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红细胞分化去核因子在诱导小鼠红白血病细胞分化以及恶性逆转中的作用 被引量:2
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作者 赵青 葛晔华 +4 位作者 周建平 马静 陈克铨 薛社普 韩代书 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期32-35,F003,共5页
研究小鼠红细胞分化去核分化因子 (MEDDF)在红细胞终末分化中的功能。方法构建在真核细胞中表达的重组质粒 pcDNA- MEDDF,用其转染小鼠红白血病细胞系 (MEL)。通过分析细胞的生长曲线、分裂指数及在半固体培养基中的集落形成率比较细... 研究小鼠红细胞分化去核分化因子 (MEDDF)在红细胞终末分化中的功能。方法构建在真核细胞中表达的重组质粒 pcDNA- MEDDF,用其转染小鼠红白血病细胞系 (MEL)。通过分析细胞的生长曲线、分裂指数及在半固体培养基中的集落形成率比较细胞的生长特性,采用 RT- PCR检测 c- myc及β-珠蛋白 (β- globin)基因的表达。结果转染 pcDNA- MEDDF与转染空载体 (pcDNA3.1)的细胞相比较,细胞的增殖率减慢、分裂指数降低、在半固体培养基中形成集落的数量减少。转染细胞的联苯胺阳性率达 32.8%。用 RT- PCR检测发现,转染细胞β-珠蛋白的表达量上升了 3.43倍, c- myc表达量下降了 66.3%。结论 MEDDF能使小鼠红白血病细胞分化并抑制其恶性变。 展开更多
关键词 小鼠 红细胞分化去核因子 红细胞分化 红白血病
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小鼠红细胞分化相关因子cDNA片段的克隆与分析 被引量:3
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作者 刘世广 章正琰 +4 位作者 张世馥 马静 唐文 章静波 薛社普 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期94-98,共5页
目的克隆与小鼠红细胞终末分化相关因子的基因,并对其表达特性进行分析。方法用致贫血Friend病毒(FVA)诱导BALB/c小鼠脾脏产生大量FVA原红细胞,后者经分离纯化并在促红细胞生成素作用下进行体外培养。采用减除杂... 目的克隆与小鼠红细胞终末分化相关因子的基因,并对其表达特性进行分析。方法用致贫血Friend病毒(FVA)诱导BALB/c小鼠脾脏产生大量FVA原红细胞,后者经分离纯化并在促红细胞生成素作用下进行体外培养。采用减除杂交与PCR相结合的方法,用未经培养的FVA诱导的原红细胞(0hFVA原红细胞)的cDNA对培养36h的FVA诱导的成红细胞(36hFVA成红细胞)的cDNA进行多次减除杂交和PCR扩增,构建上述36hcDNA的质粒减除文库并进行差异筛选。对阳性克隆进行核苷酸序列测定及Northern印迹分析。结果获得1个472bp的cDNA片段,其中含有1个309bp的开放阅读框架,编码102个氨基酸。经GenBank进行同源比较,未发现同源序列,已被GenBank接受,(编号AA114369)。Northern印迹分析表明,该cDNA在培养36h的FVA中、晚幼红细胞中呈差异表达,其mRNA全长约为500~600bp左右。将其暂命名为小鼠红细胞分化相关因子(MEDRF)基因。结论MEDRF基因在红细胞分化的中、晚幼阶段特异表达,表明MEDRF是一个新的与红细胞终末分化相关的因子。 展开更多
关键词 红细胞分化 细胞分化 CDNA 克隆 相关因子
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红细胞分化去核因子:哺乳类红细胞终末分化/肿瘤抑制的调节因子家族及其相关基因的克隆 被引量:3
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作者 薛社普 刘友华 +10 位作者 张世馥 马文丽 王鑫 费仁仁 杜权 章正琰 章静波 陈克铨 周建平 马静 韩代书 《中国医学科学院学报》 CSCD 北大核心 2000年第4期371-375,共5页
本文报道哺乳类红细胞终末分化去核因子 (EDDF)调控恶性骨髓瘤细胞的分化以及与 EDDF相关的基因克隆的系列研究结果。以不同分化期哺乳类红细胞为研究对象 ,观察红细胞自然排核前后的细胞形态变化和与之互为对应的物质代谢的改变 ,分析 ... 本文报道哺乳类红细胞终末分化去核因子 (EDDF)调控恶性骨髓瘤细胞的分化以及与 EDDF相关的基因克隆的系列研究结果。以不同分化期哺乳类红细胞为研究对象 ,观察红细胞自然排核前后的细胞形态变化和与之互为对应的物质代谢的改变 ,分析 EDDF与终末分化、核浓缩及自然排核的可能关系 ;用自建的红细胞胞质体杂交模型 ,分别对红白血病和非红系的骨髓瘤细胞进行同种和异种的细胞杂交实验以验证 EDDF的作用规律。结果表明 ,哺乳类红细胞在终末分化不同阶段存在时相相关的分化去核因子家族。这些因子可调控不同分化阶段相关基因的活动 ,且呈时序性出现 ,与血红蛋白表达、细胞核停止分裂转向分化、核偏位、核浓 (固 )缩和自然去核等终末分化特征呈现明显的因果关系。 EDDF活性蛋白可逆转体外培养的肿瘤细胞系 (MEL,K5 6 2 )的恶性生长及诱导终末分化。在上述基础上分别采用不同的分离、提纯及基因克隆路线 ,从人和小鼠红细胞中连续克隆到 5种分化相关基因家族 (MEDDF,HEDDF- 1,HEDRF- 1,HEDRF- 2 ,HCNBP- 1)及其全长序列 ,并经 Gen Bank证实 ,它们均为无同源的新基因序列。 展开更多
