基于生物信息学分析人类线粒体转录终止因子1基因启动子 被引量：4

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作者 杨勇琴 孙美涛 +3 位作者 李月 王昀 张晓娟 熊伟 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2016年第4期348-353,共6页

目的线粒体转录终止因子1(mitchondrial transcription termination factor 1,MTERF1)编码蛋白质是调控线粒体基因表达和氧化磷酸化的重要因子。文中旨在分析人类MTERF1基因的转录调控序列、转录因子及其结合位点。方法采用进化足迹法,... 目的线粒体转录终止因子1(mitchondrial transcription termination factor 1,MTERF1)编码蛋白质是调控线粒体基因表达和氧化磷酸化的重要因子。文中旨在分析人类MTERF1基因的转录调控序列、转录因子及其结合位点。方法采用进化足迹法,利用生物信息学在线软件对人类MTERF1基因5'端上游的启动子分布、Cp G岛、转录因子及其结合位点进行分析。结果人类MTERF1基因定位于7q21.2,基因全长7845 bp,含有4个外显子和3个内含子。基因上游5'端2500bp的核苷酸序列至少存在2个启动子,其中1878-2447 bp之间可能包含核心启动子。启动子区序列中存在1个长为812 bp的Cp G岛。人类和小鼠MTERF1同源基因存在26个共同的转录因子结合位点。结论生物信息学在线软件能预测人类MTERF1基因启动子和转录因子结合位点,提高了针对该基因启动子的研究效率。 展开更多

关键词 生物信息学 线粒体转录终止因子1 启动子 CP G岛 转录因子

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非小细胞肺癌中人线粒体转录终止因子3蛋白的表达及临床病理学意义 被引量：20

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作者 自加吉 杨勇琴 +3 位作者 孙美涛 梅雯 张晓娟 熊伟 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2017年第2期160-164,共5页

目的人线粒体转录终止因子3(h MTERF3)是线粒体基因表达及氧化磷酸化活性的负调控因子,其在临床肿瘤样本中的表达情况目前少见报道。文中旨在探讨h MTERF3蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中表达及其与临床病理因素之间的关系,揭示h MTERF... 目的人线粒体转录终止因子3(h MTERF3)是线粒体基因表达及氧化磷酸化活性的负调控因子,其在临床肿瘤样本中的表达情况目前少见报道。文中旨在探讨h MTERF3蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中表达及其与临床病理因素之间的关系,揭示h MTERF3的表达在NSCLC中的临床病理学意义。方法实验材料为大理市第一人民医院病理科2008年至2010年存档蜡块,包括65例NSCLC组织和32例癌旁正常肺组织。采用免疫组织化学SP法检测NSCLC组织和癌旁正常肺组织中h MTERF3的表达情况,采用Kaplan-Meier法计算生存率,Cox比例风险模型分析影响NSCLC患者预后的危险因素。结果 65例NSCLC组织中,h MTERF3阳性表达31例(47.69%)。h MTERF3高表达的患者术后生存时间显著低于h MTERF3低表达的患者[(30.09±3.35)月vs(57.61±7.16)月,P<0.05]。h MTERF3阳性表达[HR=3.302,95%CI:1.598~6.905]和淋巴结转移[HR=4.052,95%CI:1.212~12.398]是影响NSCLC患者预后的危险因素。结论 h MTERF3蛋白在NSCLC中的表达水平显著增高,并且h MTERF3阳性表达和淋巴结转移患者生存率会降低。提示h MTERF3可成为肺癌细胞转移的标志物,用于预测NSCLC的预后。 展开更多

关键词 人线粒体转录终止因子3 非小细胞肺癌 免疫组织化学 生存时间

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Balb/c小鼠线粒体转录终止因子3基因克隆及其组织表达分析

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作者 熊伟 王唯斯 +4 位作者 李素芬 自加吉 严长宝 戴莉萍 张若鹏 《动物医学进展》 北大核心 2019年第7期32-38,共7页

