目的:探究阿魏酸钠(SF)通过miR-216b-3p/Nrf2通路对缺氧缺血性脑病(HIE)胚胎大鼠大脑的干预作用以及减轻氧化应激损伤的作用机制。方法:将成年雌性SD大鼠和雄鼠,按照3∶1比例合笼获得怀孕的雌鼠。然后将孕鼠分为假手术组(sham)、缺氧缺...目的:探究阿魏酸钠(SF)通过miR-216b-3p/Nrf2通路对缺氧缺血性脑病(HIE)胚胎大鼠大脑的干预作用以及减轻氧化应激损伤的作用机制。方法:将成年雌性SD大鼠和雄鼠,按照3∶1比例合笼获得怀孕的雌鼠。然后将孕鼠分为假手术组(sham)、缺氧缺血性脑病模型组(HIE)、SF低剂量组(HIE+SF-L)和SF高剂量组(HIE+SF-H)。通过无创止血钳夹闭子宫两侧动脉和卵巢血管法制备胚胎大鼠HIE模型。SF治疗组腹膜腔注射SF。采用HE染色观察胚胎大鼠大脑皮质的病理变化;免疫荧光观察核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)、过氧化还原酶1(PRDX1)的表达情况;Western Blot检测胚胎大鼠脑组织中Nrf2和PRDX1蛋白的表达;real time RT-PCR检测miR-216b-3p的表达以及Nrf2和PRDX1的mRNA表达;WST-8法和TBA法检测脑组织中的超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:与sham组对比,HIE组胚胎大鼠的大脑损伤加重,病理改变明显;HIE组中Nrf2蛋白表达和mRNA水平降低(P<0.05),PRDX1的蛋白水平和mRNA水平显著上调(P<0.05),miR-216b-3p表达水平显著升高(P<0.05);并且Nrf2的平均荧光强度显著降低(P<0.05),PRDX1的平均荧光强度显著增加(P<0.05);SOD活性显著下调,MDA含量显著增加(P<0.05)。与HIE组对比,各剂量SF组的大脑皮质病理结构明显改善,脑损伤减轻;Nrf2和PRDX1的蛋白表达、mRNA水平以及平均荧光强度均显著上升(P<0.05);miR-216b-3p表达水平均显著下调,以SF高剂量组下调最为显著(P<0.05);并且SOD活性显著上调,MDA含量显著下调(P<0.05)。结论:SF通过miR-216b-3p/Nrf2信号通路在HIE的发生发展过程中发挥重要作用,并减轻胚胎大鼠受到的氧化应激损伤。展开更多
目的探讨丹酚酸A(Sal A)对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)损伤的BV2细胞炎症反应和氧化应激的影响及可能机制。方法用含Na_(2)S_(2)O_(4)10 mmol·L^(-1)的无糖Earle′s平衡盐缓冲液建立BV2细胞的OGD/R损伤模型,加入Na_(2)S_(2)O_(4)无糖Ea...目的探讨丹酚酸A(Sal A)对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)损伤的BV2细胞炎症反应和氧化应激的影响及可能机制。方法用含Na_(2)S_(2)O_(4)10 mmol·L^(-1)的无糖Earle′s平衡盐缓冲液建立BV2细胞的OGD/R损伤模型,加入Na_(2)S_(2)O_(4)无糖Earle′s平衡盐缓冲液,置培养箱(37℃,5%CO_(2))中培养1.5 h(氧糖剥夺)后换为正常培养基培养24 h(再灌注)。随后实验分为细胞对照组、OGD/R组、OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组、OGD/R+ML385组、OGD/R+ML385+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组及OGD/R+依达拉奉(Eda,50μmol·L^(-1))组,继续培养24 h。(1)CCK8法测定细胞存活率。(2)ELISA检测细胞上清中白细胞介素1β(IL^(-1)β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL^(-1)0、IL-4、转化生长因子β(TGF-β)含量;化学荧光法检测细胞活性氧(ROS)含量;比色法测定细胞丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和氯霉素乙酰转移酶(CAT)活性。(3)Western印迹法检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子红系2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、前醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白表达水平及核因子κB p65蛋白磷酸化(p-NF-κB p65)水平。结果(1)与细胞对照组相比,OGD/R组细胞存活率显著降低(P<0.01);与OGD/R组相比,OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组细胞存活率显著升高(P<0.05,P<0.01)。