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杆状病毒表达系统表达BCoV纤突蛋白及其对小鼠的免疫原性 被引量：4
1
作者 喻琦胜 朱庆 +6 位作者 周群 宋鑫 张家祺 陈涛云 徐林 张朝辉 张斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期640-648,共9页
旨在为表达牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)的纤突蛋白(S蛋白),并评价其作为免疫原免疫小鼠后的免疫效果。本研究以BCoV/SWUN/HXD-4/2021株的全长S基因为模板,针对昆虫细胞进行密码子优化和合成,构建重组质粒pFastBac-Dual-S,与DH1... 旨在为表达牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)的纤突蛋白(S蛋白),并评价其作为免疫原免疫小鼠后的免疫效果。本研究以BCoV/SWUN/HXD-4/2021株的全长S基因为模板,针对昆虫细胞进行密码子优化和合成,构建重组质粒pFastBac-Dual-S,与DH10Bac同源重组后转染昆虫细胞收获重组杆状病毒rpFastBac-S,利用基因组PCR、免疫印迹法(Western blot)和间接免疫荧光试验对其进行鉴定,测定杆状病毒滴度。优化和筛选感染剂量对蛋白表达的影响,超速离心纯化蛋白,免疫小鼠和评估其免疫效果。结果显示:优化后全长4108 bp的BCoV S基因CAI(密码子适应指数)从0.39调整为0.87,平均GC含量从35.8%调整为50.6%。经双酶切、PCR验证,重组质粒与重组杆粒均构建成功。用5μg重组杆粒Bacmid-S转染Sf9细胞并传代至第四代后细胞病变趋于稳定,感染杆状病毒约20 h后产生典型病变,收获重组杆状病毒进行鉴定。PCR电泳结果显示重组杆粒携带S目的蛋白基因;间接免疫荧光试验显示,试验组观察到特异性绿色荧光;Western blot结果显示重组杆状病毒rpFastBac-S所表达的蛋白为S目的蛋白,目的条带位于250 ku左右,感染剂量MOI=0.5时蛋白表达量最高。将50μg蛋白、20μg CpG免疫增强剂与等体积MF59佐剂充分混合乳化后,肌肉注射免疫小鼠,间接ELISA试验结果显示,小鼠免疫蛋白后产生了IgG特异性抗体,且抗体水平高于佐剂对照组(P<0.001),最高抗体效价达1∶12800;微量中和试验结果显示,小鼠血清中和效价最高达1∶224,试验组中和效价平均值高于灭活病毒组,但统计学差异不显著(P>0.05)。本研究利用杆状病毒表达系统表达了牛冠状病毒S蛋白,并对S蛋白免疫保护效果做了进一步评价,为后续牛冠状病毒疫苗研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 S蛋白 杆状病毒表达系统 免疫原性
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P2X_7受体在神经系统表达及功能的研究进展 被引量：5
2
作者 王丽雁 蔡文琴 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期813-816,共4页
P2X受体是对ATP及其类似物敏感的配体门控离子通道。迄今已从哺乳动物成功克隆出7种P2X亚单位（P2X1-7）。P2X7受体（P2X7 receptor，P2XTR，曾被称为P2Z）因其独特的结构和功能特点而倍受关注。P2X7R广泛分布于免疫细胞、造血细胞、上... P2X受体是对ATP及其类似物敏感的配体门控离子通道。迄今已从哺乳动物成功克隆出7种P2X亚单位（P2X1-7）。P2X7受体（P2X7 receptor，P2XTR，曾被称为P2Z）因其独特的结构和功能特点而倍受关注。P2X7R广泛分布于免疫细胞、造血细胞、上皮细胞、内皮细胞、骨组织等多种细胞和组织。在神经系统，P2X7R参与神经递质释放、胶质细胞活化，对病理状态下多个信号通路具有关键的调节作用。 展开更多