旨在获得Balb/c小鼠线粒体转录终止因子3(MTERF3)基因cDNA的序列特征并进行比较分析,揭示该基因的组织特异性表达规律。应用RT-PCR技术克隆Balb/c小鼠MTERF3基因cDNA编码区序列(CDS),采用MEGA6.0软件构建小鼠MTERF3基因系统进化树,并采... 旨在获得Balb/c小鼠线粒体转录终止因子3(MTERF3)基因cDNA的序列特征并进行比较分析,揭示该基因的组织特异性表达规律。应用RT-PCR技术克隆Balb/c小鼠MTERF3基因cDNA编码区序列(CDS),采用MEGA6.0软件构建小鼠MTERF3基因系统进化树,并采用Northern blot、RT-qPCR和Western blot技术研究该基因在小鼠大脑、心、脾、肺、肾、肝、骨骼肌和睾丸等8种不同组织中的特异性表达规律。结果显示,Balb/c小鼠MTERF3基因cDNA的CDS序列大小为1239bp,编码412个氨基酸。小鼠MTERF3基因与大鼠MTERF3基因同源性高达91.1%。MTERF3基因mRNA和蛋白质在Balb/c小鼠各组织中均有不同程度的表达。结果表明,成功克隆了Balb/c小鼠MTERF3基因cDNA的完整编码区序列,并揭示了该基因在各组织器官的表达规律,为进一步研究MTERF3基因在实验动物体内的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 BALB/C小鼠 线粒体转录终止因子3 基因克隆 组织表达

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何氏养巢方通过ERβ/PCG1α/TFAM通路提高颗粒细胞线粒体生物发生以改善早发性卵巢功能不全 被引量：1

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作者 缪晨韵 赵颖 +5 位作者 陈赟 王如烨 任宁 刘青 窦晓兵 章勤 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期358-367,共10页

目的:探究何氏养巢方(简称“养巢方”)提高卵巢颗粒细胞线粒体功能的机制。方法:取36只6~8周龄C57BL/6J雌鼠随机分为空白对照组,模型对照组,养巢方小、中、大剂量组和阳性对照组。均予环磷酰胺90 mg/kg单次腹腔注射以建立原发性卵巢功... 目的:探究何氏养巢方(简称“养巢方”)提高卵巢颗粒细胞线粒体功能的机制。方法:取36只6~8周龄C57BL/6J雌鼠随机分为空白对照组,模型对照组,养巢方小、中、大剂量组和阳性对照组。均予环磷酰胺90 mg/kg单次腹腔注射以建立原发性卵巢功能不全(POI)模型后,分组灌胃21 d后处死。另取6只6~8周龄C57BL/6J雌鼠造模后获取原代颗粒细胞,分为养巢方组、PHTPP(一种雌激素受体阻滞剂)组、养巢方+PHTPP组,分别予养巢方含药血清或PHTPP或同时给予两者干预培养24 h。分别采用苏木精-伊红(HE)染色观察卵巢组织病理学变化;荧光素酶法检测颗粒细胞腺苷三磷酸(ATP)水平;定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测线粒体DNA(mtDNA)的拷贝数;透射电镜观察线粒体结构变化;蛋白质印迹法检测雌激素受体β(ERβ)、过氧化物异酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC1α)、线粒体转录因子A(TFAM)、超氧化物歧化酶2(SOD2)蛋白表达;qRT-PCR检测Erβ、Pgc1α、Tfam、Sod2 mRNA表达。结果:模型对照组卵巢组织次级及三级卵泡较少,养巢方各剂量组及阳性对照组次级及三级卵泡较多。与空白对照组比较,模型对照组颗粒细胞ATP和mtDNA水平均下降(均P<0.01),线粒体嵴消失或空泡化结构异常比例增加,ERβ、PGC1α、TFAM、SOD2蛋白及其mRNA表达均下降(均P<0.01)。养巢方中、大剂量组及阳性对照组颗粒细胞内ATP生成增多、mtDNA拷贝数增加(P<0.05或P<0.01);颗粒细胞内结构异常线粒体减少,ERβ、PGC1α、TFAM、SOD2蛋白及其mRNA表达均增加(P<0.05或P<0.01)。体外实验中,与PHTPP组比较,养巢方+PHTPP组线粒体结构正常比例更高,线粒体ATP含量增加(P<0.05或P<0.01),mtDNA拷贝数增加(P<0.05或P<0.01);ERβ、PGC1α、TFAM、SOD2蛋白及其mRNA表达均上升(P<0.05或P<0.01)。结论:养巢方可以通过ERβ/PGC1α/TFAM通路提高线粒体生物发生从而改善POI小鼠卵巢功能。 展开更多