(2)与细胞对照组相比,OGD/R组IL^(-1)β,IL-6和TNF-α含量显著升高,IL^(-1)0,IL-4和TGF-β含量显著降低,ROS和MDA含量显著升高,SOD,CAT和GSH-Px活性显著降低(P<0.01);与OGD/R组相比,OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)和OGD/R+Eda组IL-6含量显著降低,IL^(-1)0,IL-4和TGF-β含量显著增加,ROS和MDA含量显著降低,SOD,CAT和GSH-Px活性显著升高(P<0.05,P<0.01)。(3)与细胞对照组相比,OGD/R组p-NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.01);与OGD/R组相比,OGD/R+Sal A 5和10μmol·L^(-1)和OGD/R+Eda组Keap1和胞浆Nrf2蛋白表达显著降低,胞核Nrf2,HO-1和NQO1蛋白表达显著升高,p-NF-κB p65蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。OGD/R+ML385组与OGD/R组相比,OGD/R+ML385+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组分别与OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组相比,Keap1蛋白表达显著升高,Nrf2胞浆和胞核、HO-1和NQO1蛋白表达显著降低,p-NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论Sal A减轻OGD/R损伤的BV2细胞炎症反应和氧化应激,其作用机制可能是激活Keap1/Nrf2通路和抑制NF-κB通路。展开更多
文摘目的:基于核因子红系2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路探讨桃红四物汤加味对糖尿病肾病(DKD)大鼠肾损伤的影响。方法:选取8只SD大鼠作为对照组,其余37只大鼠采用高糖高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素(35 mg/kg)建立DKD模型,成模的33只大鼠分为模型组、厄贝沙坦组(13.5 mg/kg)、桃红四物汤加味组(6.48 g/kg)。各组大鼠灌胃给予相应药物和水,共16周。末次给药后检测各组大鼠空腹血糖、血脂、肾功能、24 h尿蛋白定量(24 h UTP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)的变化,观察大鼠肾脏病理变化,检测大鼠肾组织中TNF-α、IL-1βmRNA表达水平,Nrf2、HO-1、NAD(P)H醌氧化还原酶1(NQO1)、转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))、纤连蛋白(FN)mRNA和蛋白的表达水平。结果:与模型组比较,桃红四物汤加味组大鼠血脂、肾功能、24 h UTP显著改善(P<0.05);肾脏病理损伤和纤维化程度减轻;TNF-α、IL-1β含量和mRNA表达水平显著下降(P<0.05);SOD、GSH-Px活性量显著增高(P<0.05),MDA含量显著减少(P<0.05);Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA和蛋白的表达水平显著上升(P<0.05),TGF-β_(1)、FN表达水平显著下降(P<0.05)。结论:桃红四物汤加味具有肾保护作用,这可能与其上调Nrf2/HO-1通路相关蛋白表达,减轻炎症反应和氧化应激有关。
文摘目的:探究阿魏酸钠(SF)通过miR-216b-3p/Nrf2通路对缺氧缺血性脑病(HIE)胚胎大鼠大脑的干预作用以及减轻氧化应激损伤的作用机制。方法:将成年雌性SD大鼠和雄鼠,按照3∶1比例合笼获得怀孕的雌鼠。然后将孕鼠分为假手术组(sham)、缺氧缺血性脑病模型组(HIE)、SF低剂量组(HIE+SF-L)和SF高剂量组(HIE+SF-H)。通过无创止血钳夹闭子宫两侧动脉和卵巢血管法制备胚胎大鼠HIE模型。SF治疗组腹膜腔注射SF。采用HE染色观察胚胎大鼠大脑皮质的病理变化;免疫荧光观察核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)、过氧化还原酶1(PRDX1)的表达情况;Western Blot检测胚胎大鼠脑组织中Nrf2和PRDX1蛋白的表达;real time RT-PCR检测miR-216b-3p的表达以及Nrf2和PRDX1的mRNA表达;WST-8法和TBA法检测脑组织中的超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:与sham组对比,HIE组胚胎大鼠的大脑损伤加重,病理改变明显;HIE组中Nrf2蛋白表达和mRNA水平降低(P<0.05),PRDX1的蛋白水平和mRNA水平显著上调(P<0.05),miR-216b-3p表达水平显著升高(P<0.05);并且Nrf2的平均荧光强度显著降低(P<0.05),PRDX1的平均荧光强度显著增加(P<0.05);SOD活性显著下调,MDA含量显著增加(P<0.05)。