人线粒体转录终止因子2(MTERF2)在Caski宫颈癌细胞的表达和定位 被引量：8

1

作者 孙美涛 张成桂 +4 位作者 梅雯 杨勇琴 杨泽芳 张晓娟 熊伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期783-788,共6页

目的构建人线粒体转录终止因子2(MTERF2)基因真核表达载体,并在人Caski宫颈癌细胞中过表达,观察其编码蛋白质在Caski细胞中的定位。方法从Caski细胞中提取总RNA,采用反转录PCR扩增人MTERF2基因可读框序列,将其重组于p3×FLAG-CMV-1... 目的构建人线粒体转录终止因子2(MTERF2)基因真核表达载体,并在人Caski宫颈癌细胞中过表达,观察其编码蛋白质在Caski细胞中的定位。方法从Caski细胞中提取总RNA,采用反转录PCR扩增人MTERF2基因可读框序列,将其重组于p3×FLAG-CMV-14载体中,利用PCR和DNA测序鉴定重组子正确性;并用脂质体法转染至Caski细胞,转染24、32、48 h,采用Western blot法检测MTERF2蛋白水平,通过免疫荧光细胞化学染色观察其亚细胞定位情况。结果经过PCR和DNA测序鉴定,人MTERF2基因可读框正确地插入到真核表达质粒中,大小为1158 bp,表达的蛋白相对分子质量(Mr)为44 000,与预计大小相符。转染p3×FLAG-MTERF2质粒的Caski细胞培养24 h,可检测到目的蛋白表达,该蛋白主要定位于线粒体中。结论在Caski细胞成功表达了MTERF2蛋白并证实其定位于线粒体。 展开更多

关键词 线粒体转录终止因子2(mterf2) Caski宫颈癌细胞 真核表达 蛋白定位

在线阅读 下载PDF 职称材料

人类核转录因子红细胞系2p45相关因子2和线粒体转录因子A在前列腺癌中的表达及意义 被引量：3

2

作者 韩斌 栾岚 吴斌 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期469-470,473,共3页

目的检测前列腺癌组织标本中人类核转录因子红细胞系2p45相关因子2(Nrf2)、人类线粒体转录因子A(TFAM)的表达,并分析其表达与Gleason评分的关系。方法用免疫组织化学S-P法检测40例前列腺癌组织标本中Nrf2与TFAM的表达,应用Spearman相关... 目的检测前列腺癌组织标本中人类核转录因子红细胞系2p45相关因子2(Nrf2)、人类线粒体转录因子A(TFAM)的表达,并分析其表达与Gleason评分的关系。方法用免疫组织化学S-P法检测40例前列腺癌组织标本中Nrf2与TFAM的表达,应用Spearman相关分析Gleason评分与Nrf2、TFAM表达强度的关系。结果 Nrf2和TFAM的表达与Gleason评分正相关(P值为0.0052,0.0003);Nrf2与TFAM的表达也有相关性(P=0.006)。结论 Nrf2与TFAM是前列腺癌恶性程度的相关因素之一,Nrf2与TFAM很可能通过同一机制参与前列腺癌的发生发展过程。 展开更多

关键词 人类核转录因子红细胞系2p45相关因子2 人类线粒体转录因子A 前列腺癌

在线阅读 下载PDF 职称材料

贵州本地山羊线粒体转录因子B2基因5′调控区SNP筛查与生物信息学分析

3

作者 谢海强 刘若余 +1 位作者 龚俞 焦仁刚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第2期183-188,共6页

试验旨在筛选线粒体转录因子B2(mitochondrial transcription factor B2,TFB2M)基因启动子区SNP,并研究其对启动子功能元件的影响。选择贵州本地优良品种黔北麻羊、贵州白山羊及贵州黑山羊3种山羊构建不同DNA池,直接测序筛选SNP位点。TF... 试验旨在筛选线粒体转录因子B2(mitochondrial transcription factor B2,TFB2M)基因启动子区SNP,并研究其对启动子功能元件的影响。选择贵州本地优良品种黔北麻羊、贵州白山羊及贵州黑山羊3种山羊构建不同DNA池,直接测序筛选SNP位点。TFB2 M基因5′调控区存在4个SNPs位点,分别为:G-601C、C-381A、C-286T和G-283T。生物信息学软件预测得到TFB2 M基因核心启动子区和CpG岛,SNP位点导致附近大量转录因子新位点产生和原来结合位点消失,但并不改变CpG岛大小。TFB2 M基因5′调控区存在4个对启动子功能元件有较大影响的SNPs位点。本研究结果为进一步确定TFB2 M基因启动子功能奠定基础。 展开更多