关键词 早发性卵巢功能不全 何氏养巢方 线粒体 雌激素受体Β 过氧化物异酶体增殖激活受体共激活因子1α 线粒体转录因子A 小鼠

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CCAT1靶向抑制miR-375-3p通过线粒体途径诱导的人口腔癌SAS细胞凋亡

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作者 卢泰青 高振杰 +1 位作者 张炜 施鹏伟 《解剖学杂志》 CAS 2024年第2期114-119,189,共7页

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)靶向miR-375-3p通过线粒体途径诱导人口腔癌SAS细胞凋亡的作用。方法:人口腔癌SAS细胞随机分为空白组、CCAT1下调组、CCAT1上调组、CCAT1下调对照组、CCAT1上调对照组、miR-37... 目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)靶向miR-375-3p通过线粒体途径诱导人口腔癌SAS细胞凋亡的作用。方法:人口腔癌SAS细胞随机分为空白组、CCAT1下调组、CCAT1上调组、CCAT1下调对照组、CCAT1上调对照组、miR-375-3p下调组、miR-375-3p上调组、miR-375-3p下调对照组和miR-375-3p上调对照组。转染48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-375-3p表达、线粒体凋亡通路相关的基因半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3(caspase-3)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶9(caspase-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达;免疫印迹检测caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax蛋白表达;双荧光素酶报告实验分析CCAT1与miR-375-3p的靶向关系。结果:与空白组和CCAT1下调对照组比较,CCAT1下调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低;与空白组和CCAT1上调对照组比,CCAT1上调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA及蛋白表达升高;与空白组和miR-375-3p下调对照组比较,miR-375-3p下调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA及蛋白表达升高;与空白组和miR-375-3p上调对照组比较,miR-375-3p上调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低。双荧光素酶实验结果提示CCAT1可靶向调控miR-375-3p。结论:CCAT1可抑制人口腔癌SAS细胞凋亡,推测是通过靶向抑制miR-375-3p的表达,调控线粒体凋亡通路相关基因及蛋白的表达来实现的。 展开更多

关键词 长链非编码RNA 结肠癌相关转录因子1 miR-375-3p 口腔癌 线粒体途径 凋亡

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哺乳动物线粒体基因组转录及其调控机制 被引量：8

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作者 陈晓勇 敦伟涛 赵兴波 《中国草食动物科学》 CAS 2013年第2期53-58,共6页

线粒体是真核细胞中广泛存在的具有独立基因组的细胞器,其主要功能是为细胞提供能量,同时也是物质代谢的重要场所。近年来,线粒体基因表达调控研究取得了许多重要成果,已经证实转录装置主要包括线粒体转录因子A、RNA聚合酶和线粒体转录... 线粒体是真核细胞中广泛存在的具有独立基因组的细胞器,其主要功能是为细胞提供能量,同时也是物质代谢的重要场所。近年来,线粒体基因表达调控研究取得了许多重要成果,已经证实转录装置主要包括线粒体转录因子A、RNA聚合酶和线粒体转录因子B2。线粒体基因转录受核基因编码蛋白质和线粒体基因(mtDNA)转录元件共同调控,同时mtDNA也影响核基因表达。文章从mtDNA结构和转录过程,转录装置元件、转录终止因子家族、核受体激素及其功能等方面较为系统地论述了mtDNA转录调控的研究进展。 展开更多

关键词 MTDNA 转录 线粒体转录因子A RNA聚合酶 线粒体转录因子B 线粒体转录终止因子

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慢性心力衰竭患者血清TFAM、PGC-1α、NRF-1水平与心功能的相关性

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作者 赵玉 刘耿峰 曹雪 《成都医学院学报》 CAS 2024年第5期806-809,共4页

