不同张应力对体外培养的人牙周膜成纤维细胞形态和纤维型肌动蛋白改变的影响 被引量：11

1

作者 彭庭莉 杨军 +1 位作者 周继祥 杨彦春 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期898-900,共3页

目的　研究动态张应力对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)形态和微丝改变的影响,进一步了解HPDLF的应力 生物学效应。方法　利用自行设计的膜式动态张应力 体外细胞培养研究体系对体外分离培养的第6代的HPDLF进行不同应力水平、频... 目的　研究动态张应力对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)形态和微丝改变的影响,进一步了解HPDLF的应力 生物学效应。方法　利用自行设计的膜式动态张应力 体外细胞培养研究体系对体外分离培养的第6代的HPDLF进行不同应力水平、频动范围及时相点的张应力加载,所有样本经FITC Phalloidin免疫荧光染色后,以激光扫描共聚焦显微镜观察加力后不同时间细胞及其肌动蛋白形态的变化特征。结果　动态张应力作用16、2 4h后,部分人牙周膜成纤维细胞出现收缩,F actin排列等方面的变化;3 2h后,变化更明显。5kPa的静态张应力作用后,可引起细胞间隙增大等变化,F actin改变较少。结论　不同张应力可引起体外培养的人牙周膜成纤维细胞的形态和F actin发生了有规律的变化,特别是动态张应力组2 ,在细胞投影面积以及细胞平均荧光强度方面均与加力时间呈正比,微丝随加力时间的延长而逐渐变粗。 展开更多

关键词 人牙周膜成纤维细胞 纤维型肌动蛋白 张应力 激光扫描共聚焦显微镜

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纤维型肌动蛋白对间充质干细胞衰老的调节作用及其机制 被引量：1

2

作者 俞冬升 蔡大敏 +4 位作者 陈婕妤 吕方怡 花扣珍 银国利 王俊娟 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期483-486,693,694,共6页

目的:探讨纤维型肌动蛋白(F-actin)调节人骨髓来源间充质干细胞(hBMSCs)衰老的作用,初步阐明hBMSCs衰老的分子生物学机制。方法:将分离得到的hBMSCs进行体外培养并分为对照组(P2代hBMSCs)、F-actin抑制剂组(2.5μmol·L^(-1) F-acti... 目的:探讨纤维型肌动蛋白(F-actin)调节人骨髓来源间充质干细胞(hBMSCs)衰老的作用,初步阐明hBMSCs衰老的分子生物学机制。方法:将分离得到的hBMSCs进行体外培养并分为对照组(P2代hBMSCs)、F-actin抑制剂组(2.5μmol·L^(-1) F-actin抑制剂Latrunculin B处理P2代hBMSCs 1h)和P11代hBMSCs组(P2代hBMSCs连续传代得到P11代hBMSCs)。成骨、成脂和成软骨诱导液诱导各组hBMSCs,采用茜素红染色、SO染色和油红O染色确定诱导效果。免疫荧光染色观察各组hBMSCs中Ki67阳性细胞数、F-actin的形态和聚合情况、YAP在细胞内的亚细胞定位。SA-β-Gal染色检测各组hBMSCs中SA-β-Gal染色阳性细胞数。结果:茜素红染色、SO染色和油红O染色,hBMSCs具有成骨、成脂和成软骨分化的能力。免疫荧光染色和SA-β-Gal染色,对照组hBMSCs中的微丝纤维束较多较粗,F-actin长度较长,YAP主要集中在细胞核(YAP在细胞核内为活化态);与对照组比较,P11代hBMSCs组中Ki67阳性细胞数较少,SA-β-Gal阳性细胞较多,F-actin更短更细,YAP主要集中在胞浆,且YAP出核的细胞SA-β-Gal染色呈阳性;F-actin抑制剂组hBMSCs中YAP出核失活,SA-β-Gal染色阳性的hBMSCs衰老细胞更多。结论:抑制YAP入核可以促进hBMSCs衰老,F-actin可以通过调节YAP活性影响hBMSCs衰老。 展开更多

关键词 间充质干细胞 纤维型肌动蛋白 YAP蛋白 衰老

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全反式维甲酸对HFL-Ⅰ细胞α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、热休克蛋白47表达的影响 被引量：1

3

作者 刘巨源 李佳鑫 +3 位作者 海广范 陈永凤 夏武 贾岩龙 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期700-704,共5页

目的研究全反式维甲酸(ATRA)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-Ⅰ)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ),热休克蛋白47(HSP47)mRNA和蛋白表达的影响。方法体外培养HFL-Ⅰ细胞,MTT法检测不同浓度TGF... 目的研究全反式维甲酸(ATRA)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-Ⅰ)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ),热休克蛋白47(HSP47)mRNA和蛋白表达的影响。方法体外培养HFL-Ⅰ细胞,MTT法检测不同浓度TGF-β1和ATRA分别作用3 d对HFL-Ⅰ细胞增殖能力的影响。随后分为6组:对照组、5μg·L-1 TGF-β1组、10μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1TGF-β1+0.1μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1 TGF-β1+1μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1 TGF-β1+10μmol·L-1 AT-RA组,RT-PCR和Western blot方法分别检测各实验组细胞中α-SMA,Collagen-Ⅰ,HSP47 mRNA和蛋白的表达。结果①MTT法检测结果显示不同浓度的TGF-β1可刺激HFL-Ⅰ细胞增殖,呈浓度依赖性(P<0.05);不同浓度的ATRA对HFL-Ⅰ细胞增殖能力均有明显抑制作用,并随药物浓度的增加而增强(P<0.05)。②5μg.L-1 TGF-β1诱导后,HFL-Ⅰ细胞中α-SMA,Collagen-I,HSP47 mRNA和蛋白表达均明显上调(P<0.05)。③ATRA以浓度依赖性方式下调经TGF-β1诱导的HFL-Ⅰ细胞中α-SMA,Collagen-I,HSP47 mR-NA和蛋白的表达(P<0.05)。结论 ATRA能够抑制TGF-β1诱导的HFL-Ⅰ细胞的分化,其作用机制可能与降低Col-lagen-I、HSP47表达有关。 展开更多