关键词 P2X7受体 神经系统 系统表达 配体门控离子通道 RECEPTOR 神经递质释放 P2X受体 哺乳动物
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禽偏肺病毒C型核衣壳N蛋白的哺乳动物细胞表达系统表达及鉴定 被引量：2
3
作者 李子璇 韦莉 +7 位作者 王菁 朱姗姗 张春燕 柳舒航 全荣 阎旭 陈武 刘爵 《北京农学院学报》 2014年第4期49-53,共5页
利用哺乳动物细胞表达系统对禽偏肺病毒C型核衣壳N蛋白进行表达,并检测所表达融合蛋白的抗原性。首先将N基因克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构建重组真核表达载体,然后将阳性重组质粒转染BHK-21细胞,通过倒置荧光显微镜和共聚焦显微镜检... 利用哺乳动物细胞表达系统对禽偏肺病毒C型核衣壳N蛋白进行表达,并检测所表达融合蛋白的抗原性。首先将N基因克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构建重组真核表达载体,然后将阳性重组质粒转染BHK-21细胞,通过倒置荧光显微镜和共聚焦显微镜检测N蛋白的表达,并用Western blot检测表达蛋白的抗原性。结果显示,禽偏肺病毒核衣壳N蛋白主要表达在细胞浆中,在转染后48h后表达量最高;与抗N蛋白抗体有抗原性,所表达核衣壳N融合蛋白大小为72kDa左右,与预期结果一致。结论,本试验成功应用哺乳动物表达系统表达了禽偏肺病毒C型核衣壳N蛋白,表达蛋白具有抗原性,为与禽偏肺病毒核衣壳N蛋白的相关研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽偏肺病毒核衣壳N蛋白 哺乳动物细胞表达系统 显微镜观察 WESTERN BLOTTING
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利用杆状病毒系统表达重组HBV聚合酶RT区段
4
作者 李晖 王程 +3 位作者 余治健 耿书英 王景玲 侯金林 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第13期73-74,共2页
目的利用杆状病毒表达载体系统制备重组HBV聚合酶RT区段蛋白。方法构建含有HBV P基因RT区段的杆状病毒转移载体pFastBac HT-RT,转化大肠埃希菌DH10B-ac进行重组,提取重组Bacmid DNA质粒,转染昆虫细胞Sf9获得含有HBVP基因RT区段的重组杆... 目的利用杆状病毒表达载体系统制备重组HBV聚合酶RT区段蛋白。方法构建含有HBV P基因RT区段的杆状病毒转移载体pFastBac HT-RT,转化大肠埃希菌DH10B-ac进行重组,提取重组Bacmid DNA质粒,转染昆虫细胞Sf9获得含有HBVP基因RT区段的重组杆状病毒。重组的杆状病毒再感染Sf9细胞进行HBVP基因RT区段蛋白表达,通过Western blot检测表达情况。结果成功构建了含HBV P基因RT区段的重组杆状病毒,昆虫细胞Sf9中能检测到HBV P基因RT区段蛋白的表达。结论利用杆状病毒表达系统能成功地表达HBVP基因RT区段蛋白。 展开更多
关键词 HBV P基因 杆状病毒表达载体系统 昆虫细胞
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家蚕丝素重链表达系统表达外源蛋白的应用研究进展
5
作者 张雨丽 王平阳 +4 位作者 王霞 崔秋英 黄旭华 董桂清 张桂征 《广西蚕业》 2023年第1期22-27,共6页
家蚕丝腺拥有出色的丝蛋白合成能力,家蚕又具有容易饲养、生长周期短等优点,利用家蚕丝腺来生产大量有价值的蛋白,生产出的重组蛋白可在生物、医药、材料学等领域广泛应用,所以家蚕丝腺是一种理想的生物反应器。高效表达系统的构建是家... 家蚕丝腺拥有出色的丝蛋白合成能力,家蚕又具有容易饲养、生长周期短等优点,利用家蚕丝腺来生产大量有价值的蛋白,生产出的重组蛋白可在生物、医药、材料学等领域广泛应用,所以家蚕丝腺是一种理想的生物反应器。高效表达系统的构建是家蚕丝腺生物反应器产生重组蛋白的关键步骤之一。为了构建出更加优良的表达系统,结合国内外研究进展,对家蚕丝素重链表达系统的建立、发展与应用情况进行综述,为该系统的深入研究与应用提供参考。 展开更多