关键词 线粒体转录因子B2基因 SNP 启动子 黔北麻羊 贵州白山羊 贵州黑山羊

在线阅读 下载PDF 职称材料

贵州白山羊线粒体转录因子B2基因在组织中的表达

4

作者 崔治龙 崔真华 +2 位作者 肖旭东 罗卫星 孙岩岩 《贵州农业科学》 CAS 2015年第9期127-129,共3页

为探明线粒体转录因子B2(TFB2 M)基因在贵州白山羊组织中的表达规律,采用实时荧光定量PCR技术测定TFB2 M基因在贵州白山羊心、肝、脾、垂体和下丘脑组织中的表达量。结果表明:目的基因TFB2 M和内参基因β-actin的熔解曲线均呈单一峰形,... 为探明线粒体转录因子B2(TFB2 M)基因在贵州白山羊组织中的表达规律,采用实时荧光定量PCR技术测定TFB2 M基因在贵州白山羊心、肝、脾、垂体和下丘脑组织中的表达量。结果表明:目的基因TFB2 M和内参基因β-actin的熔解曲线均呈单一峰形,说明所选条件可准确定量TFB2 M基因在贵州白山羊各组织中的相对表达量。TFB2 M基因在贵州白山羊心、肝、脾、垂体和下丘脑组织中的相对表达量分别为1、0.5092、3.9228、1.9138和0.6744,表现为脾>垂体>心>下丘脑>肝。 展开更多

关键词 线粒体转录因子B2 Β-ACTIN 实时荧光定量PCR 贵州白山羊

在线阅读 下载PDF 职称材料

乙酰乙酸通过抑制Nrf2诱导奶牛乳腺上皮细胞线粒体损伤 被引量：1

5

作者 宋倩 高爽 +2 位作者 董昊 徐闯 孙旭东 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第1期41-48,共8页

为探究乙酰乙酸(Acetoacetic acid,ACAC)是否通过抑制核转录因子NF-E2相关因子2(Nuclear factor E2-reate d factor2,Nrf2)导致奶牛乳腺上皮细胞线粒体损伤。在奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)中添加0、0.6、1.2或1.8 mmol·L-1ACAC处理2... 为探究乙酰乙酸(Acetoacetic acid,ACAC)是否通过抑制核转录因子NF-E2相关因子2(Nuclear factor E2-reate d factor2,Nrf2)导致奶牛乳腺上皮细胞线粒体损伤。在奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)中添加0、0.6、1.2或1.8 mmol·L-1ACAC处理24 h;用10μmol·L-1的萝卜硫素(Sulforaphane,SFN)预处理MAC-T 24 h后,加入1.2 mmol·L-1ACAC处理24 h。流式细胞术检测活性氧(Reactive oxygen species,ROS);采用JC-1染色检测线粒体膜电位变化情况;通过q-PCR测定线粒体氧化磷酸化复合物Ⅰ-Ⅴ(Oxidative phosphorylation complexesⅠ-Ⅴ,COⅠ-Ⅴ)的基因表达情况以及线粒体生物合成调节因子Nrf2、过氧化物酶体增殖体激活受体γ-γ活化剂1-α(Peroxlsome proliferator-activated re ceptor-γ coac tlvator-1α,PGC-1α)、线粒体转录因子A (Mitoc hondrial transcription factor A,TFA M)、核呼吸因子-1 (Nuclear respiratory fac tor-1,Nrf1)、线粒体DNA(Mitochondrial DNA,mt DNA);使用试剂盒检测腺嘌呤核苷三磷酸(A denosine triphosphate,ATP)含量。结果显示,ACAC处理后,ROS的含量显著升高(P<0.05),而线粒体膜电位显著下降(P<0.05),并且COⅠ、COⅡ、COⅢ、COⅣ和COⅤ的m RNA表达水平显著降低(P<0.05),PGC-1α、TFAM、Nrf1以及Nrf2的m RNA表达量显著下降(P<0.05),mtDNA含量显著降低(P<0.05),ATP含量显著降低(P<0.05),而SFN预处理缓解了上述影响。结果表明,ACAC通过抑制Nrf2信号通路诱导了MAC-T细胞线粒体损伤。 展开更多

