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红色糖多孢菌红霉素抗性基因的克隆与鉴定
被引量:
2
1
作者
孙丽萍
沈琼
+2 位作者
叶江
吴海珍
张惠展
《华东理工大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第1期20-23,共4页
将红色糖多孢菌 ( Saccharopolyspora erythraea)的染色体 DNA用 Pst I酶切后与载体p UWL2 0 1连接 ,转化变铅青链霉菌 ( S.lividans) TK2 3的原生质体。采用双重抗性筛选得到了 9个转化子。分别抽提其中的质粒并再次转化原生质体 ,在...
将红色糖多孢菌 ( Saccharopolyspora erythraea)的染色体 DNA用 Pst I酶切后与载体p UWL2 0 1连接 ,转化变铅青链霉菌 ( S.lividans) TK2 3的原生质体。采用双重抗性筛选得到了 9个转化子。分别抽提其中的质粒并再次转化原生质体 ,在含红霉素的平板上各筛选约 2 0 0个转化子 ,其中有 3个在抗性板上生长良好 ,分别命名为 p LP42、p LP1 b和 p LP44。对其中的 p LP42酶切分析表明 ,其含有约 3.0 kb的红色糖多孢菌 ( Saccharopolyspora erythraea)染色体 DNA片段 ,它的载体部分发生了缺失。以 p UC1 8为载体 ,将 p LP42的 1 .7kb- Kpn I片断克隆、测序、经与 Genebank的erm E基因顺序比较 ,证实已克隆了 Saccharopolyspora
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关键词
鸟枪法
原生质体转化
红色糖多孢菌
红霉素
抗
性
基因
双重
抗
性
筛选
基因克隆
基因鉴定
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职称材料
电转化方法将外源性质粒导入干酪乳杆菌的研究
被引量:
17
2
作者
格日勒图
王艳霞
+2 位作者
包秋华
代兄
张和平
《中国乳品工业》
CAS
北大核心
2009年第2期9-13,共5页
以pMG36e,pMG36c和已消除内源性质粒的干酪乳杆菌(L.casei Zhang)为材料,在不同参数下进行电转化实验并建立最佳实验条件。结果表明:最佳电转化电压为1.5 kV,时间为2.0 ms。pMG36c转化不同对数生长期L.casei Zhang时,发现转化对数生长...
以pMG36e,pMG36c和已消除内源性质粒的干酪乳杆菌(L.casei Zhang)为材料,在不同参数下进行电转化实验并建立最佳实验条件。结果表明:最佳电转化电压为1.5 kV,时间为2.0 ms。pMG36c转化不同对数生长期L.casei Zhang时,发现转化对数生长中期菌体获得的转化子数最高,而转化效率不是最高;转化生长初期获得的转化子数为4.04×106 mL-1,电转化效率为89.78%;后期则为1.6×107 mL-1和4.0%。磷酸钠作电击缓冲液获得的转化子数高于体积分数为10%甘油获得的转化子数。复苏培养基甘氨酸质量分数为0.5%时得到的转化子数最高,转化效率为35.56%;当甘氨酸质量分数增加到1%时得到的转化子数和转化效率分别下降到5.6×106 mL-1和6.22%,甘氨酸质量分数为2%时得到的转化子数和转化效率更低;不同质粒转化L.casei Zhang时,pMG36c转化获得的转化子数高于pMG36e转化子数。选择pMG36e转化L.casei Zhang的转化子为模板,通过PCR反应已证实转化试验的可靠性。本研究为外源基因电转化干酪乳酸菌提供了可靠的参考依据。
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关键词
干酪乳杆菌
电转化
外源
性
质粒
pMG36e(表达载体
红霉素
抗
性
)
pMG36c(克隆载体
氯
霉素
抗
性
)
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职称材料
基因工程
3
《生物技术通报》
CAS
CSCD
1991年第4期22-36,共15页
911030 大肠杆菌严格饥饿蛋白(SSP)启动子在克隆基因表达系统中应用的可能性[会,英]/Williams,M.D.…//Abstr.Pap.Am.Chem.Soc.-1990,199 Meet.,Pt.1.-BIOT124[译自DBA,1990,9(17),90-09776]分离到大肠杆菌SSP基因,经定位诱变构建ssp缺...