目的探究慢性心力衰竭(CHF)患者血清线粒体转录因子A(TFAM)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(NRF-1)水平与心功能的相关性。方法选取2022年1月至2023年1月于哈尔滨市第一医院经检查确诊的105例CHF患... 目的探究慢性心力衰竭(CHF)患者血清线粒体转录因子A(TFAM)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(NRF-1)水平与心功能的相关性。方法选取2022年1月至2023年1月于哈尔滨市第一医院经检查确诊的105例CHF患者作为CHF组,根据纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级将CHF组患者分为Ⅰ~Ⅱ级42例、Ⅲ级35例、Ⅳ级28例;选取同期于本院体检的健康检查者105例为对照组,比较两组及CHF组不同心功能分级血清TFAM、PGC-1α、NRF-1水平以及心功能指标。Pearson法分析CHF组患者血清TFAM、PGC-1α、NRF-1水平与心功能指标的关系。结果CHF组患者血清TFAM、PGC-1α、NRF-1水平低于对照组(P<0.05)。CHF组患者左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)水平高于对照组,左室射血分数(LVEF)水平低于对照组(P<0.05)。随着心功能分级(NYHAⅠ~Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级)逐渐升高,CHF组患者血清TFAM、PGC-1α、NRF-1水平逐渐降低(P<0.05);LVEDD、LVESD水平逐渐升高,LVEF水平逐渐降低(P<0.05)。相关性分析显示,LVEF与血清TFAM、PGC-1α、NRF-1水平呈正相关(r=0.474、r=0.461、r=0.513,P<0.05);LVEDD与血清TFAM、PGC-1α、NRF-1水平呈负相关(r=-0.511、r=-0.502、r=-0.475,P<0.05);LVESD与血清TFAM、PGC-1α、NRF-1水平呈负相关(r=-0.497、r=-0.515、r=-0.462,P<0.05)。结论CHF患者血清TFAM、PGC-1α、NRF-1水平降低,且三者与心功能指标密切相关。 展开更多

关键词 慢性心力衰竭 心功能 线粒体转录因子A 过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α 核呼吸因子1

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MTERF家族蛋白质的功能及其在恶性肿瘤发生发展中的作用研究进展

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作者 林亚茹(综述) 余敏 熊伟(审校) 《医学研究与战创伤救治》 北大核心 2025年第2期202-207,共6页

人线粒体转录终止因子(MTERFs)家族成员在调控线粒体功能中发挥重要作用,通过控制线粒体DNA(mtDNA)复制、转录和翻译,甚至参与线粒体核糖体亚基组装和蛋白质合成,影响线粒体代谢和细胞能量产生。先前研究表明,MTERF家族蛋白不仅参与了... 人线粒体转录终止因子(MTERFs)家族成员在调控线粒体功能中发挥重要作用,通过控制线粒体DNA(mtDNA)复制、转录和翻译,甚至参与线粒体核糖体亚基组装和蛋白质合成,影响线粒体代谢和细胞能量产生。先前研究表明,MTERF家族蛋白不仅参与了正常细胞的生理功能,还广泛参与人类恶性肿瘤的发生发展,与肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等生物学行为有关,对肿瘤患者的预后评估和治疗具有重要意义。文章主要从MTERF家族各成员在肿瘤中的功能和作用机制方面进行综述。 展开更多

关键词 线粒体 线粒体转录终止因子 蛋白家族 恶性肿瘤 预后

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人参皂苷Rg1对疲劳小鼠骨骼肌中TFAM和NRF-1基因表达的影响 被引量：9

9

作者 孔凡秀 杨琪 +3 位作者 董佳萍 谢琳琳 王鹤霖 迟晓星 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期67-72,共6页

为了研究人参皂苷Rg1对疲劳模型小鼠抗疲劳作用及骨骼肌中线粒体转录因子A(TFAM)和核呼吸因子-1(NRF-1)基因表达的影响,选取70只雄性BALB/c小鼠随机分为7组,除空白组外,小鼠腹腔注射环磷酰胺,造成免疫低下模型后进行小鼠负重游泳力竭实... 为了研究人参皂苷Rg1对疲劳模型小鼠抗疲劳作用及骨骼肌中线粒体转录因子A(TFAM)和核呼吸因子-1(NRF-1)基因表达的影响,选取70只雄性BALB/c小鼠随机分为7组,除空白组外,小鼠腹腔注射环磷酰胺,造成免疫低下模型后进行小鼠负重游泳力竭实验。ELISA法测定小鼠肝脏及骨骼肌中疲劳相关指标的变化情况,RT-PCR法检测小鼠骨骼肌中TFAM和NRF-1基因表达水平。结果表明,人参皂苷Rg1中剂量组小鼠负重游泳的力竭时间最长,较空白组增加了271.4%,且能显著增加肝糖原浓度。各剂量组小鼠肝脏MDA质量摩尔浓度下降,LDH活性升高。中剂量人参皂苷Rg1可显著增加小鼠骨骼肌中TFAM mRNA和NRF-1 mRNA表达水平。人参皂苷Rg1可有效调节疲劳小鼠骨骼肌中疲劳相关生化指标的水平,具有较好的抗疲劳效果。 展开更多

