、90、120 min时HR明显增快,LVSP、±dp/dt_(max)明显升高,LVEDP明显降低;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比明显降低(P<0.05);MH组心肌组织中sirt3蛋白含量明显升高,NLRP3蛋白含量明显降低(P<0.05);HTM组心肌组织中NLRP3蛋白含量明显降低(P<0.05)。与MH组比较,HT组再灌注30、60、90、120 min时HR明显减慢,LVSP、±dp/dt_(max)明显降低,LVEDP明显升高;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比、心肌组织中NLRP3蛋白含量明显升高(P<0.05);HT组和HTM组心肌组织中sirt3蛋白含量明显降低(P<0.05)。与HT组比较,HTM组再灌注30、60、90、120 min时HR明显增快,LVSP、±dp/dt_(max)明显升高,LVEDP明显降低;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比、心肌组织中NLRP3蛋白含量明显降低(P<0.05)。结论 治疗性浅低温(34℃)可通过改善离体心脏血流动力学参数、降低IL-6、IL-1β浓度、心肌组织中NLRP3蛋白含量、心肌梗死面积百分比、改善心肌病理学改变,减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤,其机制可能与线粒体介导sirt3通路抑制炎性小体NLRP3的高表达有关。 展开更多
关键词 心肌 缺血-再灌注 治疗性浅低温 NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3 沉默信息调节因子2同源蛋白3 炎性小体 线粒体
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