关键词 萝卜硫素 核转录因子E2相关因子2 乙酰乙酸 奶牛乳腺上皮细胞 线粒体损伤

在线阅读 下载PDF 职称材料

线粒体转录因子A在婴儿胆汁淤积性黄疸肝细胞中的表达及其意义 被引量：2

6

作者 刘威 宁禹 +4 位作者 陈思 周婉怡 刘焱 包斌霞 张明满 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期859-865,共7页

目的探讨线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A, mtTFA)在婴儿胆汁淤积性黄疸肝细胞中的表达情况及可能的调控机制。方法收集患儿肝脏标本并统计其临床资料;构建由甘氨鹅脱氧胆酸(glycochenodeoxycholic acid, GCDCA)... 目的探讨线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A, mtTFA)在婴儿胆汁淤积性黄疸肝细胞中的表达情况及可能的调控机制。方法收集患儿肝脏标本并统计其临床资料;构建由甘氨鹅脱氧胆酸(glycochenodeoxycholic acid, GCDCA)诱导的人正常肝细胞(L02)胆汁淤积模型;HE染色检测患儿肝脏的形态学改变;Real-time PCR、qRT-PCR测定患儿肝细胞线粒体DNA(mitochondral DNA, mtDNA)拷贝数和转录水平以及mtTFA和沉默信息调节因子2相关酶类1(silent mating type information regulator 2 homolog 1, SIRT1)通路相关mRNA水平的变化;Western blot测定mtTFA和SIRT1通路相关蛋白水平的变化。结果统计病例资料结果显示,黄疸组肝功较对照组明显下降(P<0.000 1);HE染色结果显示,黄疸组肝细胞形态结构紊乱,胆色素沉积,内见胆汁淤积;Real-time PCR、qRT-PCR结果显示,黄疸组肝细胞mtDNA拷贝数与转录水平显著下降(P<0.01),mtTFA、SIRT1和氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1α, PGC-1α)mRNA水平明显降低(P<0.05);Western blot检测结果显示,黄疸组肝细胞、GCDCA诱导的L02细胞中mtTFA与SIRT1蛋白水平均显著下降(P<0.01),而PGC-1α差异无统计学意义(P>0.05),SRT1720激动SIRT1后mtTFA蛋白的表达较前明显升高(P<0.05)。结论 mtTFA在婴儿胆汁淤积性黄疸肝细胞中的表达显著下降,SIRT1信号通路可能对mtTFA的表达具有调控作用。 展开更多

关键词 婴儿 胆汁淤积 肝细胞 线粒体转录因子A 沉默信息调节因子2相关酶类1

在线阅读 下载PDF 职称材料

Keap1-Nrf2通路与线粒体关系的研究进展 被引量：3

7

作者 袁慎俊 袁琴 陈涛 《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第11期1370-1374,共5页

当机体受到亲电子物质或活性氧刺激时,核转录相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)能诱导出一系列的保护性蛋白,从而抵抗内源性或外源性氧化应激造成的损害。越来越多的研究发现,某些组织比如心脏受到氧化应激... 当机体受到亲电子物质或活性氧刺激时,核转录相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)能诱导出一系列的保护性蛋白,从而抵抗内源性或外源性氧化应激造成的损害。越来越多的研究发现,某些组织比如心脏受到氧化应激时,Nrf2的活性和线粒体生物合成有关。在Surfeit 1蛋白(Surfeit locus protein 1,Surf1)突变的小鼠心脏中发现,由于细胞色素C氧化酶的缺乏导致细胞呼吸减少从而激活Nrf2。本文从Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein-1,Keap1)-Nrf2通路与线粒体的关系以及氧化应激条件下Nrf2信号通路与线粒体之间的信号交联为重点进行了综述。 展开更多