关键词 家蚕 丝腺生物反应器 丝素重链 表达系统
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鸭IFN-α昆虫杆状病毒表达系统的建立及其抗新型鸭呼肠孤病毒活性研究
6
作者 孔雨心 柳美玲 +4 位作者 于鲁娜 鹿益豪 张兆鹏 傅绩 李宁 《中国动物检疫》 2025年第3期119-126,共8页
为利用昆虫杆状病毒表达系统表达鸭干扰素α(inteferon-α,IFN-α),并研究其对新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)的抗病毒活性,针对鸭IFN-α序列构建重组质粒PFastBac-DuIFN-α,转化DH10Bac细胞后提取重组杆粒B acmid-DuIFN-... 为利用昆虫杆状病毒表达系统表达鸭干扰素α(inteferon-α,IFN-α),并研究其对新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)的抗病毒活性,针对鸭IFN-α序列构建重组质粒PFastBac-DuIFN-α,转化DH10Bac细胞后提取重组杆粒B acmid-DuIFN-α,然后将其转染Sf9昆虫细胞并收集上清,盲传3代后收集病变细胞,经超声纯化获得重组鸭IFN-α蛋白。Western blot鉴定结果显示,鸭IFN-α在细胞质中表达,大小约为23 kDa。经测定,重组鸭IFN-α蛋白效价为2.14×10^(5)U/mL,以其处理鸭胚成纤维细胞(DEF)后,可极显著刺激蛋白激酶R(protein kinase R,PKR)、抗黏病毒蛋白(myxovirus resistant,Mx)和寡腺苷酸合成酶(oligadenylate syntase,OAS)编码基因的表达(P<0.01)。进一步将鸭IFN-α蛋白接种5日龄樱桃谷鸭(2.14×10^(3) U/mL,0.2mL/只),2 d后再进行NDRV攻毒试验(1000 TCID_(50)/0.1 mL,0.2 mL/只),同时设置阴性对照组和仅NDRV攻毒组。组织病理学检测显示,仅肌注NDRV的攻毒组雏鸭脾出现大量淋巴细胞崩解坏死,数量减少;而先肌注鸭IFN-α蛋白后攻毒NDRV的试验组雏鸭病变较轻,仅有少量淋巴细胞坏死。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测发现,试验组雏鸭的排毒量极显著低于攻毒组(P<0.01),且其肝和脾中NDRV载量也极显著低于攻毒组(P<0.01),同时试验组Mx和OAS表达量极显著升高(P<0.01)。结果表明,本研究通过昆虫杆状病毒系统成功表达出了重组鸭IFN-α蛋白,其具有较好的抗NDRV活性。本研究为进一步探索鸭IFN-α对NDRV感染等鸭病毒性疾病的防治机制提供了技术支持。 展开更多
关键词 干扰素Α 鸭 昆虫杆状病毒表达系统 新型鸭呼肠孤病毒 抗病毒活性
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大肠埃希氏菌表达系统在猪亚单位疫苗中的应用
7
作者 邓锴 扶星星 +5 位作者 朱玲 王永胜 吴福文 徐志文 赵兴洪 万红平 《动物医学进展》 北大核心 2024年第12期117-121,共5页
大肠埃希氏菌表达系统是目前应用最广、研究最为透彻的外源蛋白表达系统,具有遗传背景清楚、易培养和控制、转化操作简单、表达水平高、成本低、周期短等优点深受疫苗研究者的青睐,但也存在易形成包涵体和无法对蛋白修饰等问题需要对其... 大肠埃希氏菌表达系统是目前应用最广、研究最为透彻的外源蛋白表达系统,具有遗传背景清楚、易培养和控制、转化操作简单、表达水平高、成本低、周期短等优点深受疫苗研究者的青睐,但也存在易形成包涵体和无法对蛋白修饰等问题需要对其进行优化。生猪作为我国最重要的经济动物,其疫病安全防控对养猪业和我国人民的健康可持续发展有重要意义。论文对近年来大肠埃希氏菌表达系统在猪病毒性亚单位疫苗中的研究进展进行概述,为促进大肠埃希氏菌表达系统改进及其亚单位疫苗后续应用提供参考。 展开更多