关键词 肌成纤维细胞 转化生长因子-β1 全反式维甲酸 Α-平滑肌肌动蛋白 I型胶原 热休克蛋白47

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大黄素抑制肺成纤维细胞增殖及转分化和胶原蛋白合成 被引量：9

4

作者 刘理静 尹辉明 +3 位作者 贺兼斌 谢茂峰 王在岩 肖华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期921-925,共5页

目的探讨大黄素对肺成纤维细胞增殖、向肌纤维母细胞转化、胶原合成的影响及相关机制。方法用二甲基亚砜(DMSO)和(0、10、20、40、80、160)μmol/L大黄素处理MRC-5人胚肺成纤维细胞24、48、72 h,采用MTT法检测细胞增殖。根据细胞增殖实... 目的探讨大黄素对肺成纤维细胞增殖、向肌纤维母细胞转化、胶原合成的影响及相关机制。方法用二甲基亚砜(DMSO)和(0、10、20、40、80、160)μmol/L大黄素处理MRC-5人胚肺成纤维细胞24、48、72 h,采用MTT法检测细胞增殖。根据细胞增殖实验结果,以DMSO及(40、80)μmol/L大黄素分别培养MRC-5细胞48 h后,采用荧光实时定量PCR检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、含1型血小板结合蛋白基序的去整合素样金属蛋白酶1(ADAMTS-1)、1型胶原蛋白(Col1)、Col3 mRNA表达水平;Western blot法检测上述分子的蛋白水平。结果 MRC-5细胞增殖抑制率随着大黄素浓度的增加和处理时间的延长而逐渐增高。在处理48 h后,与对照组相比,(40、80)μmol/L大黄素处理组α-SMA、TGF-β1、Col1、Col3 mRNA与蛋白表达水平均降低,而ADAMTS-1 mRNA与蛋白水平升高;与40μmol/L大黄素处理组比较,80μmol/L大黄素处理组α-SMA、TGF-β1、Col1、Col3 mRNA与蛋白表达进一步下调,ADAMTS-1 mRNA与蛋白表达进一步上调。结论大黄素可抑制肺成纤维细胞增殖及其向肌纤维母细胞转化,并通过抑制TGF-β1/ADAMTS-1信号通路减少Col1、Col3合成。 展开更多

关键词 大黄素 肺成纤维细胞 α平滑肌肌动蛋白(α-SMA) 去整合素样金属蛋白酶1(ADAMTS-1) 1型胶原蛋白(Col1) 3型胶原蛋白(Col3)

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中华猕猴桃果仁非饱和脂肪酸通过下调CTGF抑制胶原蛋白合成抗大鼠肺纤维化 被引量：2

5

作者 刘理静 贺立洋 +3 位作者 魏文婕 周美玲 贺彬 贺兼斌 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1011-1017,共7页

目的观察结缔组织生长因子(CTGF)及胶原蛋白合成在果王素(中华猕猴桃果仁非饱和脂肪酸)抗大鼠肺纤维化(PF)中的作用。方法雄性SD大鼠,随机分为对照组、模型组、(60、120、240)mg/kg果王素处理组和5 mg/kg醋酸泼尼松组,每组10只。对照组... 目的观察结缔组织生长因子(CTGF)及胶原蛋白合成在果王素(中华猕猴桃果仁非饱和脂肪酸)抗大鼠肺纤维化(PF)中的作用。方法雄性SD大鼠,随机分为对照组、模型组、(60、120、240)mg/kg果王素处理组和5 mg/kg醋酸泼尼松组,每组10只。对照组大鼠以9 g/L氯化钠溶液气管内注射,后5组大鼠则气管内注射博莱霉素A5构建PF模型,建模后次日,后4组大鼠分别以(60、120、240)mg/kg果王素和5 mg/kg醋酸泼尼松灌胃,而前2组予9 g/L氯化钠溶液灌胃,均每天1次。处理后第28天,处死大鼠取肺组织,HE和Masson染色评价PF病变程度,测定羟脯氨酸(HYP)含量,实时荧光定量PCR检测CTGF、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达,Western blot法测定CTGF、α-SMA、1型胶原蛋白(Col1)、Col3的蛋白水平,免疫组织化学染色分析CTGF表达情况。结果与模型组相比,(60、120、240)mg/kg果王素处理组和5 mg/kg醋酸泼尼松组肺泡炎及PF程度显著减轻,肺组织HYP含量减少,CTGF、α-SMA mRNA与蛋白表达下调,Col1、Col3蛋白水平降低。上述指标的改变在(60、120、240)mg/kg果王素处理组之间有剂量依赖性。此外,(60、120)mg/kg果王素处理组上述指标较5 mg/kg醋酸泼尼松组升高,而240 mg/kg果王素处理组与后者相比差异不明显。结论果王素下调肺组织CTGF表达,降低α-SMA水平,进而减少Col1、Col3合成,发挥抗PF作用。 展开更多

