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红色糖多孢菌红霉素抗性基因的克隆与鉴定 被引量:2
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作者 孙丽萍 沈琼 +2 位作者 叶江 吴海珍 张惠展 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期20-23,共4页
将红色糖多孢菌 ( Saccharopolyspora erythraea)的染色体 DNA用 Pst I酶切后与载体p UWL2 0 1连接 ,转化变铅青链霉菌 ( S.lividans) TK2 3的原生质体。采用双重抗性筛选得到了 9个转化子。分别抽提其中的质粒并再次转化原生质体 ,在... 将红色糖多孢菌 ( Saccharopolyspora erythraea)的染色体 DNA用 Pst I酶切后与载体p UWL2 0 1连接 ,转化变铅青链霉菌 ( S.lividans) TK2 3的原生质体。采用双重抗性筛选得到了 9个转化子。分别抽提其中的质粒并再次转化原生质体 ,在含红霉素的平板上各筛选约 2 0 0个转化子 ,其中有 3个在抗性板上生长良好 ,分别命名为 p LP42、p LP1 b和 p LP44。对其中的 p LP42酶切分析表明 ,其含有约 3.0 kb的红色糖多孢菌 ( Saccharopolyspora erythraea)染色体 DNA片段 ,它的载体部分发生了缺失。以 p UC1 8为载体 ,将 p LP42的 1 .7kb- Kpn I片断克隆、测序、经与 Genebank的erm E基因顺序比较 ,证实已克隆了 Saccharopolyspora 展开更多
关键词 鸟枪法 原生质体转化 红色糖多孢菌 红霉素基因 双重筛选 基因克隆 基因鉴定
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电转化方法将外源性质粒导入干酪乳杆菌的研究 被引量:17
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作者 格日勒图 王艳霞 +2 位作者 包秋华 代兄 张和平 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2009年第2期9-13,共5页
以pMG36e,pMG36c和已消除内源性质粒的干酪乳杆菌(L.casei Zhang)为材料,在不同参数下进行电转化实验并建立最佳实验条件。结果表明:最佳电转化电压为1.5 kV,时间为2.0 ms。pMG36c转化不同对数生长期L.casei Zhang时,发现转化对数生长... 以pMG36e,pMG36c和已消除内源性质粒的干酪乳杆菌(L.casei Zhang)为材料,在不同参数下进行电转化实验并建立最佳实验条件。结果表明:最佳电转化电压为1.5 kV,时间为2.0 ms。pMG36c转化不同对数生长期L.casei Zhang时,发现转化对数生长中期菌体获得的转化子数最高,而转化效率不是最高;转化生长初期获得的转化子数为4.04×106 mL-1,电转化效率为89.78%;后期则为1.6×107 mL-1和4.0%。磷酸钠作电击缓冲液获得的转化子数高于体积分数为10%甘油获得的转化子数。复苏培养基甘氨酸质量分数为0.5%时得到的转化子数最高,转化效率为35.56%;当甘氨酸质量分数增加到1%时得到的转化子数和转化效率分别下降到5.6×106 mL-1和6.22%,甘氨酸质量分数为2%时得到的转化子数和转化效率更低;不同质粒转化L.casei Zhang时,pMG36c转化获得的转化子数高于pMG36e转化子数。选择pMG36e转化L.casei Zhang的转化子为模板,通过PCR反应已证实转化试验的可靠性。本研究为外源基因电转化干酪乳酸菌提供了可靠的参考依据。 展开更多
关键词 干酪乳杆菌 电转化 外源质粒 pMG36e(表达载体 红霉素) pMG36c(克隆载体 霉素)
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基因工程
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《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第4期22-36,共15页
911030 大肠杆菌严格饥饿蛋白(SSP)启动子在克隆基因表达系统中应用的可能性[会,英]/Williams,M.D.…//Abstr.Pap.Am.Chem.Soc.-1990,199 Meet.,Pt.1.-BIOT124[译自DBA,1990,9(17),90-09776]分离到大肠杆菌SSP基因,经定位诱变构建ssp缺... 911030 大肠杆菌严格饥饿蛋白(SSP)启动子在克隆基因表达系统中应用的可能性[会,英]/Williams,M.D.…//Abstr.Pap.Am.Chem.Soc.-1990,199 Meet.,Pt.1.-BIOT124[译自DBA,1990,9(17),90-09776]分离到大肠杆菌SSP基因,经定位诱变构建ssp缺陷突变子。 展开更多
关键词 基因表达系统 启动子调控 复制起点 红霉素基因 突变子 选择标记 外源基因 克隆基因 融合蛋白 噬菌体克隆
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基因标记、转化、表达与检测
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《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第9期33-37,共5页
932922二硫苏糖醇可改进酵母菌的转化效率[英]/Redd-y,A.…//Anal.Biochem.-1993,208(1).-211~212[译自 DBA,1993,12(6),93-03093]这是用于酿酒酵母转化的醋酸锂改良法,包括与二硫苏糖醇(DTT)一起保温步骤。
关键词 酿酒酵母 二硫苏糖醇 基因标记 启动子调控 人基因组 细胞亚群 受体菌 杆状病毒 红霉素基因 重组体
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基因工程
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《生物技术通报》 CAS CSCD 1994年第1期33-52,共20页
关键词 启动子调控 电激法 基因文库 DNA 基因组计划 克隆位点 编码区 红霉素基因 选择标记 酵母人工染色体
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基因工程
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《生物技术通报》 CAS CSCD 1989年第9期36-47,共12页
892690 含同感序列和特异性启动子的新型重组 DNA[专,德]/Boehr.Mannheim/EP-285-152:19.10.87-DE-735381(05.10.88)(31.03.87-DE-710633)30.03.88 as 105219.88-294149/42(12页)
关键词 逆病毒载体 染色体外因子 启动子调控 转座子 外源基因 编码区 特异启动子 红霉素基因 拷贝数 末端
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