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亚洲带绦虫60S核糖体蛋白L8基因的克隆表达和免疫学分析 被引量:1
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作者 王宇 戴佳琳 +1 位作者 黄江 廖兴江 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期731-733,737,共4页
目的原核克隆表达亚洲带绦虫成虫60S核糖体蛋白L8基因(TaRPL8),探索其应用前景。方法用RT-PCR方法从亚洲带绦虫成虫cDNA中获取RPL8基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE进... 目的原核克隆表达亚洲带绦虫成虫60S核糖体蛋白L8基因(TaRPL8),探索其应用前景。方法用RT-PCR方法从亚洲带绦虫成虫cDNA中获取RPL8基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹进行免疫学分析。结果 PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a(+)-TaRPL8重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠埃希菌BL21/DE3中获得高效表达,亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别但不能够被正常大鼠血清识别,表明其具有免疫原性。结论亚洲带绦虫成虫TaRPL8基因可在大肠埃希菌BL21/DE3中获得具有免疫原性的表达,为进一步的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 亚洲带绦虫 60S核糖体蛋白L8基因 基因克隆 原核表达
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MRP8过表达促进重组酿酒酵母外切纤维素酶生产 被引量:4
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作者 万青青 李洁 +3 位作者 曾钰 张明明 赵心清 白凤武 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期94-100,共7页
增强酿酒酵母纤维素酶分泌能力,为提高利用联合生物加工生产纤维素乙醇的效率提供基础。采用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,在分泌表达外切纤维素酶CBH1的酿酒酵母Y294中过表达线粒体核糖体蛋白基因MRP8。与对照菌株相比,过表达MRP8重组酵... 增强酿酒酵母纤维素酶分泌能力,为提高利用联合生物加工生产纤维素乙醇的效率提供基础。采用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,在分泌表达外切纤维素酶CBH1的酿酒酵母Y294中过表达线粒体核糖体蛋白基因MRP8。与对照菌株相比,过表达MRP8重组酵母的胞外CBH1酶活提高了约80%。实时定量PCR结果分析表明,在MRP8过表达突变体中,CBH1转录水平高于对照菌株,但是与蛋白折叠和分泌相关的关键基因转录水平没有明显变化。在刚果红平板和含有衣霉素或二硫苏糖醇的平板上生长没有受到影响。胞内ATP含量和活性氧积累未发现显著差别。本研究表明MRP8过表达促进外切纤维素酶的生产。 展开更多
关键词 酿酒酵母 异源蛋白表达 外切纤维素酶 线粒体核糖体蛋白基因mrp8 蛋白合成
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色瓦绵羊RPL8基因的组织表达特征及生物信息学分析
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作者 赵旺生 张馨 +5 位作者 李蕊 潘君茹 史明艳 李永青 孙宇 宋天增 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期3369-3377,共9页
【目的】研究色瓦绵羊核糖体蛋白L8基因(RPL8)在各组织部位的表达特征及其潜在功能作用,揭示RPL8基因调控色瓦绵羊产奶质量的分子作用机制,为推进色瓦绵羊的分子遗传育种提供理论依据。【方法】PCR扩增色瓦绵羊RPL8基因,通过ProtParam、... 【目的】研究色瓦绵羊核糖体蛋白L8基因(RPL8)在各组织部位的表达特征及其潜在功能作用,揭示RPL8基因调控色瓦绵羊产奶质量的分子作用机制,为推进色瓦绵羊的分子遗传育种提供理论依据。【方法】PCR扩增色瓦绵羊RPL8基因,通过ProtParam、ProtScale、SignalP 5.0、TMHMM 2.0等在线软件分析RPL8基因结构特征及潜在功能,并以实时荧光定量PCR检测其在色瓦绵羊各组织中的表达分布情况。【结果】RPL8基因在色瓦绵羊乳腺、肌肉、心脏、肾脏、脾脏、肝脏、小肠、瘤胃和卵巢等9个组织中均有表达,在小肠、乳腺和卵巢中的相对表达量极显著高于其他组织中的相对表达量(P<0.01)。色瓦绵羊RPL8基因编码区(CDS)序列长774 bp,共编码257个氨基酸残基;基于RPL8基因核苷酸序列相似性构建的系统发育进化树显示,色瓦绵羊与山羊、牦牛、牛等反刍物种的亲缘关系较近。