关键词 果王素(中华猕猴桃果仁非饱和脂肪酸) 结缔组织生长因子 肺纤维化 α平滑肌肌动蛋白(α-SMA) 1型胶原蛋白(Col1) 3型胶原蛋白(Col3)

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上调miR-21表达促进肺成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成 被引量：20

6

作者 刘理静 钱红 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期918-922,共5页

目的探讨miR-21在肺纤维化小鼠肺组织中的表达及其在肺成纤维细胞增殖、转分化、胶原蛋白合成中的作用。方法将30只C57BL／6小鼠随机分为对照组（n=5）和模型组（n=25）。经气管内注入博莱霉素A5建立肺纤维化模型，分别于第3、7、14、28... 目的探讨miR-21在肺纤维化小鼠肺组织中的表达及其在肺成纤维细胞增殖、转分化、胶原蛋白合成中的作用。方法将30只C57BL／6小鼠随机分为对照组（n=5）和模型组（n=25）。经气管内注入博莱霉素A5建立肺纤维化模型，分别于第3、7、14、28、56天随机处死5只小鼠，而对照组于第56天全部处死作为总体对照，采用荧光实时定量PCR测定肺组织中miR-21表达。另外，NIH3T3肺成纤维细胞分别予Lipofectamine^TM 2000转染试剂（空白对照组）以及miR-21阴性对照物、模拟物、抑制物处理，通过MTY法检测细胞增殖能力，应用荧光实时定量PCR和Western blot法分别检测d平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、含1型血小板结合蛋白基序的去整合素和金属蛋白酶1（ADAMTS-1）、1型胶原蛋白（Coll）、3型胶原蛋白（C013）mRNA与蛋白表达情况。结果模型组第7～56天，肺组织中miR-21表达水平明显高于对照组，第28天达到高峰。在共同培养24、48、72、96h后，miR-21模拟物组细胞活力较空白对照组增加，而miR-21抑制物组细胞活力较空白对照组降低。与空白对照组比较，miR-21模拟物组α-SMA、Coll、CoBmRNA与蛋白表达水平升高，ADAMTS-1 mRNA与蛋白表达水平减少；然而miR-21抑制物组α-SMA、Coll、Co13 mRNA与蛋白表达水平下降，ADAMTS-1 mRNA与蛋白表达水平上升。阴性对照组上述指标与空白对照组比较，无显著性差异。结论miR-21在肺纤维化小鼠肺组织中表达上调，miR-21高表达可促进肺成纤维细胞增殖、转分化以及胶原蛋白的合成。 展开更多

关键词 MIR-21 肺纤维化 Α平滑肌肌动蛋白 ADAMTS-1 1型胶原蛋白 3型胶原蛋白

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冠蛋白1参与分枝菌酸诱导巨噬细胞的泡沫化 被引量：1

7

作者 周芳妮 陈全 +2 位作者 周静瑶 刘革力 张路渝 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期451-456,共6页

目的研究巨噬细胞冠蛋白1(coronin-1)与分枝菌酸(MA)诱导巨噬细胞泡沫化的相关性及其可能机制。方法根据冠蛋白1表达水平的差异,实验分为RAW264.7-Cor.Plus、RAW264.7和RAW264.7-Cor.Minus三组。各组细胞经100μg/m L MA包被的聚苯乙烯... 目的研究巨噬细胞冠蛋白1(coronin-1)与分枝菌酸(MA)诱导巨噬细胞泡沫化的相关性及其可能机制。方法根据冠蛋白1表达水平的差异,实验分为RAW264.7-Cor.Plus、RAW264.7和RAW264.7-Cor.Minus三组。各组细胞经100μg/m L MA包被的聚苯乙烯微球作用24 h后提取总蛋白,用Western blot法检测细胞冠蛋白1的表达水平。分别用(0、25、50、75、100)μg/m L MA包被聚苯乙烯微球作为吞噬颗粒,在2μmol/L松胞菌素D(cty D)处理前、后,分别吞噬24 h^8 d,用总胆固醇(TC)酶法测定试剂盒、游离胆固醇(FC)酶法测定试剂盒分别检测各组细胞TC、FC,再通过胆固醇酯(CE)和CE/TC比值定量评估巨噬细胞泡沫化水平。将cty D处理细胞(RAW264.7-cty D、RAW264.7-cty D-MA)及其对照组分别用异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽(FITC-phalloidin)染色,计算纤维型肌动蛋白(F-actin)重排率。结果各组细胞受MA诱导后,其冠蛋白1的表达量显著高于相应对照组,其表达量从高至低依次为RAW264.7-Cor.Plus、RAW264.7、RAW264.7-Cor.Minus。表达不同水平冠蛋白1的各组细胞的泡沫化水平与MA包被剂量和MA作用时间呈正比;冠蛋白1表达量最高的RAW264.7-Cor.Plus细胞泡沫化水平最高,冠蛋白1表达量最低的RAW264.7-Cor.Minus细胞泡沫化水平最低;cty D抑制巨噬细胞F-actin显著降低MA诱导的细胞泡沫化水平,但抑制F-actin对冠蛋白1与MA诱导细胞泡沫化的正相关性并无显著影响;经鬼笔环肽染色后,MA诱导组细胞的F-actin重排率显著高于非MA诱导的对照组细胞。结论 MA可诱导巨噬细胞冠蛋白1的表达,其表达水平与MA诱导的细胞泡沫化呈正相关,F-actin参与MA诱导的细胞泡沫化过程,但F-actin并非冠蛋白1调控MA诱导细胞泡沫化的关键和唯一途径。 展开更多

