目的红景天苷是我国传统中药红景天的主要活性成分,具有显著的抗缺氧缺血活性。文中研究侧链失碳红景天苷类似物N04对缺氧损伤血管内皮细胞缺氧诱导因子(HIF-1α)相关因子表达的影响。方法取对数生长期人脐静脉内皮细胞EA.hy926细胞随...目的红景天苷是我国传统中药红景天的主要活性成分,具有显著的抗缺氧缺血活性。文中研究侧链失碳红景天苷类似物N04对缺氧损伤血管内皮细胞缺氧诱导因子(HIF-1α)相关因子表达的影响。方法取对数生长期人脐静脉内皮细胞EA.hy926细胞随机分为常氧对照组、缺氧模型组、红景天苷组(1×10-6mol/L),以及N04高浓度(1×10-6mol/L)、中浓度(1×10-7mol/L)、低浓度(1×10-8mol/L)干预组。除常氧对照组外,其他各组均剥夺培养介质DMEM中的糖与血清,培养于95%N2+5%CO2环境中,建立EAhy926内皮细胞缺氧模型,红景天苷组及N04高、中、低浓度组分别给予相应药物干预处理。采用MTT法检测细胞活力,分光光度法检测细胞外乳酸脱氢酶(LDH)活性,RT-PCR方法检测细胞HIF-1α和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达水平,Western blot方法检测细胞HIF-1α,VEGF和肿瘤抑制蛋白VHL(p-VHL)蛋白水平,ELISA方法检测细胞内皮型一氧化氮合酶(e NOS)活性。结果与常氧对照组比较,缺氧模型组细胞活力降低(0.51±0.05 vs 0.27±0.02,P<0.01)、LDH水平升高[(6.65±1.43)U/L vs(78.82±2.33)U/L,P<0.01]、e NOS活性下降[(1.56±0.23)U/100 m L vs(1.16±0.20)U/100 m L,P<0.01];与缺氧模型组比较,N04高、中、低浓度组细胞活力(0.42±0.05、0.40±0.03、0.37±0.04)升高,LDH水平[(53.05±3.90)、(58.42±4.45)、(62.73±3.63)U/L]降低,e NOS活性[(3.01±0.47)、(2.60±0.26)、(2.32±0.29)U/100m L]增加,红景天苷组e NOS活性[(2.33±0.49)U/100 m L]亦增加,差异均有统计学意义(P<0.01);与红景天苷组比较,N04高、中浓度组细胞活力升高(P<0.05),N04高浓度组e NOS水平升高(P<0.01),N04中、低浓度组LDH水平升高(P<0.05)。与常氧对照组比较,缺氧模型组HIF-1αmRNA、HIF-1α蛋白和VEGF蛋白表达升高(P<0.01),PVHL蛋白表达降低(P<0.01);与缺氧模型组比较,N04高、中、低浓度组和红景天苷组HIF-1αmRNA、HIF-1α蛋白、VEGF mRNA水平下调,p VHL蛋白表达增加(P<0.05);与红景天苷组比较,N04中、低浓度组VEGF mRNA和HIF-1α蛋白表达均降低(P<0.05)。结论 N04在缺氧时可能通过HIF-1α调控其相关因子VEGF及e NOS的表达,从而对内皮细胞缺氧损伤起到保护作用。展开更多
文摘目的红景天苷是我国传统中药红景天的主要活性成分,具有显著的抗缺氧缺血活性。文中研究侧链失碳红景天苷类似物N04对缺氧损伤血管内皮细胞缺氧诱导因子(HIF-1α)相关因子表达的影响。方法取对数生长期人脐静脉内皮细胞EA.hy926细胞随机分为常氧对照组、缺氧模型组、红景天苷组(1×10-6mol/L),以及N04高浓度(1×10-6mol/L)、中浓度(1×10-7mol/L)、低浓度(1×10-8mol/L)干预组。除常氧对照组外,其他各组均剥夺培养介质DMEM中的糖与血清,培养于95%N2+5%CO2环境中,建立EAhy926内皮细胞缺氧模型,红景天苷组及N04高、中、低浓度组分别给予相应药物干预处理。采用MTT法检测细胞活力,分光光度法检测细胞外乳酸脱氢酶(LDH)活性,RT-PCR方法检测细胞HIF-1α和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达水平,Western blot方法检测细胞HIF-1α,VEGF和肿瘤抑制蛋白VHL(p-VHL)蛋白水平,ELISA方法检测细胞内皮型一氧化氮合酶(e NOS)活性。结果与常氧对照组比较,缺氧模型组细胞活力降低(0.51±0.05 vs 0.27±0.02,P<0.01)、LDH水平升高[(6.65±1.43)U/L vs(78.82±2.33)U/L,P<0.01]、e NOS活性下降[(1.56±0.23)U/100 m L vs(1.16±0.20)U/100 m L,P<0.01];与缺氧模型组比较,N04高、中、低浓度组细胞活力(0.42±0.05、0.40±0.03、0.37±0.04)升高,LDH水平[(53.05±3.90)、(58.42±4.45)、(62.73±3.63)U/L]降低,e NOS活性[(3.01±0.47)、(2.60±0.26)、(2.32±0.29)U/100m L]增加,红景天苷组e NOS活性[(2.33±0.49)U/100 m L]亦增加,差异均有统计学意义(P<0.01);与红景天苷组比较,N04高、中浓度组细胞活力升高(P<0.05),N04高浓度组e NOS水平升高(P<0.01),N04中、低浓度组LDH水平升高(P<0.05)。与常氧对照组比较,缺氧模型组HIF-1αmRNA、HIF-1α蛋白和VEGF蛋白表达升高(P<0.01),PVHL蛋白表达降低(P<0.01);与缺氧模型组比较,N04高、中、低浓度组和红景天苷组HIF-1αmRNA、HIF-1α蛋白、VEGF mRNA水平下调,p VHL蛋白表达增加(P<0.05);与红景天苷组比较,N04中、低浓度组VEGF mRNA和HIF-1α蛋白表达均降低(P<0.05)。结论 N04在缺氧时可能通过HIF-1α调控其相关因子VEGF及e NOS的表达,从而对内皮细胞缺氧损伤起到保护作用。