关键词 终末分化 红细胞分化去核因子 调控 基因克隆
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利用K562红细胞分化模型和cDNA芯片技术筛选参与红细胞分化的新基因(英文)
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作者 王敦成 马淑华 +1 位作者 王升启 沈倍奋 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期681-686,共6页
以氯高铁血红素 (hemin)诱导K5 6 2分化作为体外红细胞分化模型 ,结合cDNA大规模测序、生物信息学分析、基因芯片杂交和NorthernBlot分析等技术 ,筛选红细胞分化相关的新基因 .首先利用大规模测序技术从人胚肾cDNA文库中随机挑选克隆测... 以氯高铁血红素 (hemin)诱导K5 6 2分化作为体外红细胞分化模型 ,结合cDNA大规模测序、生物信息学分析、基因芯片杂交和NorthernBlot分析等技术 ,筛选红细胞分化相关的新基因 .首先利用大规模测序技术从人胚肾cDNA文库中随机挑选克隆测得 192个EST(expressedsequencetags)片段 ,经在线生物信息学分析 ,得到 79个代表新基因的未知EST片段 ,并在NCBI(NationalCenterofBiotechnologyInformation)dbEST库中登录 .利用 79个ESTcDNA片段制备了基因芯片 .提取分化前后的K5 6 2细胞的mRNA作为荧光标记反转录的模板 ,反转录后的探针用于DNA芯片杂交 .分析杂交后的结果 ,得到了 2个差异表达较明显的基因 ,GenBank登录号分别为AF147772 (187bp)和AF4 776 2(6 30bp) ,并分别命名为EDRG1和EDRG2 (erythroiddifferentiationrelatedgene 1and 2 ) ,相似性检索表明它们属全新基因 ,基因组草图测序数据库检索表明了两个基因的染色体定位 .随后的Northern印迹用于验证了在分化前后的K5 6 2细胞中差异表达 .提示这两个基因参与了红细胞分化过程 .RT PCR检测了EDRG1和EDRG2在人胚胎多组织中的表达 .结果提示 ,EDRG1可能与多种胚组织的正常发育相关 ,尤其在胚脑中高丰度表达 ,而EDRG2则可能参与了胚心和胚肾的组织生成 .生物? 展开更多
关键词 CDNA芯片 红细胞分化 EST 相关基因 模型
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红细胞分化因子诱导HL-60细胞排核过程中酪氨酸蛋白质磷酸化的改变 被引量:3
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作者 郭双立 白龙川 +2 位作者 颜卉君 费仁仁 吴国利 《生物化学杂志》 CSCD 1997年第2期210-215,共6页
红细胞分化因子是从兔子网织红细胞中提出的一个蛋白因子,它可以使多种癌细胞株的生长受到抑制[1].以早幼粒白血病细胞(HL-60)为材料,研究其被EDDF诱导过程中细胞内PTK,PTPP及它们底物磷酸化水平的变化.实验发现:部分纯化的EDDF... 红细胞分化因子是从兔子网织红细胞中提出的一个蛋白因子,它可以使多种癌细胞株的生长受到抑制[1].以早幼粒白血病细胞(HL-60)为材料,研究其被EDDF诱导过程中细胞内PTK,PTPP及它们底物磷酸化水平的变化.实验发现:部分纯化的EDDF对HL-60细胞生长有明显的抑制作用,经NBT还原和Giemsa染色,可见HL-60细胞被诱导出现排核.同时,细胞的PTK,PTPP酶活性有明显的变化,PTPP和PTK的底物蛋白在胞浆中酪氨酸蛋白磷酸化水平亦出现改变(但颗粒部分变化不明显). 展开更多
关键词 红细胞分化因子 酪氨酸蛋白 磷酸化 白血病
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怎样进行科研设计 被引量:2
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作者 章静波 《学位与研究生教育》 CSSCI 北大核心 1998年第5期72-74,共3页
培养研究生至关重要的一点,是训练他们正确地从事科研设计的能力。本文从选题和立项、研究对象及内容、技术路线、对自己科研队伍及科研条件要有准确估价等四个方面分析科研设计成败的关键。文章用史实和实例。
关键词 技术路线 科研设计 研究对象 红细胞分化去核因子 网织红细胞 研究现状 研究内容 煤焦油 科研条件 思维的深刻性
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