关键词 巨噬细胞 冠蛋白1(coronin-1) 分枝菌酸 泡沫细胞 纤维型肌动蛋白(f-actin)

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水飞蓟素对肝纤维化小鼠的保护作用及机制探讨 被引量：18

8

作者 曹力波 李兵 +4 位作者 李佐军 黄娟娟 欧阳林旗 黄瀚 刘世坤 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期794-796,共3页

目的探讨水飞蓟素抗CCl4和酒精所致肝纤维化的作用和机制。方法50只♂昆明小鼠随机分为5组,模型组小鼠皮下注射CCl4并饮用酒精制造肝纤维化模型,治疗组以低、中、高3种不同浓度(50、100、200mg.kg-1)的水飞蓟素灌胃进行干预,正常组小鼠... 目的探讨水飞蓟素抗CCl4和酒精所致肝纤维化的作用和机制。方法50只♂昆明小鼠随机分为5组,模型组小鼠皮下注射CCl4并饮用酒精制造肝纤维化模型,治疗组以低、中、高3种不同浓度(50、100、200mg.kg-1)的水飞蓟素灌胃进行干预,正常组小鼠皮下注射等量植物油并用生理盐水灌胃。通过检测血清AST、ALT水平、肝脏病理组织学变化、肝脏组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原(collagen-Ⅰ)mRNA表达水平观察水飞蓟素的疗效。结果成功建立肝纤维化模型,模型组小鼠血清AST、ALT,肝脏组织TGF-β1、α-SMA及collagen-ⅠmR-NA表达水平增高,水飞蓟素可降低血清AST、ALT水平,降低肝组织TGF-β1、α-SMA及collagen-ⅠmRNA的表达,减轻肝纤维化程度,中剂量(100mg.kg-1)疗效最好。结论水飞蓟素对酒精和CCl4所致的肝脏损伤有明显保护作用,其机制可能与降低TGF-β1mRNA的表达、抑制肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)活化有关。 展开更多

关键词 肝纤维化 水飞蓟素 转化生长因子-Β1 Α-肌动蛋白 Ⅰ型胶原

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雷公藤内酯醇减少放射性肺纤维化中肌成纤维细胞活化与抑制TGF-β1/ERK/Smad3通路相关 被引量：24

9

作者 张彦伟 张志强 +2 位作者 吴丽贤 张鲁榕 陈纯 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期630-636,共7页

目的通过体内外实验,观察雷公藤内酯醇(TPL)减少放射性肺纤维化中肌成纤维细胞(MFBs)活化与TGF-β1/ERK/Smad3通路的相关性。方法以TGF-β1刺激成纤维细胞建立体外MFBs活化模型,C57BL/6小鼠胸部照射形成体内MFBs活化、放射性肺纤维化模... 目的通过体内外实验,观察雷公藤内酯醇(TPL)减少放射性肺纤维化中肌成纤维细胞(MFBs)活化与TGF-β1/ERK/Smad3通路的相关性。方法以TGF-β1刺激成纤维细胞建立体外MFBs活化模型,C57BL/6小鼠胸部照射形成体内MFBs活化、放射性肺纤维化模型。MFBs活化状态通过检测小鼠成纤维细胞中α-SMA(RT-PCR、Western blot方法)和ColⅠ(RT-PCR、ELISA方法)的表达,通路活性采用Western blot法检测p-ERK、p-Smad3(Ser208)、p-Smad3(Ser423)的水平。ERK siRNA及Smad3 siRNA观察ERK、Smad3在MFBs活化中的地位。结果 TGF-β1激活p-ERK/p-Smad3(Ser208)及p-Smad3(Ser423),诱导成纤维细胞表达α-SMA,活化为MFBs,合成Col I明显增多;使用ERK siRNA及Smad3 siRNA确定了ERK及Smad3均参与α-SMA、ColⅠ的表达,其中ERK可能通过磷酸化Smad3连接区(Ser208)起相关作用。小鼠胸部照射可致肺组织中p-ERK、p-Smad3(Ser208)、p-Smad3(Ser423)的水平上调,α-SMA表达增加,显示多量MFBs活化。TPL对体内和体外实验中ERK、Smad3(Ser208)、Smad3(Ser423)的磷酸化活化均有明显抑制作用,可明显下调α-SMA表达及ColⅠ合成,减少MFBs的活化。结论 TPL可通过抑制TGF-β1/ERK/Smad3通路,减少肺部照射后MFBs活化,从而抑制放射性肺纤维化进展。 展开更多

关键词 雷公藤内酯醇 放射性肺纤维化 肌成纤维细胞 Α-平滑肌肌动蛋白 Ⅰ型胶原蛋白 转化生长因子β1 ERK SMAD3

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过表达LncRNA GAS5对SD大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的影响 被引量：8

10

作者 张家贵 陶辉 +4 位作者 施鹏 陈泽文 曹炜 占红英 石开虎 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第3期328-332,共5页