关键词 大肠埃希氏菌表达系统 生猪 疫病 亚单位疫苗
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基于杆状病毒-昆虫细胞表达系统的猪脑心肌炎病毒样颗粒的表达及鉴定
8
作者 王运航 景伟 +3 位作者 穆素雨 孙世琪 郭慧琛 白满元 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4571-4578,共8页
脑心肌炎(encephalomyocarditis)是由脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)引起的以猪的脑炎、心肌炎为主要特征的病毒性人畜共患病,可感染多种哺乳动物,目前国内尚无有效疫苗。本研究旨在开发一款安全有效的疫苗以防控该病... 脑心肌炎(encephalomyocarditis)是由脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)引起的以猪的脑炎、心肌炎为主要特征的病毒性人畜共患病,可感染多种哺乳动物,目前国内尚无有效疫苗。本研究旨在开发一款安全有效的疫苗以防控该病。采用P1、3CD共表达的构建策略,利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统获得EMCV病毒样颗粒(virus-like particals,VLPs)并将其免疫小鼠,初步评价其在小鼠体内的免疫应答效果。结果显示,免疫组小鼠特异性抗体滴度达到1∶192以上,中和抗体滴度达到1∶64以上,且与ISA206佐剂混合使用可诱导机体产生更高的抗体水平。IL-4、IFN-γ、IL-5、TNF-α细胞因子水平均可达到20 pg·mL^(-1),且明显高于PBS组。综上,本研究获得的EMCV病毒样颗粒疫苗可以诱导机体产生良好的细胞免疫和体液免疫应答,还能诱导炎症细胞因子的产生,有助于激发机体的免疫反应,增强疫苗的保护效果,为EMCV的防控提供了理论依据和技术储备。 展开更多
关键词 杆状病毒-昆虫细胞表达系统 脑心肌炎病毒 病毒样颗粒
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乳铁蛋白的重组表达系统及法规管理现状概述
9
作者 吴晓文 张长太 +2 位作者 李佳佳 凡孝菊 周景文 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期321-329,共9页
乳铁蛋白是一种铁结合糖蛋白,广泛存在于哺乳动物的乳汁和黏膜分泌物当中。乳铁蛋白具有广谱抑菌、抗病毒、免疫调节等生理功能,在婴幼儿配方乳粉、营养补充剂、化妆品等领域都有应用。近年来,随着基因工程技术的不断发展,来自不同物种... 乳铁蛋白是一种铁结合糖蛋白,广泛存在于哺乳动物的乳汁和黏膜分泌物当中。乳铁蛋白具有广谱抑菌、抗病毒、免疫调节等生理功能,在婴幼儿配方乳粉、营养补充剂、化妆品等领域都有应用。近年来,随着基因工程技术的不断发展,来自不同物种的乳铁蛋白在常见的原核体系、真核体系与转基因哺乳动物中均得到了成功表达,重组产物的表达量及其与天然乳铁蛋白的结构相似度也在不断提升。该文对乳铁蛋白的生物学活性、重组表达系统以及目前的法规管理情况进行综述,并讨论了重组乳铁蛋白的研究难点和未来发展方向。 展开更多
关键词 乳铁蛋白 生理活性 重组表达系统 法规 应用
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枯草芽孢杆菌作为外源基因表达系统的研究进展 被引量：27
10
作者 沈卫锋 牛宝龙 +2 位作者 翁宏飚 何丽华 孟智启 《浙江农业学报》 CSCD 2005年第4期234-238,共5页