911030 大肠杆菌严格饥饿蛋白(SSP)启动子在克隆基因表达系统中应用的可能性[会,英]/Williams,M.D.…//Abstr.Pap.Am.Chem.Soc.-1990,199 Meet.,Pt.1.-BIOT124[译自DBA,1990,9(17),90-09776]分离到大肠杆菌SSP基因,经定位诱变构建ssp缺陷突变子。
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关键词
基因表达系统
启动子调控
复制起点
红霉素
抗
性
基因
突变子
选择标记
外源基因
克隆基因
融合蛋白
噬菌体克隆
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职称材料
基因标记、转化、表达与检测
4
《生物技术通报》
CAS
CSCD
1993年第9期33-37,共5页
932922二硫苏糖醇可改进酵母菌的转化效率[英]/Redd-y,A.…//Anal.Biochem.-1993,208(1).-211~212[译自 DBA,1993,12(6),93-03093]这是用于酿酒酵母转化的醋酸锂改良法,包括与二硫苏糖醇(DTT)一起保温步骤。
关键词
酿酒酵母
二硫苏糖醇
基因标记
启动子调控
人基因组
细胞亚群
受体菌
杆状病毒
红霉素
抗
性
基因
重组体
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职称材料
基因工程
5
《生物技术通报》
CAS
CSCD
1994年第1期33-52,共20页
关键词
启动子调控
电激法
基因文库
DNA
基因组计划
克隆位点
编码区
红霉素
抗
性
基因
选择标记
酵母人工染色体
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职称材料
基因工程
6
《生物技术通报》
CAS
CSCD
1989年第9期36-47,共12页
892690 含同感序列和特异性启动子的新型重组 DNA[专,德]/Boehr.Mannheim/EP-285-152:19.10.87-DE-735381(05.10.88)(31.03.87-DE-710633)30.03.88 as 105219.88-294149/42(12页)
关键词
逆病毒载体
染色体外因子
启动子调控
转座子
外源基因
编码区
特异
性
启动子
红霉素
抗
性
基因
拷贝数
粘
性
末端
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职称材料
题名
红色糖多孢菌红霉素抗性基因的克隆与鉴定
被引量:
2
1
作者
孙丽萍
沈琼
叶江
吴海珍
张惠展
机构
华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
出处
《华东理工大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第1期20-23,共4页
文摘
将红色糖多孢菌 ( Saccharopolyspora erythraea)的染色体 DNA用 Pst I酶切后与载体p UWL2 0 1连接 ,转化变铅青链霉菌 ( S.lividans) TK2 3的原生质体。采用双重抗性筛选得到了 9个转化子。分别抽提其中的质粒并再次转化原生质体 ,在含红霉素的平板上各筛选约 2 0 0个转化子 ,其中有 3个在抗性板上生长良好 ,分别命名为 p LP42、p LP1 b和 p LP44。对其中的 p LP42酶切分析表明 ,其含有约 3.0 kb的红色糖多孢菌 ( Saccharopolyspora erythraea)染色体 DNA片段 ,它的载体部分发生了缺失。以 p UC1 8为载体 ,将 p LP42的 1 .7kb- Kpn I片断克隆、测序、经与 Genebank的erm E基因顺序比较 ,证实已克隆了 Saccharopolyspora
关键词
鸟枪法
原生质体转化
红色糖多孢菌
红霉素
抗
性
基因
双重
抗
性
筛选
基因克隆
基因鉴定
Keywords
shot gun
protoplast transformation
Saccharopolyspora erythraea
erythromycin resistance gene
double resistance screen
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
Q939.132 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
电转化方法将外源性质粒导入干酪乳杆菌的研究
被引量:
17
2
作者
格日勒图
王艳霞
包秋华
代兄
张和平
机构
内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室
出处
《中国乳品工业》
CAS
北大核心
2009年第2期9-13,共5页
基金
内蒙古农业大学"中国博士后流动站"项目(No.57545)
国家高技术研究发展计划(863计划
+1 种基金
N0.2006AA10Z345
2007AA10Z353)
文摘