关键词 核转录相关因子2 Keleh样环氧氯丙烷相关蛋白1 线粒体 交联

在线阅读 下载PDF 职称材料

小尾寒羊TFB2M基因遗传变异分析

8

作者 陈晓勇 王薇 +1 位作者 敦伟涛 赵兴波 《现代畜牧兽医》 2016年第2期15-20,共6页

试验旨在分析小尾寒羊线粒体基因转录因子B2(Mitochondrial Transcription Factors B2,TFB2M)基因遗传变异,采集小尾寒羊血液,采用直接测序方法,对该基因8个外显子、5’-UTR和3’-UTR多态位点进行分析。结果发现,编码区错义突变1个(G226... 试验旨在分析小尾寒羊线粒体基因转录因子B2(Mitochondrial Transcription Factors B2,TFB2M)基因遗传变异,采集小尾寒羊血液,采用直接测序方法,对该基因8个外显子、5’-UTR和3’-UTR多态位点进行分析。结果发现,编码区错义突变1个(G226A,GCC→ACC)导致76位苏氨酸变为丙氨酸,5’-UTR发现一处颠换(C58G);3’-UTR有三个突变位点(C98G、A206G和A429T)。生物学软件对启动子和5’-UTR转录因子预测结果显示共有54个转录因子结合位点,5’-UTR 58bp处没有结合位点,因此,该突变并没有改变结合位点。本研究为绵羊TFB2M基因变异及其功能研究奠定了分子生物学基础。 展开更多

关键词 线粒体转录因子B2 小尾寒羊 变异 转录因子

在线阅读 下载PDF 职称材料

线粒体转录复合物相关蛋白原核表达与纯化 被引量：1

9

作者 刘光 杨瑞锋 +1 位作者 石秉炀 刘德培 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期638-643,共6页

目的获取人线粒体转录因子A(TFAM)、线粒体转录因子B1(TFB1M)、线粒体转录因子B2(TFB2M)基因片段,高效表达和纯化带有谷胱甘肽转移酶(GST)标签的GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白。方法设计引物扩增得到TFAM、TFB1M、TFB2M的cDN... 目的获取人线粒体转录因子A(TFAM)、线粒体转录因子B1(TFB1M)、线粒体转录因子B2(TFB2M)基因片段,高效表达和纯化带有谷胱甘肽转移酶(GST)标签的GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白。方法设计引物扩增得到TFAM、TFB1M、TFB2M的cDNA片段,通过引入的酶切位点克隆至表达载体pET42a,构建重组表达载体,并导入E.coliBL21宿主菌中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组的GST融合蛋白,谷胱甘肽琼脂糖珠纯化表达产物,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行分析鉴定。结果获得pET42a-TFAM、pET42a-TFB1M、pET42a-TFB2M表达质粒,测序结果与GenBank的基因序列一致。SDS-PAGE分析结果显示,重组GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白分别在相对分子质量56 000、67 000、69 000处出现特异性蛋白条带,经GST亲和层析纯化后,得到高纯度的融合蛋白。结论成功构建了基因重组体pET42a-TFAM、pET42a-TFB1M、pET42a-TFB2M,制备了GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白。 展开更多

关键词 线粒体转录因子A 线粒体转录因子B1 线粒体转录因子B2 融合蛋白 纯化

在线阅读 下载PDF 职称材料

人呼吸道合胞病毒RNA聚合酶复合体蛋白N、P、L和M2-1重组质粒的构建和鉴定 被引量：1

10

作者 赵秀玲 张梅 +1 位作者 何金生 付远辉 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第8期895-899,共5页

目的构建可表达人呼吸道合胞病毒(RSV)转录延长/终止抑制因子M2-1(简称M2-1)、核蛋白(N)、磷蛋白(P)和大蛋白(L)的真核表达载体并鉴定蛋白表达情况。方法采用合成T7启动子Oligo DNA及PCR方法获得含有T7启动子的表达盒,通过体外连接方法... 目的构建可表达人呼吸道合胞病毒(RSV)转录延长/终止抑制因子M2-1(简称M2-1)、核蛋白(N)、磷蛋白(P)和大蛋白(L)的真核表达载体并鉴定蛋白表达情况。方法采用合成T7启动子Oligo DNA及PCR方法获得含有T7启动子的表达盒,通过体外连接方法克隆入载体px8δT,制备表达载体px8δT-PT。设计3对PCR引物,PCR扩增出RSV的M2-1、N和P基因,并克隆至px8δT-PT,构建px8δT-PT-M2-1、px8δT-PT-N和px8δT-PT-P。同时利用已有的质粒pcDNA3.1-L构建px8δT-PT-L。用重组质粒转染BSR T7/5细胞,72 h后再用Western blot法鉴定蛋白的表达。结果成功实现px8δT的改造,构建的4种重组质粒px8δT-PT-M2-1、px8δT-PT-N、px8δT-PT-P和px8δT-PT-L,经限制性内切酶分析与预期一致,经Western blot法分析证实M2-1、N及P蛋白被表达。结论获得以T7为启动子的表达载体px8δT-P,成功构建了含有M2-1、N及P编码基因的表达载体,为利用反向遗传学技术进一步改造RSV奠定了基础。 展开更多

