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制备高效液相色谱用于纽莫康定杂质B1和B5的纯化 被引量:2
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作者 张洪志 傅青 金郁 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期57-64,共8页
目的开展低含量成分的富集和纯化研究,从Glarea lozoyensis菌体的发酵产物(即纽莫康定B0粗品)中制备出杂质B1和B5,并对其进行结构鉴定。方法建立了基于制备高效液相色谱(prep-HPLC)技术的两步纯化法,第一步使用亲水(HILIC)模式固定相对... 目的开展低含量成分的富集和纯化研究,从Glarea lozoyensis菌体的发酵产物(即纽莫康定B0粗品)中制备出杂质B1和B5,并对其进行结构鉴定。方法建立了基于制备高效液相色谱(prep-HPLC)技术的两步纯化法,第一步使用亲水(HILIC)模式固定相对目标杂质进行富集,第二步采用反相(RPLC)模式固定相对杂质进行制备。得到的两个杂质采用质谱(MS)、核磁(NMR)进行鉴定,确定化合物结构。结果两个杂质为B1和B5,相对分子质量均为1049 Da,色谱纯度分别为97.83%和98.13%。经核磁鉴定,B1为B0的高酪氨酸类似物,B5为B0的鸟氨酸类似物。结论本研究发展的基于prep-HPLC的两步纯化方法为低含量成分制备提供参考,第一步分离实现目标成分富集,第二步利用正交性的色谱柱提高分离选择性,成功制备出杂质B1与B5,有助于B0杂质谱的建立和进一步的质量控制研究。 展开更多
关键词 康定 杂质 制备高效液相色谱 纯化 结构鉴定
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纽莫康定杂质C_(0)的制备研究 被引量:1
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作者 曾凡洲 刘志钰 +3 位作者 朱兵峰 王钦超 张贵民 魏荣省 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期280-288,共9页
目的 为控制纽莫康定B_(0)的质量及为卡泊芬净的杂质传递研究提供物料,本研究对关键杂质纽莫康定C_(0)进行了制备。方法 通过发酵液提取工艺富集、高压液相制备色谱、减压浓缩、冷冻干燥,制备得到纽莫康定C_(0)干粉,并对其进行紫外吸收... 目的 为控制纽莫康定B_(0)的质量及为卡泊芬净的杂质传递研究提供物料,本研究对关键杂质纽莫康定C_(0)进行了制备。方法 通过发酵液提取工艺富集、高压液相制备色谱、减压浓缩、冷冻干燥,制备得到纽莫康定C_(0)干粉,并对其进行紫外吸收光谱、红外吸收光谱、核磁共振、质谱等分析和结构鉴定。结果 得到了色谱纯度99.19%、峰纯度999.4(DAD检测器)、热重3.05%的纽莫康定C_(0)干粉1.7395 g,其结构经过确证为纽莫康定C_(0)。结论 制备得到的纽莫康定C_(0),可作为质量研究对照品和杂质传递研究用物料,并对纽莫康定其他杂质的制备具有重要参考价值。 展开更多
关键词 康定c_(0)制备 高压液相制备色谱 结构确证
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HPLC法同时测定发酵液中纽莫康定A_0与B_0的含量 被引量:4
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作者 张雪霞 李宁 +4 位作者 李晓露 林旸 张金娟 林毅 蒋沁 《化学与生物工程》 CAS 2011年第8期88-90,共3页
采用HPLC方法同时测定发酵液中纽莫康定A0与B0的含量。色谱柱为SepaxSapphire C18(4.6 mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-水(体积比45∶55,内含0.1‰三氟乙酸),流速为1.0 mL.min-1,紫外检测波长为214nm。结果表明,纽莫康定A0与B0的浓... 采用HPLC方法同时测定发酵液中纽莫康定A0与B0的含量。色谱柱为SepaxSapphire C18(4.6 mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-水(体积比45∶55,内含0.1‰三氟乙酸),流速为1.0 mL.min-1,紫外检测波长为214nm。结果表明,纽莫康定A0与B0的浓度分别在47.5~191.4μg.mL-1和38.4~153.6μg.mL-1的范围内,与峰面积呈良好的线性关系(R分别为0.9997和0.9998);检测灵敏度分别为6.86 ng、5.95 ng;平均回收率分别为99.15%(RSD=0.96%,n=9)和99.31%(RSD=0.98%,n=9)。该方法简便、准确、重现性好,可用于发酵液中纽莫康定A0与B0含量的测定。 展开更多