关键词 人参皂苷RG1 疲劳小鼠 线粒体转录因子A 核呼吸因子-1

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心房颤动患者心房组织AMPK/PGC-1α通路表达改变的研究 被引量：2

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作者 王宇超 刘岳恒 谷天祥 《中国心血管病研究》 CAS 2020年第8期719-723,共5页

目的探讨心房颤动(房颤)患者心房肌组织中AMPK/PGC-1α信号通路表达是否改变,探究该通路在房颤过程中的作用.方法选择2018年12月至2019年11月在我科行心脏手术的患者76例,根据术前24 h动态心电图及病史分为房颤组(41例)和窦性组(35例),... 目的探讨心房颤动(房颤)患者心房肌组织中AMPK/PGC-1α信号通路表达是否改变,探究该通路在房颤过程中的作用.方法选择2018年12月至2019年11月在我科行心脏手术的患者76例,根据术前24 h动态心电图及病史分为房颤组(41例)和窦性组(35例),术中切除左心耳组织留存.使用蛋白质印迹法(western blot,WB)检测心耳组织中AMPK、PGC-1α、NRF1、TFAM的表达量水平.免疫组织化学染色定量左心耳组织TFAM水平.Logistic回归分析AMPK、PGC-1α、NRF1、TFAM的表达水平与术后早期房颤之间的关系.结果WB结果显示,与窦性组相比,房颤组左心耳组织内的AMPK、PGC-1α、NRF1、TFAM的表达明显降低(AMPK:0.75±0.27比0.47±0.43;PGC-1α:0.55±0.10比0.35±0.10;NRF1:0.67±0.11比0.46±0.15;TFAM:0.88±0.19比0.58±0.30;P均<0.05).免疫组化结果显示,房颤组的左心耳TFAM水平较窦性组明显降低(8.86±2.13比5.98±2.53,P<0.05).Logistic回归分析显示,TFAM为术后早期房颤的影响因素(b=-0.55,P<0.05),低水平TFAM会增加术后新发房颤的风险.结论AMPK/PGC-1α信号通路参与了房颤过程,其表达在房颤心患者房内降低.TFAM为术后早期房颤的相关因素,低水平TFAM会增加术后发生房颤的风险. 展开更多

关键词 心房颤动 AMPK/PGC-1α通路 线粒体生物合成 生物标记物 线粒体转录因子A

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肝细胞肝癌组织中TFAM、PDLIM1表达及与患者临床病理特征和预后的关系 被引量：4

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作者 刘永昌 郝志强 +1 位作者 赵玉成 张启文 《山东医药》 CAS 2023年第10期6-10,共5页