目的应用长链非编码RNA GAS5(LncRNA GAS5)过表达质粒(pEGFP-C1-GAS5)转染SD大鼠心肌成纤维细胞,观察其对心肌成纤维细胞活化增殖的影响。方法提取SD大鼠心肌成纤维细胞,转化生长因子β1(TGF-β1)刺激其增殖,分为pEGFP-C1-GAS5组、阴性... 目的应用长链非编码RNA GAS5(LncRNA GAS5)过表达质粒(pEGFP-C1-GAS5)转染SD大鼠心肌成纤维细胞,观察其对心肌成纤维细胞活化增殖的影响。方法提取SD大鼠心肌成纤维细胞,转化生长因子β1(TGF-β1)刺激其增殖,分为pEGFP-C1-GAS5组、阴性对照组和空白对照组,应用LncRNA GAS5基因的过表达质粒(pEGFP-C1-GAS5)通过脂质体瞬时转染细胞,48 h后收获细胞。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测GAS5、Ⅰ型胶原前胶原(Col1A1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达,Western blot分析Col1A1和α-SMA蛋白表达变化,MTT法检测细胞增殖活力。结果 TGF-β1刺激心肌成纤维细胞后,qRT-PCR结果显示LncRNA GAS5的表达量较正常组下降(P<0.05);与阴性对照组和空白对照组比较,转染了pEG-FP-C1-GAS5的实验组,qRT-PCR结果显示实验组的GAS5表达均明显升高(P<0.05),同时α-SMA和Col1A1 mRNA表达显著降低(P<0.05);Western blot结果显示转染pEG-FP-C1-GAS5的实验组α-SMA和Col1A1蛋白表达量均明显降低(P<0.05);MTT法检测结果表明在实验组心肌成纤维细胞的增殖活力低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论过表达LncRNA GAS5可显著降低心肌成纤维细胞的增殖活力,提示GAS5有抑制心肌成纤维细胞的活化增殖的作用,为以后进一步研究提供依据。 展开更多

关键词 LncRNA GAS5 心肌成纤维细胞 Α-平滑肌肌动蛋白 Ⅰ型胶原前胶原

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疏肝健脾方醇水双提物对CCl4诱导的肝纤维化大鼠的保护作用 被引量：10

11

作者 秦秀娟 高家荣 +3 位作者 姜辉 陈金锋 王婷 张婷 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1646-1651,共6页

目的探讨疏肝健脾方(柴胡、黄芪、白芍、白术等)醇水双提物对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的保护作用。方法除正常组外,其余各组采用皮下注射50%四氯化碳,每周2次,持续12周,复制肝纤维化大鼠模型。造模后第7周,分别灌胃给予疏肝健脾方醇水... 目的探讨疏肝健脾方(柴胡、黄芪、白芍、白术等)醇水双提物对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的保护作用。方法除正常组外,其余各组采用皮下注射50%四氯化碳,每周2次,持续12周,复制肝纤维化大鼠模型。造模后第7周,分别灌胃给予疏肝健脾方醇水双提物(1.5、3.0、6.0 g/kg)剂量组和阳性药秋水仙碱组,每天1次,连续6周。实验结束后,Masson染色观察肝脏组织胶原沉积;放射免疫法检测血清中透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层黏蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型前胶原肽(procollagen-Ⅲ-peptide,PⅢNP)、Ⅳ型胶原(collagen typeⅣ,Ⅳ-C)的水平;免疫组化染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,COL-Ⅰ)的表达。结果与模型组比较,疏肝健脾方醇水双提物不仅可减轻胶原纤维的沉积,改善肝纤维化损伤程度,还可显著降低血清中透明质酸、层粘蛋白、Ⅲ型前胶原肽、Ⅳ型胶原的水平,抑制肝组织中α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白的表达。结论疏肝健脾方醇水双提物对化学性肝纤维化大鼠具有很好的抗肝纤维化作用,其可能机制与抑制肝星状细胞活化、减少细胞外基质的合成有关。 展开更多

关键词 疏肝健脾方 肝纤维化 四氯化碳 透明质酸 层粘蛋白 Ⅲ型前胶原肽 Ⅳ型胶原 Α-平滑肌肌动蛋白 Ⅰ型胶原 保护作用

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雌激素对宫腔粘连纤维化进程及叉头框F2表达的影响 被引量：8

12

作者 陈思萍 何援利 +3 位作者 蔡慧华 刘丽敏 张冬梅 孙冬华 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期326-330,共5页

目的探讨雌激素对宫腔粘连纤维化进程及叉头框(Fox)F2表达的影响。方法采用0.2%Ⅰ型胶原酶消化-筛网过滤-差时贴壁分离法获取原代人子宫内膜基质细胞(HESCs)并进行鉴定。采用10ng/ml转化生长因子β_1(TGF-β_1)作用于HESCs 48h建立宫腔... 目的探讨雌激素对宫腔粘连纤维化进程及叉头框(Fox)F2表达的影响。方法采用0.2%Ⅰ型胶原酶消化-筛网过滤-差时贴壁分离法获取原代人子宫内膜基质细胞(HESCs)并进行鉴定。采用10ng/ml转化生长因子β_1(TGF-β_1)作用于HESCs 48h建立宫腔粘连细胞模型。以0、10–6、10–8、10–10、10–12mol/L雌二醇(E2)作用于模型组48h,采用qPCR及Western blotting检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)及FoxF2的mRNA和蛋白表达。结果免疫细胞化学法检测显示HESCs波形蛋白阳性,角蛋白18阴性。模型组α-SMA、COLⅠ、FoxF2的mRNA和蛋白表达均高于对照组(P<0.05),模型构建成功。qPCR检测结果显示,与模型组相比,10^(–6)、10^(–8)、10^(–10)mol/L E_2组α-SMA、CO LⅠ、FoxF2的mRNA表达除10^(–10)mol/L E_2组COLⅠ表达无差异外,其余各组表达均下降(P<0.05),10^(–12)mol/L E2_组α-SMA及COLⅠmRNA表达上升,但差异无统计学意义(P>0.05),FoxF2 mRNA表达下降(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,与模型组相比,10^(–6)、10^(–8)、10^(–10)mol/L E_2组α-SMA、COLⅠ及FoxF2蛋白表达下降(P<0.05),10^(–12)mol/L E_2组α-SMA蛋白表达上升,但差异无统计学意义(P>0.05),COLⅠ及FoxF2蛋白表达下降(P<0.05)。结论 FoxF2在宫腔粘连中的表达增加。雌激素可在一定范围内逆转宫腔粘连的纤维化进程,并抑制FoxF2的表达。 展开更多