枯草芽孢杆菌是目前研究较为详尽的外源基因表达宿主,但由于受自身分泌蛋白酶多、构建的表达质粒不太稳定等因素影响,其应用受到一定的限制。文章综述了枯草芽孢杆菌基因组的特征、蛋白的分泌机制、重组表达质粒不稳定的原因,指出了枯... 枯草芽孢杆菌是目前研究较为详尽的外源基因表达宿主,但由于受自身分泌蛋白酶多、构建的表达质粒不太稳定等因素影响,其应用受到一定的限制。文章综述了枯草芽孢杆菌基因组的特征、蛋白的分泌机制、重组表达质粒不稳定的原因,指出了枯草芽孢杆菌作为外源蛋白表达系统的瓶颈及今后的研究重点。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 基因组 表达系统
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细粒棘球蚴Eg95s基因的串联表达及表达系统优化 被引量：8
11
作者 刘丹 贾红 +2 位作者 侯绍华 丁敏 朱鸿飞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第8期33-37,共5页
为研制新型棘球蚴病基因工程疫苗,根据GenBank公布的细粒棘球蚴Eg95基因序列,针对其中一段348 bp高度亲水的优势表位序列设计引物,扩增Eg95s基因,利用同尾酶法基因同向串联方案,获得3拷贝Eg95s串联体。分别用两种表达载体pGEX-6p-1和pET... 为研制新型棘球蚴病基因工程疫苗,根据GenBank公布的细粒棘球蚴Eg95基因序列,针对其中一段348 bp高度亲水的优势表位序列设计引物,扩增Eg95s基因,利用同尾酶法基因同向串联方案,获得3拷贝Eg95s串联体。分别用两种表达载体pGEX-6p-1和pET-32a构建重组质粒,转化入3种大肠杆菌表达宿主BL21(DE3)、Rosseta(DE3)和Origami(DE3),对其进行IPTG诱导表达,经免疫印迹分析结果表明,均能正确表达具有免疫原性的Eg95s蛋白。通过重组蛋白的表达量、可溶性、纯化方法等方面的比较,对Eg95s重组表达系统的载体及宿主菌进行了优化,结果表明,3拷贝的串联Eg95s在以pET-32a为表达载体,Rosseta(DE3)为宿主菌的系统中表达最佳。最终获得了表达量高、可溶性好、纯化方便的Eg95s重组蛋白表达系统,为大规模生产棘球蚴病基因工程疫苗提供了科学依据。 展开更多
关键词 Eg95s 串联表达 表达系统 优化
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乳酸菌食品级基因表达系统 被引量：7
12
作者 王奎明 王昌禄 +2 位作者 陈铁涛 张虎成 陈薇 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第33期10619-10621,共3页
乳酸菌是一类重要工业菌株,随着其遗传学和分子生物学研究取得长足进展,乳酸菌食品级表达系统作为高效表达系统日益受到重视。该表达系统和其他细菌表达系统相比有很多优点。介绍了糖诱导表达系统、噬菌体ф31爆发式诱导的表达系统、乳... 乳酸菌是一类重要工业菌株,随着其遗传学和分子生物学研究取得长足进展,乳酸菌食品级表达系统作为高效表达系统日益受到重视。该表达系统和其他细菌表达系统相比有很多优点。介绍了糖诱导表达系统、噬菌体ф31爆发式诱导的表达系统、乳链球菌素调控表达系统、温控表达系统等的研究进展以及这些系统的应用前景。 展开更多
关键词 乳酸菌 食品级 表达系统
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大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展 被引量：34
13
作者 祁浩 刘新利 《安徽农业科学》 CAS 2016年第17期4-6,52,共4页