色瓦绵羊RPL8蛋白相对分子量为28024.66Da,理论等电点(pI)为11.04,是一种稳定的碱性亲水性蛋白,不具有跨膜结构,主要定位于细胞质(占78.3%);色瓦绵羊RPL8蛋白存在15个磷酸化位点[7个丝氨酸(S)位点,8个苏氨酸(T)位点],其二、三级结构中均以无规则卷曲为主。色瓦绵羊RPL8蛋白的互作蛋白均为核糖体蛋白,其同源性高达99.90%,其中,RPS5、RPS16、RPL11、RPS3、RPS18和RPS11属于通用核糖体蛋白家族,RPL13属于真核核糖体蛋白家族。【结论】色瓦绵羊RPL8是一种胞内稳定的碱性亲水性蛋白,具有核糖体蛋白的基本结构特征。RPL8基因在色瓦绵羊各组织中的表达具有普遍性,尤其在乳腺和卵巢中呈高表达,说明RPL8基因除了发挥其家族基本功能作用外,在色瓦绵羊乳腺和卵巢组织中可能还影响乳脂含量与卵泡的周期性发育。 展开更多
关键词 色瓦绵羊 核糖体蛋白 RPL8基因 乳腺 卵巢 组织表达特征
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MRPS5对膀胱癌细胞增殖能力及干性特征的影响 被引量:8
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作者 刘启梁 刘丽梅 +2 位作者 刘春刚 钱程 黄庆愿 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期558-562,共5页
目的探讨线粒体核糖体蛋白S5(mitochondrial ribosomal protein S5,MRPS5)对人膀胱癌细胞的增殖能力及其中干细胞干性特征的影响。方法 Western blot检测人膀胱癌及癌旁正常组织MRPS5的表达;构建靶向干扰MRPS5的慢病毒载体,感染膀胱癌... 目的探讨线粒体核糖体蛋白S5(mitochondrial ribosomal protein S5,MRPS5)对人膀胱癌细胞的增殖能力及其中干细胞干性特征的影响。方法 Western blot检测人膀胱癌及癌旁正常组织MRPS5的表达;构建靶向干扰MRPS5的慢病毒载体,感染膀胱癌细胞株T24,以干扰Scramble序列作为对照,Western blot检测MRPS5干扰效率;细胞活力实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期;细胞成球实验观察成球能力;Western blot检测肿瘤干性转录因子Nanog,Oct4,c-Myc和Sox2的表达;小鼠皮下移植瘤实验观察T24体内成瘤能力。结果 MRPS5在膀胱癌组织中的表达高于癌旁正常组织;慢病毒干扰载体PLKO.1-sh MRPS5有效,且干扰MRPS5表达后T24细胞增殖能力下降(P<0.05),周期阻滞于S期,干性因子表达均下调,成球率无变化(P>0.05)但成球直径明显减小;同时小鼠体内成瘤体积减小[(0.784±0.278)vs(0.500±0.245)cm3,P<0.05],瘤质量减轻[(0.862±0.372)vs(0.412±0.248)g,P<0.05]。结论 MRPS5在膀胱癌中较高表达,且干扰MRPS5表达能抑制T24增殖并抑制T24中的干细胞生物学特征。 展开更多
关键词 膀胱癌 线粒体核糖体蛋白S5(mrpS5) 增殖 肿瘤干细胞
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心脏圆锥动脉干发育相关基因的筛选研究
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作者 刘芳 陈树宝 +3 位作者 刘晓青 顾学范 蒋明华 陈冠仪 《上海第二医科大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第5期478-482,共5页
目的检测剔除心脏神经嵴心脏组织与正常心脏组织之间表达差异基因,筛选心脏圆锥动脉干发育相关基因。方法用电刺激方法建立鸡胚实验模型;用抑制消减杂交法筛选出实验组和对照组心脏组织之间存在的差异表达基因;构建减数杂交文库,用cDNA... 目的检测剔除心脏神经嵴心脏组织与正常心脏组织之间表达差异基因,筛选心脏圆锥动脉干发育相关基因。方法用电刺激方法建立鸡胚实验模型;用抑制消减杂交法筛选出实验组和对照组心脏组织之间存在的差异表达基因;构建减数杂交文库,用cDNA基因芯片技术验证,并进行测序。结果31.8%克隆在实验组表达显著减少。经检验确定13种不同基因片段,有7种与已知鸡基因序列完全匹配,分别为心脏αactin、DEADboxRNA解旋酶、核糖体蛋白L7a、线粒体基因组、GAPDH、肽延长因子-1;有4种基因片段与人、鼠等种属已知基因存在83%~89%的同源性,分别为核糖体蛋白S3、L10a、SNX1、CIRBP等;有2种在公共数据库未查到同源序列。结论有多种基因参与心脏圆锥动脉干胚胎发育;抑制消减杂交和基因芯片技术是筛选差异表达基因的有效方法。 展开更多
关键词 圆锥动脉干 相关基因 筛选 差异表达基因 基因芯片技术 抑制消减杂交法 Α-ACTIN 核糖体蛋白 心脏组织 RNA解旋酶 线粒体基因 基因片段 心脏神经嵴 GAPDH 差异基因 实验模型 方法建立 cDNA 基因序列 延长因子 同源序列
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