目的探究肝细胞肝癌(HCC)组织中线粒体转录因子A(TFAM)和PDZ-Lim结构域蛋白1(PDLIM1)表达及与患者临床病理特征和预后的关系。方法采用免疫组化法检测103例HCC患者癌和癌旁组织中TFAM和PDLIM1蛋白表达。Spearman秩相关分析TFAM和PDLIM1... 目的探究肝细胞肝癌(HCC)组织中线粒体转录因子A(TFAM)和PDZ-Lim结构域蛋白1(PDLIM1)表达及与患者临床病理特征和预后的关系。方法采用免疫组化法检测103例HCC患者癌和癌旁组织中TFAM和PDLIM1蛋白表达。Spearman秩相关分析TFAM和PDLIM1蛋白表达的相关性。比较不同临床病理特征HCC患者TFAM、PDLIM1蛋白表达差异。应用Kaplan-Meier法分析TFAM、PDLIM1蛋白表达与HCC患者预后的关系。利用单因素及多因素Cox比例回归模型分析影响HCC患者预后的因素。结果HCC癌组织中TFAM和PDLIM1蛋白表达阳性率分别为21.36%(22/103)、29.13%(30/103),癌旁组织中TFAM和PDLIM1蛋白表达阳性率分别为76.70%(79/103)、78.64%(81/103),癌组织中TFAM和PDLIM1蛋白表达阳性率低于癌旁组织(χ2分别为63.111、50.811,P均<0.05)。HCC癌组织中TFAM与PDLIM1表达呈正相关(r=0.801,P<0.05)。不同肿瘤最大径、肿瘤TNM分期HCC癌组织中TFAM和PDLIM1蛋白表达阳性率差异有统计学意义(P均<0.05)。TFAM阴性表达者3年累积生存率低于TFAM阳性表达者(P<0.05)。PDLIM1阴性表达者3年累积生存率低于PDLIM1阳性表达者(P<0.05)。肿瘤TNM分期Ⅲ期、肿瘤最大径>3 cm、TFAM阴性表达、PDLIM1阴性表达是影响HCC患者预后的独立危险因素(P均<0.05)。结论HCC癌组织中TFAM、PDLIM1表达降低,二者表达与肿瘤最大径及肿瘤分期有关;TFAM、PDLIM1可能成为新的HCC预后相关肿瘤标志物。 展开更多

关键词 肝细胞肝癌 线粒体转录因子A PDZ-Lim结构域蛋白1 预后

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mTERF基因及其作用研究进展 被引量：1

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作者 刘小林 涂玉莲 陈纪鹏 《湖南农业科学》 2016年第5期125-128,共4页

线粒体转录终止因子mTERF是一类由核基因编码且高度保守的线粒体DNA结合单体蛋白质,对线粒体、叶绿体功能的调控、生物进化、基因诊断与治疗具有重要作用。从mTERF基因与线粒体和叶绿体的关系、mTERF基因的种类和结构和mTERF基因的作用... 线粒体转录终止因子mTERF是一类由核基因编码且高度保守的线粒体DNA结合单体蛋白质,对线粒体、叶绿体功能的调控、生物进化、基因诊断与治疗具有重要作用。从mTERF基因与线粒体和叶绿体的关系、mTERF基因的种类和结构和mTERF基因的作用3个方面综述了动植物中mTERF基因的研究进展。 展开更多

关键词 基因 线粒体转录终止因子 线粒体 叶绿体 功能 综述

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人MTERF3蛋白的原核表达与多克隆抗体制备 被引量：2

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作者 杨勇琴 张成桂 +4 位作者 孙美涛 王昀 杨泽芳 张晓娟 熊伟 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2016年第10期1020-1025,共6页

目的人线粒体转录终止因子3(mitochondrial transcription termination factor 3,MTERF3)是线粒体基因表达及能量代谢的负调控因子。文中旨在研究大肠埃希菌中原核表达MTERF3蛋白及制备鼠抗人MTERF3多克隆抗体。方法RT-PCR扩增人MTERF3... 目的人线粒体转录终止因子3(mitochondrial transcription termination factor 3,MTERF3)是线粒体基因表达及能量代谢的负调控因子。文中旨在研究大肠埃希菌中原核表达MTERF3蛋白及制备鼠抗人MTERF3多克隆抗体。方法RT-PCR扩增人MTERF3基因c DNA的完整开放阅读框,克隆至原核表达载体p ET28b,转化大肠埃希菌感受态细胞BL21(DE3),IPTG诱导6×his融合蛋白质表达,Ni2+-NTA琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化重组人MTERF3蛋白,以纯化的重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠制备其特异性多克隆抗体,用ELISA、Western blot和细胞免疫荧光检测抗体的效价和特异性。结果成功在大肠埃希菌细胞中原核表达重组人MTERF3蛋白,并获得高质量的鼠抗人MTERF3多克隆抗体。ELISA结果显示抗体的效价为1∶105,Western blot和免疫荧光结果显示鼠抗人MTERF3能特异性识别天然的MTERF3抗原。结论原核表达的重组人MTERF3蛋白具有良好的免疫原性,其免疫小鼠后获得的多克隆抗体具有高效价和高度的特异性。人MTERF3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备为进一步研究人MTERF3的功能奠定了实验基础。 展开更多

关键词 人线粒体转录终止因子3 原核表达 纯化 多克隆抗体

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