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粪肠球菌TLME3株AceA基因的克隆和序列分析 被引量:2
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作者 聂鑫 高原 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期837-840,共4页
目的了解粪肠球菌胶原黏附素A(AceA)基因及其编码蛋白的遗传变异情况,为筛选动物粪肠球菌性传染病诊断及保护性抗原基因奠定基础。方法根据粪肠球菌B-343/TX2783株AceA基因序列设计引物,对粪肠球菌TLME3株总DNA进行PCR扩增,产物经胶回... 目的了解粪肠球菌胶原黏附素A(AceA)基因及其编码蛋白的遗传变异情况,为筛选动物粪肠球菌性传染病诊断及保护性抗原基因奠定基础。方法根据粪肠球菌B-343/TX2783株AceA基因序列设计引物,对粪肠球菌TLME3株总DNA进行PCR扩增,产物经胶回收试剂盒纯化回收,与pMD18-T连接,转化入E.coli DH5α感受态细胞中,筛选阳性克隆进行测序。使用Lasergene7.0、BLAST、MEGA 4.0等生物学软件,对克隆基因及其编码蛋白进行序列分析并生成系统进化发育树,计算基因核苷酸及编码氨基酸的变异率。结果成功克隆了粪肠球菌TLME3株AceA基因,阅读框为918bp。与BLASTn和BLASTp搜索出的58个核苷酸和84个氨基酸同源序列的同源性均为96%~100%,氨基酸变异率为1.63%。结论 TLME3AceA基因很保守,可以作为动物粪肠球菌性传染病诊断及保护性抗原候选基因。 展开更多
关键词 粪肠球菌 AceA 基因克隆 序列分析 系统进化发育树 诊断抗原 保护性抗原
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致鹅败血症粪肠球菌溶血素激活因子基因克隆及序列分析
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作者 狄婷婷 高原 聂鑫 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期683-688,共6页
目的了解粪肠球菌溶血素激活因子(CylA)基因的遗传变异情况。方法根据GenBank上已发表的粪肠球菌CylA基因序列设计2对特异性引物,对临床分离的4株致鹅败血症粪肠球菌CylA基因进行克隆及序列测定,并与国外从人体分离的和国内从猪体分离的... 目的了解粪肠球菌溶血素激活因子(CylA)基因的遗传变异情况。方法根据GenBank上已发表的粪肠球菌CylA基因序列设计2对特异性引物,对临床分离的4株致鹅败血症粪肠球菌CylA基因进行克隆及序列测定,并与国外从人体分离的和国内从猪体分离的各4株致病性粪肠球菌的CylA基因,用Lasergene 7.0软件进行同源性比对和构建系统进化发育树。结果鹅源4株菌CylA基因均长1 239bp,有1个完整的开放阅读框,编码412个氨基酸;序列中无缺失和插入,仅有1处未引起其编码氨基酸变异的无义突变。其余8株菌CylA基因及推导的氨基酸变异程度均不大。4株鹅源菌CylA基因推导的氨基酸同源性为100%;与国外人源菌和国内猪源菌CylA基因推导的氨基酸遗传距离也较近,同源性为98.6%~100%。结论粪肠球菌CylA基因高度保守,有可能成为检测诊断和免疫预防的靶基因。 展开更多
关键词 粪肠球菌 溶血素激活因子 克隆 同源性比对 系统进化发育树
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一株致妊娠期母貉流产奇异变形杆菌分离鉴定及特征分析 被引量:10
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作者 张召兴 高桂生 史秋梅 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第5期107-113,共7页
为明确引起妊娠期母貉流产的病原菌,本试验采集妊娠期母貉流产阴道分泌物、胎儿等病料组织,采用PCR/RT-PCR检测其阿留申病毒、伪狂犬病病毒、犬瘟热病毒等病原,采用细菌分离培养、生化试验、16S rRNA基因测序和序列同源性分析方法对致... 为明确引起妊娠期母貉流产的病原菌,本试验采集妊娠期母貉流产阴道分泌物、胎儿等病料组织,采用PCR/RT-PCR检测其阿留申病毒、伪狂犬病病毒、犬瘟热病毒等病原,采用细菌分离培养、生化试验、16S rRNA基因测序和序列同源性分析方法对致母貉流产病原分离鉴定,采用人工感染试验、K-B药敏纸片法检测其的致病性及耐药性。结果显示,阿留申病毒、伪狂犬病病毒、犬瘟热病毒检测为阴性;从同一只流产母貉(阴道分泌物、胎儿)分离得到1株病原菌(H1株),该菌的16S rRNA序列测序结果与GenBank中公布的12株奇异变形杆菌(PM)同源性为96.5%~100.0%,H1株与5株PM参考株位于一个分支,亲缘关系较近,H1株被鉴定为PM;H1株的对小白鼠的半数致死量(LD_(50))为3.16×10^(6)CFU/mL;H1株携带9种毒力基因hpmA、rsbA、atfA、ucaA、ureC、zapA、pmf、fliL、mrpA;H1株对头孢噻呋、恩诺沙星、林可霉素等7种药物高敏,对其他药物具有不同程度耐药性。本研究首次从妊娠期母貉流产病例中分离到致病性PM,在养殖过程应该对该病进行有效的防控。 展开更多
关键词 母貉 流产 奇异变形杆菌 系统进化发育树 LD50 耐药性
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DNA条形码技术在白云山国家森林公园苔藓植物群落研究中的应用 被引量:6
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作者 胡永春 杨子 +6 位作者 习靓靓 李雨姗 周紫羽 符强 邵毅贞 叶永忠 袁志良 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期836-844,共9页
为了研究DNA条形码技术在苔藓植物群落中的应用,基于白云山国家森林公园4个1 hm2(100 m×100 m)森林动态监测样地,对样地内苔藓植物进行全面采集。采用rps4、rbcl、trnL-F 3个基因片段进行单一和组合DNA条形码测序,评价DNA条形码在... 为了研究DNA条形码技术在苔藓植物群落中的应用,基于白云山国家森林公园4个1 hm2(100 m×100 m)森林动态监测样地,对样地内苔藓植物进行全面采集。采用rps4、rbcl、trnL-F 3个基因片段进行单一和组合DNA条形码测序,评价DNA条形码在苔藓植物中的应用成功率,并基于DNA序列构建苔藓植物系统发育进化关系树。鉴定结果表明,苔藓植物共71种,隶属于25科45属,其中藓类21科41属66种,苔类4科4属5种;单一DNA条形码片段rps4基因综合成功率最高(95.81%),其次是trnL-F基因(85.53%)和rbcL基因(67.8%);组合DNA条形码片段综合成功率均在76.16%以上。采用DNA条形码片段构建的苔藓植物系统发育进化关系树显示,白云山国家森林公园苔藓植物群落共形成2大分支,支持率高达98%。 展开更多
关键词 白云山国家森林公园 苔藓植物 DNA条形码 系统发育进化关系
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