目的:制备兔抗鼠SKA1(Spindle and Kinetochore Associated1)多克隆抗体。方法:利用PCR的方法得到小鼠SKA1基因并克隆至pGEX-2T原核表达载体中,转化入大肠杆菌BL21表达,经IPTG诱导表达GST-SKA1融合蛋白,经亲和层析纯化浓缩后免疫新西兰...目的:制备兔抗鼠SKA1(Spindle and Kinetochore Associated1)多克隆抗体。方法:利用PCR的方法得到小鼠SKA1基因并克隆至pGEX-2T原核表达载体中,转化入大肠杆菌BL21表达,经IPTG诱导表达GST-SKA1融合蛋白,经亲和层析纯化浓缩后免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,通过ELISA测定抗鼠SKA1多克隆抗体效价,用Western blot测定其特异性。结果:构建了pGEX-2T-SKA1原核表达重组质粒,并诱导表达出GST-SKA1融合蛋白,免疫新西兰大耳白兔5周后获得多克隆抗体。ELISA测定表明SKA1多克隆抗体效价为1∶25600,Western blot分析表明SKA1多克隆抗体具有良好的特异性。通过免疫组织化学方法发现,SKA1表达于高分化前列腺癌细胞中。结论:成功地制备了效价及特异性良好的兔抗鼠SKA1多克隆抗体,为SKA1基因功能的研究奠定基础。展开更多