关键词 人呼吸道合胞病毒 核蛋白 磷蛋白 转录延长/终止抑制因子M2-1 大蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

姜黄素对大鼠大脑皮质缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究 被引量：10

11

作者 刘莉 谭波涛 +1 位作者 李昱 余刚 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期190-194,共5页

目的探讨姜黄素预处理对大鼠大脑局灶性缺血再灌注损伤后皮质梗死区线粒体解偶联蛋白2(UCP2)和线粒体转录因子A(TFAM)表达的影响。方法健康雄性SD大鼠80只,随机均分为假手术组、缺血再灌注(I/R)组、姜黄素高剂量组和低剂量组(简称高、... 目的探讨姜黄素预处理对大鼠大脑局灶性缺血再灌注损伤后皮质梗死区线粒体解偶联蛋白2(UCP2)和线粒体转录因子A(TFAM)表达的影响。方法健康雄性SD大鼠80只,随机均分为假手术组、缺血再灌注(I/R)组、姜黄素高剂量组和低剂量组(简称高、低剂量组)。假手术组仅分离暴露右侧颈总、颈外及颈内动脉,其他3组均建立右侧大脑中动脉阻塞模型,缺血2h再灌注24h后处死大鼠,其中高、低剂量组于缺血前5d连续每天分别经腹腔注射姜黄素100、50mg/kg预处理。采用尼氏染色观察大脑中动脉供应皮质区神经元的损伤情况,电镜观察皮质梗死区神经元内线粒体的形态,免疫组化染色和RT-PCR观察UCP2和TFAM在相应皮质区的表达。结果与假手术组相比,I/R组皮质区神经元水肿,尼氏小体数目减少,神经元内线粒体肿胀,线粒体嵴断裂甚至溶解。缺血前用姜黄素预处理后,神经元丢失及线粒体损伤明显减轻,UCP2和TFAM表达增加(P<0.05),且以高剂量组增加更明显(P<0.05)。结论姜黄素可能通过上调UCP2和TFAM的表达来减轻缺血再灌注引起的神经元损伤,调控线粒体生物合成可能成为姜黄素发挥脑保护作用的新靶点。 展开更多

关键词 姜黄素 解偶联蛋白2 线粒体转录因子A 再灌注损伤

在线阅读 下载PDF 职称材料

人参炔醇对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制 被引量：6

12

作者 蒋丽萍 聂宝明 +3 位作者 卢慧敏 干丽君 陈红专 陆阳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1313-1319,共7页

目的观察人参炔醇(panaxynol,PNN)对大鼠主动脉平滑肌细胞(RASMC)增殖的抑制作用及机制。方法由细胞计数、[3H]TdR参入试验确定细胞增殖率,采用分子探针Fura-3/AM及共聚焦显微镜检测胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i),RT-PCR方法观察线粒体转... 目的观察人参炔醇(panaxynol,PNN)对大鼠主动脉平滑肌细胞(RASMC)增殖的抑制作用及机制。方法由细胞计数、[3H]TdR参入试验确定细胞增殖率,采用分子探针Fura-3/AM及共聚焦显微镜检测胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i),RT-PCR方法观察线粒体转录因子1(m tTF1)mRNA的表达。结果PNN以浓度依赖方式抑制血清及PDGF-BB诱导的RASMC增殖和DNA合成;9μmol.L-1PNN预处理RASMC能抑制PDGF-BB引起的[Ca2+]i升高;PDGF-BB上调RASMC m tTF1 mRNA表达,该作用可被3、9μmol.L-1的PNN抑制。结论PNN具有抗RASMC增殖作用,该作用与降低[Ca2+]i和抑制m tTF1 mRNA表达有关。 展开更多

关键词 人参炔醇 大鼠主动脉平滑肌细胞 细胞增殖 PDGF-BB 胞内游离Ca2+浓度 线粒体转录因子1

在线阅读 下载PDF 职称材料