关键词 宫腔粘连 纤维化 雌激素 转化生长因子β1 Α-平滑肌肌动蛋白 Ⅰ型胶原 叉头框F2

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罗格列酮抑制大鼠肾间质纤维化的实验研究 被引量：6

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作者 孟晓青 邓安国 +5 位作者 朱忠华 杨晓 刘建设 付玲 朱红艳 王全胜 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期150-153,242,共5页

目的　探讨过氧化物酶体增生物激活受体 γ激动剂———罗格列酮对单侧输尿管梗阻 (UUO)大鼠肾间质纤维化的影响。方法　将 30只Wistar大鼠随机分成罗格列酮治疗组、模型组和假手术组。对治疗组 ,模型组行单侧输尿管结扎术建立输尿管梗... 目的　探讨过氧化物酶体增生物激活受体 γ激动剂———罗格列酮对单侧输尿管梗阻 (UUO)大鼠肾间质纤维化的影响。方法　将 30只Wistar大鼠随机分成罗格列酮治疗组、模型组和假手术组。对治疗组 ,模型组行单侧输尿管结扎术建立输尿管梗阻的动物模型。术后第 2 1天取 3组术侧肾组织做HE和Masson三色病理染色及用免疫组化方法检测α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)、转化生长因子 β1(TGF β1)和Ⅰ型胶原 (ColⅠ )在肾组织的表达水平。结果　罗格列酮可显著下调α SMA、TGF β1的表达 ,减轻Ⅰ型胶原在肾间质中的沉积 ,改善了肾脏病理改变。 展开更多

关键词 罗格列酮 大鼠 肾间质纤维化 Α-平滑肌肌动蛋白 转化生长因子-Β1 Ⅰ型胶原

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间充质干细胞移植后抑制肝星状细胞活化减轻肝纤维化 被引量：5

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作者 施启鹏 郭圆圆 +4 位作者 周晗 蔡洁 陈念 李军 章莉莉 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期981-987,共7页

目的 :研究间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)移植后对肝纤维化及肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)活化的抑制作用。方法:Ficoll-Hypaque梯度密度离心法及细胞贴壁培养法分离纯化4周龄SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow... 目的 :研究间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)移植后对肝纤维化及肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)活化的抑制作用。方法:Ficoll-Hypaque梯度密度离心法及细胞贴壁培养法分离纯化4周龄SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BM-MSC)。取18只SD大鼠,通过腹腔小剂量注射四氯化碳(CCl4)8周,进行肝纤维化造模,在造模4周时,取其中9只作为治疗组,每周经尾静脉移植给予该组每只大鼠6×106个MSC;另外9只作为模型对照组,经尾静脉给予不含MSCs的等量生理盐水;另取9只大鼠,作为正常对照组,仅给予尾静脉等量生理盐水注射,持续4周。自实验开始,每周用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)水平,至结束共测定8次。实验终点时通过免疫组化对α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)和Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,COLⅠ)在肝组织中的定位和表达进行研究;原位灌注和梯度密度离心法分离HSC,326 nm紫外光激发和α-SMA免疫荧光染色法鉴定HSC;q RT-PCR和Western blot检测HSC中α-SMA、TGF-β1基因和蛋白的表达水平。结果:与模型组相比,治疗组经MSC移植后,血清ALT、AST、TBIL水平,肝组织纤维化和炎症程度,肝组织α-SMA、TGF-β1和COLⅠ表达水平,HSC中α-SMA、TGF-β1基因和蛋白表达水平均明显降低。结论:肝纤维化SD大鼠经BM-MSC尾静脉移植治疗后肝功能显著改善、肝纤维化程度减轻,可能与抑制HSC活化有关。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 肝纤维化 肝星状细胞 Α平滑肌肌动蛋白 转化生长因子Β1 Ⅰ型胶原

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Nrf2过表达对乙醇刺激下肝星状细胞激活与增殖及合成Ⅰ型胶原的影响 被引量：2

