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副结核分枝杆菌三重TaqMan qPCR检测方法的建立
1
作者
刘添
吴雨伦
+1 位作者
姚火春
潘子豪
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025年第9期4750-4758,共9页
副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis,MAP)是造成反刍动物约翰病的病原,每年给全球畜牧业带来难以估计的经济损失。由于治疗困难,目前对患畜的及时诊断和尽早淘汰是副结核防控的主要手段。MAP的金标准培养检测...
副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis,MAP)是造成反刍动物约翰病的病原,每年给全球畜牧业带来难以估计的经济损失。由于治疗困难,目前对患畜的及时诊断和尽早淘汰是副结核防控的主要手段。MAP的金标准培养检测周期长,而qPCR技术直接检测样本核酸能够快速确定病原,目前广泛应用。本研究旨在针对MAP非插入序列(insertion sequence,IS)靶标建立一种检测MAP的三重TaqMan qPCR方法,能够提高检测的敏感性和特异性。针对MAP基因组中MAP2765c、F57和hspX基因设计引物探针;以本实验室分离的MAP菌株为对照,建立三重qPCR检测体系;临床采集奶肉牛样品181份,和国标(GB/T 27637—2011)进行符合性试验。结果显示,本研究建立的三重qPCR方法灵敏度能达到10 copies·μL^(-1);重复结果变异系数均小于5%;特异性试验中仅MAP核酸出现扩增曲线;标准曲线R2均大于0.999且扩增效率为97%~100%;三重qPCR方法检测临床样品的阳性率为22.65%(41/181),比国标方法高(15.47%),两种方法的检测符合率为76.28%(138/181);根据牧场检测需求对样品进行分类分析:国标方法和三重qPCR方法在“高MAP风险样品”的样品中检出率分别为25%(17/68)和44.12%(30/68),而两种方法检测较低MAP风险样品的阳性率均为9.73%(11/113)。本研究设计的三重qPCR方法,灵敏度、特异性和重复性良好,线性和定量准确性高,且能比国标方法更灵敏地在高MAP风险样品中检出MAP。研究结果为奶牛和肉牛养殖场开展副结核病的监测、预警、控制和净化提供优选方案。
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关键词
约翰病
副结核分枝杆菌
qPCR
三重TaqMan
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职称材料
题名
副结核分枝杆菌三重TaqMan qPCR检测方法的建立
1
作者
刘添
吴雨伦
姚火春
潘子豪
机构
南京农业大学动物医学院
农业农村部动物细菌学重点实验室
世界动物卫生组织猪链球菌病参考实验室
出处
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025年第9期4750-4758,共9页
基金
企业横向课题(HMSY21001)。
文摘
副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis,MAP)是造成反刍动物约翰病的病原,每年给全球畜牧业带来难以估计的经济损失。由于治疗困难,目前对患畜的及时诊断和尽早淘汰是副结核防控的主要手段。MAP的金标准培养检测周期长,而qPCR技术直接检测样本核酸能够快速确定病原,目前广泛应用。本研究旨在针对MAP非插入序列(insertion sequence,IS)靶标建立一种检测MAP的三重TaqMan qPCR方法,能够提高检测的敏感性和特异性。针对MAP基因组中MAP2765c、F57和hspX基因设计引物探针;以本实验室分离的MAP菌株为对照,建立三重qPCR检测体系;临床采集奶肉牛样品181份,和国标(GB/T 27637—2011)进行符合性试验。结果显示,本研究建立的三重qPCR方法灵敏度能达到10 copies·μL^(-1);重复结果变异系数均小于5%;特异性试验中仅MAP核酸出现扩增曲线;标准曲线R2均大于0.999且扩增效率为97%~100%;三重qPCR方法检测临床样品的阳性率为22.65%(41/181),比国标方法高(15.47%),两种方法的检测符合率为76.28%(138/181);根据牧场检测需求对样品进行分类分析:国标方法和三重qPCR方法在“高MAP风险样品”的样品中检出率分别为25%(17/68)和44.12%(30/68),而两种方法检测较低MAP风险样品的阳性率均为9.73%(11/113)。本研究设计的三重qPCR方法,灵敏度、特异性和重复性良好,线性和定量准确性高,且能比国标方法更灵敏地在高MAP风险样品中检出MAP。研究结果为奶牛和肉牛养殖场开展副结核病的监测、预警、控制和净化提供优选方案。
关键词
约翰病
副结核分枝杆菌
qPCR
三重TaqMan
Keywords
Johne’s disease
Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis
qPCR
Triple TaqMan
分类号
S852.618 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
副结核分枝杆菌三重TaqMan qPCR检测方法的建立
刘添
吴雨伦
姚火春
潘子豪
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025
0
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