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华支睾吸虫线粒体苹果酸脱氢酶基因的原核表达及重组蛋白的功能鉴定
被引量：
5
1
作者
徐劲
郑南才
+4 位作者
吴忠道
陈守义
胡旭初
应康
余新炳
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2005年第10期863-866,共4页
目的克隆肝吸虫线粒体苹果酸脱氢酶基因并在大肠杆菌内表达,同时对表达的重组蛋白进行初步的功能分析,为进一步的研究和药物筛选打下基础。方法通过大规模测序从肝吸虫cDNA文库中确定肝吸虫线粒体苹果酸脱氢酶基因,采用PCR方法扩增出目...
目的克隆肝吸虫线粒体苹果酸脱氢酶基因并在大肠杆菌内表达,同时对表达的重组蛋白进行初步的功能分析,为进一步的研究和药物筛选打下基础。方法通过大规模测序从肝吸虫cDNA文库中确定肝吸虫线粒体苹果酸脱氢酶基因,采用PCR方法扩增出目的片段,与表达质粒pGEX-4T-1连接构建重组质粒,IPTG诱导表达;研究重组蛋白的理化性质及酶动力学特征,并寻找可能的抑制剂。结果成功表达出约64 kDa的重组蛋白,凝血酶切后为36 kDa蛋白,其酶活性为63.6U/mg。1.14 mM 4,4′-二甲氨基联苯甲醇处理30 min酶活性下降了60%;吡喹酮、灭滴灵和阿苯哒唑对酶活性无抑制作用;而5’-单磷酸腺苷对重组酶有竞争性抑制作用,其Ki为0.49。结论成功地表达了目的蛋白,为药物筛选提供了一个易于获得的候选蛋白分子。
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关键词
华支睾吸虫
线粒体苹果酸脱氢酶
异源表达
酶
动力学参数
抑制
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职称材料
耐药性癫患者脑组织线粒体mMDHNDUFC_2基因表达异常
被引量：
2
2
作者
刘凤英
王学峰
+9 位作者
龚云
李劲梅
孙纪军
席志芹
吴原
晏勇
奕国明
王玉平
李云林
张建国
《中国神经精神疾病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期27-31,共5页
目的研究耐药性癫患者脑细胞线粒体mMDH、NDUFC2表达,探讨其在耐药性癫癎形成中的作用。方法分别提取48例耐药性癫癎患者、8例非耐药性癫患者及8例对照组脑组织标本的总RNA后,用基因芯片对其进行扫描,随后用荧光定量PCR技术进行验...
目的研究耐药性癫患者脑细胞线粒体mMDH、NDUFC2表达,探讨其在耐药性癫癎形成中的作用。方法分别提取48例耐药性癫癎患者、8例非耐药性癫患者及8例对照组脑组织标本的总RNA后,用基因芯片对其进行扫描,随后用荧光定量PCR技术进行验证。结果发现与线粒体功能有关的基因mMDH、NDUFC2在耐药性癫癎中显著下调,荧光定量RT—PCR验证结果与基因芯片一致。结论脑细胞线粒体基因mMDH、NDUFC2表达异常可能通过能量代谢及神经元坏死参与了耐药性癫癎的形成。
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关键词
耐药性癫痫
线粒体苹果酸脱氢酶
基因芯片
荧光定量RT-PCR
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职称材料
题名
华支睾吸虫线粒体苹果酸脱氢酶基因的原核表达及重组蛋白的功能鉴定
被引量：
5
1
作者
徐劲
郑南才
吴忠道
陈守义
胡旭初
应康
余新炳
机构
中山大学基础医学院病原生物学教研室
复旦大学生命科学院遗传研究所基因工程国家重点实验室
出处
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2005年第10期863-866,共4页
基金
广东省自然科学基金重点项目(NO.036627)
广东省科技计划项目重大专项(NO.2004A300801004)
文摘
目的克隆肝吸虫线粒体苹果酸脱氢酶基因并在大肠杆菌内表达,同时对表达的重组蛋白进行初步的功能分析,为进一步的研究和药物筛选打下基础。方法通过大规模测序从肝吸虫cDNA文库中确定肝吸虫线粒体苹果酸脱氢酶基因,采用PCR方法扩增出目的片段,与表达质粒pGEX-4T-1连接构建重组质粒,IPTG诱导表达;研究重组蛋白的理化性质及酶动力学特征,并寻找可能的抑制剂。结果成功表达出约64 kDa的重组蛋白,凝血酶切后为36 kDa蛋白,其酶活性为63.6U/mg。1.14 mM 4,4′-二甲氨基联苯甲醇处理30 min酶活性下降了60%;吡喹酮、灭滴灵和阿苯哒唑对酶活性无抑制作用;而5’-单磷酸腺苷对重组酶有竞争性抑制作用,其Ki为0.49。结论成功地表达了目的蛋白,为药物筛选提供了一个易于获得的候选蛋白分子。
关键词
华支睾吸虫
线粒体苹果酸脱氢酶
异源表达
酶
动力学参数
抑制
Keywords
Clonorchis sinensis
mitochondrial malate dehydrogenase
heterologous expression
kinetic parameters
inhibition
分类号
R383.2 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
耐药性癫患者脑组织线粒体mMDHNDUFC_2基因表达异常
被引量：
2
2
作者
刘凤英
王学峰
龚云
李劲梅
孙纪军
席志芹
吴原
晏勇
奕国明
王玉平
李云林
张建国
机构
重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆市神经病学重点实验室
首都医科大学天坛医院北京市神经外科研究所
首都医科大学宣武医院
出处
《中国神经精神疾病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期27-31,共5页
文摘
目的研究耐药性癫患者脑细胞线粒体mMDH、NDUFC2表达,探讨其在耐药性癫癎形成中的作用。方法分别提取48例耐药性癫癎患者、8例非耐药性癫患者及8例对照组脑组织标本的总RNA后,用基因芯片对其进行扫描,随后用荧光定量PCR技术进行验证。结果发现与线粒体功能有关的基因mMDH、NDUFC2在耐药性癫癎中显著下调,荧光定量RT—PCR验证结果与基因芯片一致。结论脑细胞线粒体基因mMDH、NDUFC2表达异常可能通过能量代谢及神经元坏死参与了耐药性癫癎的形成。
关键词
耐药性癫痫
线粒体苹果酸脱氢酶
基因芯片
荧光定量RT-PCR
Keywords
Pharmacoresistance epilepsy Mitochondrial malate dehydrogenase Gene chip Real-time reverse transcription polymerase chain reaction
分类号
R742.1 [医药卫生—神经病学与精神病学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
华支睾吸虫线粒体苹果酸脱氢酶基因的原核表达及重组蛋白的功能鉴定
徐劲
郑南才
吴忠道
陈守义
胡旭初
应康
余新炳
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2005
5
在线阅读
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职称材料
2
耐药性癫患者脑组织线粒体mMDHNDUFC_2基因表达异常
刘凤英
王学峰
龚云
李劲梅
孙纪军
席志芹
吴原
晏勇
奕国明
王玉平
李云林
张建国
《中国神经精神疾病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
2
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职称材料
已选择
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