关键词 高效液相色谱法 康定A0 康定B0
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前体物质对Glarea lozoyensis发酵产生纽莫康定B_0的影响(英文) 被引量:4
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作者 方舟 孟慧云 +4 位作者 杨渊 林家富 翟龙飞 褚以文 王欣荣 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 2018年第4期437-443,共7页
纽莫康定B_0是棘白菌素类化合物,其半合成衍生物卡泊芬净已被美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于治疗无效或无法耐受其他抗真菌药的患者的侵袭性曲霉病。然而,通过发酵产生的纽莫康定B_0的效价较低,限制了卡泊芬净的工业生产。本研究... 纽莫康定B_0是棘白菌素类化合物,其半合成衍生物卡泊芬净已被美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于治疗无效或无法耐受其他抗真菌药的患者的侵袭性曲霉病。然而,通过发酵产生的纽莫康定B_0的效价较低,限制了卡泊芬净的工业生产。本研究将优化好的的培养基进行了改良,添加了4种前体物质。研究结果表明,大豆油、亮氨酸、异丁醇和甲硫氨酸显著影响发酵单位;进一步的正交试验结果表明,大豆油(A)对纽莫康定B_0效价的影响极显著(P<0.05),亮氨酸(B)、异丁醇(C)和甲硫氨酸(D)影响次之,最优发酵条件为A2B2C3D2即大豆油6.0g/L,亮氨酸1.0g/L,异丁醇4.0ml/L,甲硫氨酸0.3g/L时,纽莫康定B_0发酵单位达到1295mg/L左右。此外,还应用正交试验验证各因素的显着性。当将kLa作为指导参数,使用A315型叶轮的100L发酵罐进行放大和工业规模生产时,与原始效价相比,纽莫康定B_0产量增加了361%,并达到了2250mg/m L的水平。 展开更多
关键词 康定B0 培养基优化 效价提升 放大生产
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不同冷冻保藏条件对Glarea lozoyensis生长及产纽莫康定B_0能力的影响 被引量:2
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作者 秦婷婷 袁恺 +2 位作者 王晓婷 宋萍 黄和 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第2期47-52,共6页
棘白菌素类化合物纽莫康定B_0生产菌株Glarea lozoyensis,在其连续传代和发酵过程中都观察到菌株的变异,给科研、生产带来极大困扰。因此,采用低温冷冻保藏对G.lozoyensis Q1进行长期保存。采用单因素实验法研究了低温保护剂类型、保藏... 棘白菌素类化合物纽莫康定B_0生产菌株Glarea lozoyensis,在其连续传代和发酵过程中都观察到菌株的变异,给科研、生产带来极大困扰。因此,采用低温冷冻保藏对G.lozoyensis Q1进行长期保存。采用单因素实验法研究了低温保护剂类型、保藏温度以及低温保护剂浓度对G.lozoyensis Q1菌体形态和发酵性能的影响。以作用于全细胞的80 g/L甘油和作用于细胞壁外的200 g/L PEG-6000作为低温保护剂,在-80℃保藏3个月后,纽莫康定B_0产量达到1.6 g/L,与保藏前基本一致。并且,当菌体保藏过后菌丝形态能维持一定褶皱的实验组产量均能保持在1 g/L以上,当表面趋于光滑时产量急剧下降,仅为初始的25%左右。结果表明,以甘油及PEG-6000作为冷冻保护剂,在-80℃条件下可实现G.lozoyensis Q1长期保藏。 展开更多
关键词 Glarea lozoyensis 康定B0 冷冻保藏 菌丝形态
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原生质体诱变筛选高产纽莫康定B_0的菌株 被引量:2
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作者 秦婷婷 冯昆达 +3 位作者 张涛 王晓婷 宋萍 黄和 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期212-217,共6页