以pMG36e,pMG36c和已消除内源性质粒的干酪乳杆菌(L.casei Zhang)为材料,在不同参数下进行电转化实验并建立最佳实验条件。结果表明:最佳电转化电压为1.5 kV,时间为2.0 ms。pMG36c转化不同对数生长期L.casei Zhang时,发现转化对数生长中期菌体获得的转化子数最高,而转化效率不是最高;转化生长初期获得的转化子数为4.04×106 mL-1,电转化效率为89.78%;后期则为1.6×107 mL-1和4.0%。磷酸钠作电击缓冲液获得的转化子数高于体积分数为10%甘油获得的转化子数。复苏培养基甘氨酸质量分数为0.5%时得到的转化子数最高,转化效率为35.56%;当甘氨酸质量分数增加到1%时得到的转化子数和转化效率分别下降到5.6×106 mL-1和6.22%,甘氨酸质量分数为2%时得到的转化子数和转化效率更低;不同质粒转化L.casei Zhang时,pMG36c转化获得的转化子数高于pMG36e转化子数。选择pMG36e转化L.casei Zhang的转化子为模板,通过PCR反应已证实转化试验的可靠性。本研究为外源基因电转化干酪乳酸菌提供了可靠的参考依据。
关键词
干酪乳杆菌
电转化
外源
性
质粒
pMG36e(表达载体
红霉素
抗
性
)
pMG36c(克隆载体
氯
霉素
抗
性
)
Keywords
Lactobacillus casei, Electroporation, Exogeneous Plasmid, pMG36c, pMG36e
分类号
Q813 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
基因工程
3
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
1991年第4期22-36,共15页
文摘
911030 大肠杆菌严格饥饿蛋白(SSP)启动子在克隆基因表达系统中应用的可能性[会,英]/Williams,M.D.…//Abstr.Pap.Am.Chem.Soc.-1990,199 Meet.,Pt.1.-BIOT124[译自DBA,1990,9(17),90-09776]分离到大肠杆菌SSP基因,经定位诱变构建ssp缺陷突变子。
关键词
基因表达系统
启动子调控
复制起点
红霉素
抗
性
基因
突变子
选择标记
外源基因
克隆基因
融合蛋白
噬菌体克隆
分类号
Q81 [生物学—生物工程]
在线阅读
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职称材料
题名
基因标记、转化、表达与检测
4
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
1993年第9期33-37,共5页
文摘
932922二硫苏糖醇可改进酵母菌的转化效率[英]/Redd-y,A.…//Anal.Biochem.-1993,208(1).-211~212[译自 DBA,1993,12(6),93-03093]这是用于酿酒酵母转化的醋酸锂改良法,包括与二硫苏糖醇(DTT)一起保温步骤。
关键词
酿酒酵母
二硫苏糖醇
基因标记
启动子调控
人基因组
细胞亚群
受体菌
杆状病毒
红霉素
抗
性
基因
重组体
分类号
Q81 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
基因工程
5
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
1994年第1期33-52,共20页
关键词
启动子调控
电激法
基因文库
DNA
基因组计划
克隆位点
编码区
红霉素
抗
性
基因
选择标记
酵母人工染色体
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
基因工程
6
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
1989年第9期36-47,共12页
文摘
892690 含同感序列和特异性启动子的新型重组 DNA[专,德]/Boehr.Mannheim/EP-285-152:19.10.87-DE-735381(05.10.88)(31.03.87-DE-710633)30.03.88 as 105219.88-294149/42(12页)
关键词
逆病毒载体
染色体外因子
启动子调控
转座子
外源基因
编码区
特异
性
启动子
红霉素
抗
性
基因
拷贝数
粘
性
末端
分类号
Q81 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
红色糖多孢菌红霉素抗性基因的克隆与鉴定
孙丽萍
沈琼
叶江
吴海珍
张惠展
《华东理工大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2002
2
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职称材料
2
电转化方法将外源性质粒导入干酪乳杆菌的研究
格日勒图
王艳霞
包秋华
代兄
张和平
《中国乳品工业》
CAS
北大核心
2009
17
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职称材料
3
基因工程
《生物技术通报》
CAS
CSCD
1991
0
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职称材料
4
基因标记、转化、表达与检测
《生物技术通报》
CAS
CSCD
1993
0
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职称材料
5
基因工程
《生物技术通报》
CAS
CSCD
1994
0
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职称材料
6
基因工程
《生物技术通报》
CAS
CSCD
1989
0
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职称材料
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