15

作者 刘曼 何月 张吉翔 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1590-1596,共7页

目的:探讨核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)过表达对乙醇诱导下大鼠肝星状细胞系HSC-T6激活与增殖及I型胶原mRNA及蛋白表达水平的影响。方法:采用脂质体介导法对HSC-T6进行pEGFP-Nrf2重组质粒及pEGFP-N1空... 目的:探讨核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)过表达对乙醇诱导下大鼠肝星状细胞系HSC-T6激活与增殖及I型胶原mRNA及蛋白表达水平的影响。方法:采用脂质体介导法对HSC-T6进行pEGFP-Nrf2重组质粒及pEGFP-N1空载质粒瞬时转染,将细胞分为正常对照组、乙醇刺激组、乙醇刺激+pEGFP-Nrf2质粒组和乙醇刺激+pEGFP-N1空载质粒组。采用RT-PCR及Western blotting方法对HSC-T6中Nrf2、Ⅰ型胶原及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)mRNA及蛋白表达水平进行检测,采用MTT法对HSC-T6细胞增殖水平进行检测,采用流式细胞术对HSC-T6细胞周期分布进行检测。结果:(1)荧光显微镜下观察显示pEGFP-Nrf2质粒成功转染HSC-T6,转染后48h Nrf2 mRNA及蛋白表达水平较其余组显著升高(P<0.05)。(2)乙醇刺激组与乙醇刺激+pEGFP-N1空载质粒组之间细胞增殖水平、Ⅰ型胶原、α-SMA mRNA及蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),均明显高于正常对照组(P<0.05),细胞周期分布G1期比例下降,S期比例升高(P<0.05),而乙醇刺激+pEGFP-Nrf2质粒组细胞增殖水平及I型胶原、α-SMA mRNA及蛋白表达水平与乙醇刺激组及乙醇刺激+pEGFP-N1空载质粒组相比均显著下降(P<0.05),细胞周期分布G1期比例显著上升,S期比例显著下降(P<0.05),呈G1/S期阻滞。结论:Nrf2过表达可显著抑制乙醇对HSC-T6 Ⅰ型胶原及α-SMA mRNA及蛋白表达的促进作用,使HSC-T6细胞周期发生G1/S期阻滞,抑制乙醇诱导的HSC-T6增殖水平的升高,提示其对乙醇诱导的HSC-T6细胞活化具有负性调控作用。 展开更多

关键词 肝纤维化 肝星状细胞 核因子E2相关因子2 Ⅰ型胶原 Α-平滑肌肌动蛋白

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缺血再灌注损伤对新生鼠肾小管上皮细胞F-actin的影响 被引量：1

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作者 余波 姚裕家 +2 位作者 熊英 杨凡 李炜如 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第5期365-367,370,共4页

目的 研究缺血再灌注不同时段纤维型肌动蛋白(F-actin)在肾小管上皮细胞中分布变化情况,探讨F-actin在肾脏缺血再灌注损伤中所起的作用。方法 建立新生大鼠不同时段的肾脏缺血再灌注模型,通过免疫荧光法检测F-actin在肾小管上皮细胞上... 目的 研究缺血再灌注不同时段纤维型肌动蛋白(F-actin)在肾小管上皮细胞中分布变化情况,探讨F-actin在肾脏缺血再灌注损伤中所起的作用。方法 建立新生大鼠不同时段的肾脏缺血再灌注模型,通过免疫荧光法检测F-actin在肾小管上皮细胞上的分布,并计算各组F-actin的表达量。结果 正常时,F-actin主要聚集在上皮细胞基底膜处;缺血0.5 h后,细胞浆内的F-actin开始增加;再灌注0.5 h后,大量F-actin开始向胞浆内转移,基底部的表达减少;再灌注2 h后,F-actin在胞浆中仍很多,但在基底部的表达开始增加。结论 缺血再灌注损伤时F-actin的分布从基底部移行到胞浆内,可能由此导致整合素和Na+-K+-ATP酶分布的去极化,引起上皮细胞的脱落和对钠离子重吸收的障碍。 展开更多

关键词 缺血再灌注损伤 新生鼠 肾小管上皮细胞 纤维型肌动蛋白 肾功能损伤 致病机理

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C型凝集素9家族A成员的研究进展

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作者 姚文荣 杨贵波 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期849-853,共5页

C型凝集素9家族A成员(CLEC9A),又称为树突状细胞-NK细胞凝集素群受体1(DNGR-1),属于非经典的2型跨膜C型凝集素样受体,其表达具有高度的树突状细胞(DC)限制性。小鼠CLEC9A主要表达在CD8α^+DC和CD103^+DC表面,人CLEC9A主要表达在血液树... C型凝集素9家族A成员(CLEC9A),又称为树突状细胞-NK细胞凝集素群受体1(DNGR-1),属于非经典的2型跨膜C型凝集素样受体,其表达具有高度的树突状细胞(DC)限制性。小鼠CLEC9A主要表达在CD8α^+DC和CD103^+DC表面,人CLEC9A主要表达在血液树突状细胞抗原3阳性DC(BDCA3^+DC)表面。在表型和功能方面,人的同时表达CLEC9A和BDCA3(CLEC9A^+BDCA3^+)的DC与小鼠的CD8α^+DC具有相似性。CLEC9A能够与坏死或受损细胞的纤维状肌动蛋白结合,经细胞质区的免疫受体酪氨酸活化基序结构启动细胞内信号的转导。CLEC9A能介导内吞作用,参与交叉提呈抗原等作用,在抗病毒感染、肿瘤预防与治疗和疫苗的研究中具有潜在的应用前景。本文阐述了CLEC9A分子的研究进展。 展开更多

关键词 树突状细胞-NK细胞凝集素家族受体1 C型凝集素9家族A成员 血液树突状细胞抗原3 树突状细胞 内吞作用 交叉提呈 纤维状肌动蛋白 综述

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氟非尼酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的疗效观察 被引量：4

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作者 谭稳青 王维 +5 位作者 郑璇 陈继英 袁湘宁 张芳昉 王姝婷 陶立坚 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期511-519,共9页

