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免疫沉淀联合质谱筛选与纳尔逊湾正呼肠孤病毒σNS互作的宿主RNA结合蛋白
1
作者
李润林
胡思漫
+4 位作者
骆丽可
贾雪娇
刘梦琦
李永刚
陶晓莉
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2023年第9期1546-1550,共5页
目的筛选出宿主细胞中与纳尔逊湾呼肠孤病毒(NBV)非结构蛋白σNS互作的RNA结合蛋白并分析其生物信息学功能。方法本研究通过构建NBVσNS真核表达载体pEF-HA-MB-S3,验证正确后转染HEK293T细胞,所得的细胞蛋白裂解液经RNase A处理后,利用...
目的筛选出宿主细胞中与纳尔逊湾呼肠孤病毒(NBV)非结构蛋白σNS互作的RNA结合蛋白并分析其生物信息学功能。方法本研究通过构建NBVσNS真核表达载体pEF-HA-MB-S3,验证正确后转染HEK293T细胞,所得的细胞蛋白裂解液经RNase A处理后,利用免疫沉淀富集σNS结合蛋白,经LC-MS/MS质谱分析技术鉴定分析互作蛋白,并且借助相关生信工具挖掘蛋白性质和具体功能。结果本实验成功筛选出32个与NBVσNS蛋白存在互作的候选RNA结合蛋白;生物分析结果显示,这些蛋白主要定位于细胞质与细胞核中,并且主要参与细胞代谢、生物调控、病毒翻译与转录等生物学过程。结论本研究初步分析与NBVσNS互作的RNA结合蛋白功能,为深入研究σNS蛋白在NBV生命周期中的作用机制奠定基础。
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关键词
纳尔逊湾病毒
σNS蛋白
RNA结合蛋白
宿主蛋白
免疫沉淀
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职称材料
纳尔逊湾正呼肠孤病毒非结构蛋白μNS和σNS表达特性的分析
被引量：
1
2
作者
李藤菲
王诗雨
+6 位作者
蒋欣如
孙淼
李婷婷
林家锋
王颖
李永刚
陶晓莉
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第4期934-942,共9页
目的:检测非结构蛋白μNS和σNS之间的相互作用及其结合区域,阐明纳尔逊湾正呼肠孤病毒(NBV)的致病机制。方法:采用Lipo3000转染试剂将pCAG M3和pEFHAσNS质粒分别和共同转染至BHK细胞中,免疫荧光法检测μNS和σNS蛋白在细胞中的定位和...
目的:检测非结构蛋白μNS和σNS之间的相互作用及其结合区域,阐明纳尔逊湾正呼肠孤病毒(NBV)的致病机制。方法:采用Lipo3000转染试剂将pCAG M3和pEFHAσNS质粒分别和共同转染至BHK细胞中,免疫荧光法检测μNS和σNS蛋白在细胞中的定位和分布;用NBV感染BHK细胞,采用Western blotting法检测μNS和σNS蛋白在感染细胞中的表达。构建σNS蛋白N末端10~60个氨基酸(aa)残基缺失的质粒,免疫荧光法检测μNS和σNS蛋白在细胞内共定位的结合区域,酵母双杂交实验验证μNS和σNS蛋白相互作用的结合区域。结果:亚细胞定位显示,NBV的μNS蛋白在无其他病毒蛋白的情况下会形成包涵体结构,而σNS蛋白弥散地分布在整个细胞质中。Western blotting检测证实μNS和σNS蛋白在感染细胞中表达。采用偶联抗体进行免疫染色,共聚焦显微镜下观察到μNS和σNS蛋白共定位于细胞质中。利用酵母双杂交实验检测到与μNS蛋白相互作用的σNS蛋白的基本区域位于σNS蛋白N末端区域的60个aa残基区域内。结论:NBV自噬相关蛋白σNS蛋白可以通过与μNS蛋白相互作用而共同表达于病毒包涵体中,σNS蛋白与μNS蛋白的结合区域位于σNS蛋白N末端的60个aa残基区域内。
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关键词
纳尔逊
湾
正呼肠孤
病毒
蛋白互作
非结构蛋白
免疫荧光法
酵母双杂交实验
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职称材料
题名
免疫沉淀联合质谱筛选与纳尔逊湾正呼肠孤病毒σNS互作的宿主RNA结合蛋白
1
作者
李润林
胡思漫
骆丽可
贾雪娇
刘梦琦
李永刚
陶晓莉
机构
锦州医科大学基础医学院病原生物学教研室
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2023年第9期1546-1550,共5页