目的对产纽莫康定B_0的丝状真菌(Glarea lozoyensis)ATCC 74030进行原生质体制备、再生及常压室温等离子体诱变育种进行研究,选育高产纽莫康定B_0的菌株。方法采用单因素实验法研究了原生质体形成和再生的最佳条件,并将原生质体通过常... 目的对产纽莫康定B_0的丝状真菌(Glarea lozoyensis)ATCC 74030进行原生质体制备、再生及常压室温等离子体诱变育种进行研究,选育高产纽莫康定B_0的菌株。方法采用单因素实验法研究了原生质体形成和再生的最佳条件,并将原生质体通过常压室温等离子体诱变。结果 Glarea lozoyensis原生质体形成和再生的最佳条件为:菌体培养9d,0.6mol/L的葡萄糖溶液作为渗透压稳定剂,采用2%Yatalase+3%溶壁酶+1%蜗牛酶组成的复合酶系,34℃条件下酶解3.5h。经过常压室温等离子体诱变,筛选出的原生质体诱变菌株G.lozoyensis Q1,其产量达1.13g/L,相对出发菌株产量(0.81g/L)提高了39.5%,且连续传代5代遗传稳定。结论常压室温等离子体诱变提高ATCC 74030发酵单位效果明显,实验结果表明突变株G.lozoyensis Q1具有潜在的生产应用价值。 展开更多
关键词 Glarea lozoyensis康定B0 原生质体:突变菌株
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一种纽莫康定B_(0)丝氨酸类似物的分离和结构鉴定 被引量:2
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作者 孙新强 张磊 赵凡 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期756-761,共6页
目的从Zalerion arboricola菌体发酵液制备的纽莫康定B_(0)粗品中,分离纯化纽莫康定B_(0)丝氨酸类似物,并鉴定其化学结构。方法首先用PSN色谱填料进行富集;随后用X_(3)和C_(18)色谱填料进行分离、纯化,得到样品后用质谱、核磁进行检测,... 目的从Zalerion arboricola菌体发酵液制备的纽莫康定B_(0)粗品中,分离纯化纽莫康定B_(0)丝氨酸类似物,并鉴定其化学结构。方法首先用PSN色谱填料进行富集;随后用X_(3)和C_(18)色谱填料进行分离、纯化,得到样品后用质谱、核磁进行检测,并对检测数据进行汇总、分析,鉴定该目标化合物的化学结构。结果经过分离、纯化得到目标化合物样品,进行结构鉴定后确定该化合物为纽莫康定B_(0)丝氨酸类似物,与文献报道的结构一致。结论分离、纯化得到的纽莫康定B_(0)丝氨酸类似物,为进行发酵及纯化工艺优化、质量研究,以及进行结构修饰,筛选活性物质奠定了基础。 展开更多
关键词 康定B_(0) 丝氨酸类似物 分离纯化 结构鉴定
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丝状真菌SIIA-F1108产生抗真菌物质的分离纯化和结构鉴定 被引量:6
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作者 孟慧云 杨渊 +2 位作者 王欣荣 李旭航 翟龙飞 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期901-905,共5页
目的研究丝状真菌SIIA-F1108发酵液中抗真菌的活性成分。方法利用大孔吸附树脂吸附、正相硅胶色谱层析和高压液相制备等技术,结合白念珠菌抑菌实验进行跟踪检测,分离丝状真菌SIIA-F1108的发酵液中的活性组分;通过紫外光谱、红外光谱、... 目的研究丝状真菌SIIA-F1108发酵液中抗真菌的活性成分。方法利用大孔吸附树脂吸附、正相硅胶色谱层析和高压液相制备等技术,结合白念珠菌抑菌实验进行跟踪检测,分离丝状真菌SIIA-F1108的发酵液中的活性组分;通过紫外光谱、红外光谱、高分辨质谱、核磁共振进行分析,确定活性组分的结构。结果分离纯化得到SIIA-C1108A和SIIA-C1108B活性组分,分子式均为C_(50)H_(80)N_8O_(17),与文献报道的纽莫康定(pneumocandin)B_0和C_0同质。结论从丝状真菌SIIA-F1108的发酵液中分离得到的两个具有抗真菌活性物质分别为纽莫康定B_0和C_0,其中纽莫康定B_0作为合成醋酸卡泊芬净的前体物质,具备重要的经济价值。 展开更多
关键词 SIIA-c1108A SIIA-c1108B 康定B0 康定c0 分离 结构鉴定
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