与HIE组对比,各剂量SF组的大脑皮质病理结构明显改善,脑损伤减轻;Nrf2和PRDX1的蛋白表达、mRNA水平以及平均荧光强度均显著上升(P<0.05);miR-216b-3p表达水平均显著下调,以SF高剂量组下调最为显著(P<0.05);并且SOD活性显著上调,MDA含量显著下调(P<0.05)。结论:SF通过miR-216b-3p/Nrf2信号通路在HIE的发生发展过程中发挥重要作用,并减轻胚胎大鼠受到的氧化应激损伤。
文摘目的探讨丹酚酸A(Sal A)对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)损伤的BV2细胞炎症反应和氧化应激的影响及可能机制。方法用含Na_(2)S_(2)O_(4)10 mmol·L^(-1)的无糖Earle′s平衡盐缓冲液建立BV2细胞的OGD/R损伤模型,加入Na_(2)S_(2)O_(4)无糖Earle′s平衡盐缓冲液,置培养箱(37℃,5%CO_(2))中培养1.5 h(氧糖剥夺)后换为正常培养基培养24 h(再灌注)。随后实验分为细胞对照组、OGD/R组、OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组、OGD/R+ML385组、OGD/R+ML385+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组及OGD/R+依达拉奉(Eda,50μmol·L^(-1))组,继续培养24 h。(1)CCK8法测定细胞存活率。(2)ELISA检测细胞上清中白细胞介素1β(IL^(-1)β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL^(-1)0、IL-4、转化生长因子β(TGF-β)含量;化学荧光法检测细胞活性氧(ROS)含量;比色法测定细胞丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和氯霉素乙酰转移酶(CAT)活性。(3)Western印迹法检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子红系2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、前醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白表达水平及核因子κB p65蛋白磷酸化(p-NF-κB p65)水平。结果(1)与细胞对照组相比,OGD/R组细胞存活率显著降低(P<0.01);与OGD/R组相比,OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组细胞存活率显著升高(P<0.05,P<0.01)。(2)与细胞对照组相比,OGD/R组IL^(-1)β,IL-6和TNF-α含量显著升高,IL^(-1)0,IL-4和TGF-β含量显著降低,ROS和MDA含量显著升高,SOD,CAT和GSH-Px活性显著降低(P<0.01);与OGD/R组相比,OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)和OGD/R+Eda组IL-6含量显著降低,IL^(-1)0,IL-4和TGF-β含量显著增加,ROS和MDA含量显著降低,SOD,CAT和GSH-Px活性显著升高(P<0.05,P<0.01)。(3)与细胞对照组相比,OGD/R组p-NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.01);与OGD/R组相比,OGD/R+Sal A 5和10μmol·L^(-1)和OGD/R+Eda组Keap1和胞浆Nrf2蛋白表达显著降低,胞核Nrf2,HO-1和NQO1蛋白表达显著升高,p-NF-κB p65蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。OGD/R+ML385组与OGD/R组相比,OGD/R+ML385+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组分别与OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组相比,Keap1蛋白表达显著升高,Nrf2胞浆和胞核、HO-1和NQO1蛋白表达显著降低,p-NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论Sal A减轻OGD/R损伤的BV2细胞炎症反应和氧化应激,其作用机制可能是激活Keap1/Nrf2通路和抑制NF-κB通路。