基金
辽宁省自然科学基金(编号:2022-BS-320)。
文摘
目的筛选出宿主细胞中与纳尔逊湾呼肠孤病毒(NBV)非结构蛋白σNS互作的RNA结合蛋白并分析其生物信息学功能。方法本研究通过构建NBVσNS真核表达载体pEF-HA-MB-S3,验证正确后转染HEK293T细胞,所得的细胞蛋白裂解液经RNase A处理后,利用免疫沉淀富集σNS结合蛋白,经LC-MS/MS质谱分析技术鉴定分析互作蛋白,并且借助相关生信工具挖掘蛋白性质和具体功能。结果本实验成功筛选出32个与NBVσNS蛋白存在互作的候选RNA结合蛋白;生物分析结果显示,这些蛋白主要定位于细胞质与细胞核中,并且主要参与细胞代谢、生物调控、病毒翻译与转录等生物学过程。结论本研究初步分析与NBVσNS互作的RNA结合蛋白功能,为深入研究σNS蛋白在NBV生命周期中的作用机制奠定基础。
关键词
纳尔逊湾病毒
σNS蛋白
RNA结合蛋白
宿主蛋白
免疫沉淀
Keywords
nelson nay orthoreoviruses
RNA binding proteins
σNS protein
interaction protein
immunoprecipitation
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
纳尔逊湾正呼肠孤病毒非结构蛋白μNS和σNS表达特性的分析
被引量：
1
2
作者
李藤菲
王诗雨
蒋欣如
孙淼
李婷婷
林家锋
王颖
李永刚
陶晓莉
机构
锦州医科大学基础医学院病原生物学教研室
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第4期934-942,共9页
基金
辽宁省教育厅大学生创新训练项目(201910160037)。
文摘
目的:检测非结构蛋白μNS和σNS之间的相互作用及其结合区域,阐明纳尔逊湾正呼肠孤病毒(NBV)的致病机制。方法:采用Lipo3000转染试剂将pCAG M3和pEFHAσNS质粒分别和共同转染至BHK细胞中,免疫荧光法检测μNS和σNS蛋白在细胞中的定位和分布;用NBV感染BHK细胞,采用Western blotting法检测μNS和σNS蛋白在感染细胞中的表达。构建σNS蛋白N末端10~60个氨基酸(aa)残基缺失的质粒,免疫荧光法检测μNS和σNS蛋白在细胞内共定位的结合区域,酵母双杂交实验验证μNS和σNS蛋白相互作用的结合区域。结果:亚细胞定位显示,NBV的μNS蛋白在无其他病毒蛋白的情况下会形成包涵体结构,而σNS蛋白弥散地分布在整个细胞质中。Western blotting检测证实μNS和σNS蛋白在感染细胞中表达。采用偶联抗体进行免疫染色,共聚焦显微镜下观察到μNS和σNS蛋白共定位于细胞质中。利用酵母双杂交实验检测到与μNS蛋白相互作用的σNS蛋白的基本区域位于σNS蛋白N末端区域的60个aa残基区域内。结论:NBV自噬相关蛋白σNS蛋白可以通过与μNS蛋白相互作用而共同表达于病毒包涵体中,σNS蛋白与μNS蛋白的结合区域位于σNS蛋白N末端的60个aa残基区域内。
关键词
纳尔逊
湾
正呼肠孤
病毒
蛋白互作
非结构蛋白
免疫荧光法
酵母双杂交实验
Keywords
Nelson Bay orthoreoviruses
protein interaction
non-structural protein
immunofluorescence
yeast two-hybrid experiment
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
免疫沉淀联合质谱筛选与纳尔逊湾正呼肠孤病毒σNS互作的宿主RNA结合蛋白
李润林
胡思漫
骆丽可
贾雪娇
刘梦琦
李永刚
陶晓莉
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2023
0
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职称材料
2
纳尔逊湾正呼肠孤病毒非结构蛋白μNS和σNS表达特性的分析
李藤菲
王诗雨
蒋欣如
孙淼
李婷婷
林家锋
王颖
李永刚
陶晓莉
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2021
1
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