目的:观察氟非尼酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的疗效,探讨氟非尼酮对肾间质纤维化大鼠肾组织中I型胶原(collagen type I,Col I),III型胶原(collagen type III,Col III),α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),结缔... 目的:观察氟非尼酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的疗效,探讨氟非尼酮对肾间质纤维化大鼠肾组织中I型胶原(collagen type I,Col I),III型胶原(collagen type III,Col III),α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和血小板源性生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)表达的影响。方法:将15只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和氟非尼酮组(n=5)。对模型组和氟非尼酮组大鼠行左侧输尿管结扎术建立单侧输尿管梗阻模型。氟非尼酮组从造模前24 h开始以氟非尼酮[125 mg/(kg.d)]溶于0.5%羧甲基纤维素钠(sodium carboxyl methyl cellulose,CMC-Na)中灌胃,模型组和假手术组以等体积0.5%CMC-Na灌胃。于术后14 d处死大鼠,取梗阻侧肾组织行HE和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变;用免疫组织化学检测Col I,Col III,α-SMA,PDGF,CTGF的蛋白表达;用RT-PCR检测Col I,Col III,PDGF,CTGF m RNA表达。结果:模型组肾间质损伤指数、胶原相对面积评分及Col I,Col III m RNA和蛋白表达均较假手术组增高(P<0.05),氟非尼酮治疗后明显改善(P<0.05)。模型组肾组织α-SMA,PDGF,CTGF蛋白表达及PDGF,CTGF m RNA表达均较假手术组明显增加(P<0.05),氟非尼酮治疗后表达均明显减少(P<0.05)。结论:氟非尼酮(125 mg/kg.d)能够显著改善单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化,其作用机制与抑制肌成纤维细胞的活化及关键促纤维化因子PDGF和CTGF的表达有关。 展开更多

关键词 肾间质纤维化 氟非尼酮 Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原 结缔组织生长因子 血小板源性生长因子 Α-平滑肌肌动蛋白

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肾病Ⅰ号方对单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化的影响 被引量：5

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作者 木林洁 董飞侠 程锦国 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2017年第11期2956-2959,I0021,I0022,共6页

目的:观察肾病Ⅰ号方对肾纤维化大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原(COL-Ⅳ)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法:24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组、洛丁新组和肾病Ⅰ号方组,每组6只。采用单侧输尿管结扎的方... 目的:观察肾病Ⅰ号方对肾纤维化大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原(COL-Ⅳ)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法:24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组、洛丁新组和肾病Ⅰ号方组,每组6只。采用单侧输尿管结扎的方法制备大鼠肾纤维化模型。假手术组和UUO模型组每日予2 m L生理盐水灌胃,洛丁新组按洛丁新片1.67 mg·kg^(-1)·d^(-1)给药,肾病Ⅰ号方组按18.75 g·kg^(-1)·d^(-1)给药。灌胃14 d后处死大鼠,采集血清检测尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和血肌酐(serum creatinine,SCr);取肾组织行HE染色评价肾小管间质纤维化损伤程度;采用免疫组织化学染色方法检测α-SMA、COL-Ⅳ、TGF-β1在肾组织中的表达情况;免疫印迹试验(Western blot)检测α-SMA相对蛋白表达量。结果:与模型组比较,洛丁新组、肾病Ⅰ号方组大鼠的SCr,BUN明显下降(P<0.05),肾组织α-SMA、COL-Ⅳ、TGF-β1表达量下降显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:肾病Ⅰ号方对肾纤维化具有一定改善作用,其作用机制可能是通过下调α-SMA、COL-Ⅳ、TGF-β1的表达,从而达到肾脏保护的作用。 展开更多

关键词 单侧输尿管结扎 Α平滑肌肌动蛋白 Ⅳ型胶原 转化生长因子-Β1 肾纤维化 肾病Ⅰ号方

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趋化因子CXCL12可能参与白细胞介素17A对小鼠肺成纤维细胞的活化 被引量：2

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作者 王华英 吕佳佩 +1 位作者 陈丽萍 俞万钧 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期758-764,共7页

目的:研究IL-17A促进小鼠肺成纤维细胞活化及趋化因子CXCL12在其中的作用。方法:以雄性BALB/c小鼠为研究对象,小鼠腹腔注射重组小鼠IL-17A后取小鼠肺组织。采用实时逆转录PCR和蛋白质印迹法检测小鼠肺组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ... 目的:研究IL-17A促进小鼠肺成纤维细胞活化及趋化因子CXCL12在其中的作用。方法:以雄性BALB/c小鼠为研究对象,小鼠腹腔注射重组小鼠IL-17A后取小鼠肺组织。采用实时逆转录PCR和蛋白质印迹法检测小鼠肺组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白的mRNA和蛋白表达,采用免疫组织化学法和实时逆转录PCR法测定肺组织中趋化因子CXCL12的表达。分离培养正常小鼠原代肺成纤维细胞,采用免疫荧光染色法和光学显微镜观察鉴定原代肺成纤维细胞。将分离的肺成纤维细胞与不同浓度的重组小鼠IL-17A共培养后收集细胞及上清液,采用实时逆转录PCR法测定细胞中α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白和CXCL12的mRNA水平,采用ELISA法测定培养上清液中Ⅰ型胶原蛋白和CXCL12蛋白水平。结果:与对照组比较,重组小鼠IL-17A处理后小鼠肺组织中α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA和蛋白水平均升高(均P<0.01)。与不同浓度的重组小鼠IL-17A共培养后,小鼠肺成纤维细胞表达α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白和CXCL12的mRNA明显增加(均P<0.01),其培养基上清液中Ⅰ型胶原蛋白、CXCL12的浓度也明显升高(均P<0.01),且呈剂量依赖性。结论:IL-17A能促进肺成纤维细胞的活化并转化为肌成纤维细胞,分泌Ⅰ型胶原蛋白明显增加,促进细胞外基质的沉积,从而导致肺纤维化的发生和发展,而活化的成纤维细胞分泌的趋化因子CXCL12可能参与了这个过程。 展开更多

关键词 白细胞介素17A 趋化因子 CXCL12 成纤维细胞 Α平滑肌肌动蛋白 Ⅰ型胶原蛋白 小鼠

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