由于DNA重组技术和蛋白组技术的发展与成熟,外源基因表达技术备受关注。其在生物、食品、工业以及医学领域发挥着举足轻重的作用。以原核生物细胞及真核生物细胞作为表达系统,进行目的基因序列的表达以生产蛋白疫苗、核酸疫苗和生物酶... 由于DNA重组技术和蛋白组技术的发展与成熟,外源基因表达技术备受关注。其在生物、食品、工业以及医学领域发挥着举足轻重的作用。以原核生物细胞及真核生物细胞作为表达系统,进行目的基因序列的表达以生产蛋白疫苗、核酸疫苗和生物酶制剂等是近年来发酵工业的新型领域。原核和真核表达系统是近年来研究和应用最广泛和最成熟的外源基因表达系统。对近年来关于大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 大肠杆菌表达系统 酵母表达系统 表达载体 外源基因 宿主菌株
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白藜芦醇及其生物工程表达系统的研究进展 被引量：4
14
作者 宋洋波 刘延琳 +2 位作者 刘树文 吴嘉慧 惠竹梅 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第13期374-378,共5页
白藜芦醇是一种天然的植物保护素,它是许多植物受到真菌感染、紫外照射或病理状况下产生的一种植物抗毒素,可以提高植物抵抗病原体的能力,并且它也具有相当的生理活性,不但具有抗氧化、抗菌、调节血脂、抗癌的保健功能,而且研究证明白... 白藜芦醇是一种天然的植物保护素,它是许多植物受到真菌感染、紫外照射或病理状况下产生的一种植物抗毒素,可以提高植物抵抗病原体的能力,并且它也具有相当的生理活性,不但具有抗氧化、抗菌、调节血脂、抗癌的保健功能,而且研究证明白藜芦醇对于多种动物有延长寿命的功效。白藜芦醇在葡萄中的合成路径以及相关各酶的研究已经取得较好的进展。更重要的是,随着生物工程技术的发展,在植物、动物和微生物中合成白藜芦醇合酶的产物已不再困难。通过对近年来在不同表达系统中合成白藜芦醇的研究进行综述,提出利用生物工程技术来合成白藜芦醇所面对的问题及将来的发展方向。 展开更多
关键词 白藜芦醇 生物工程 表达系统
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乳酸菌食品级表达系统的研究进展 被引量：4
15
作者 苏松坤 晏励民 刘芳 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1233-1238,共6页
乳酸菌是一类广泛使用的工业菌。近几十年来,乳酸菌作为同源和异源蛋白表达的宿主菌的潜在应用已得到深入研究,在此基础上建立和发展了乳酸菌食品级基因表达系统。首先介绍了乳酸菌食品级表达系统的一些基本条件,表达和标记系统的适用原... 乳酸菌是一类广泛使用的工业菌。近几十年来,乳酸菌作为同源和异源蛋白表达的宿主菌的潜在应用已得到深入研究,在此基础上建立和发展了乳酸菌食品级基因表达系统。首先介绍了乳酸菌食品级表达系统的一些基本条件,表达和标记系统的适用原则,然后追踪其前沿应用进展情况,对乳酸菌食品级基因表达系统的最新应用进行了归纳,根据此表达系统在当前食品经济中的位置,对其在食品工业、医药和保健品等领域的应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 乳酸菌 食品级 表达系统 应用
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蓝藻热休克诱导高效表达系统的构建 被引量：9
16
作者 章军 秦燕 +5 位作者 欧阳青 徐虹 黄澜 刘仁海 周克夫 楼士林 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第8期17-21,共5页
以聚球藻Synechococcussp .PCC794 2作为基因工程受体菌 ,构建了热休克诱导的高效表达系统。用PCR法扩增并克隆出Synechococcussp .PCC794 2自身的热休克基因 groESL操纵子的强启动区 (2 4 0bp) ,并紧靠其后组装上泛素 (UB)融合的胸腺素... 以聚球藻Synechococcussp .PCC794 2作为基因工程受体菌 ,构建了热休克诱导的高效表达系统。用PCR法扩增并克隆出Synechococcussp .PCC794 2自身的热休克基因 groESL操纵子的强启动区 (2 4 0bp) ,并紧靠其后组装上泛素 (UB)融合的胸腺素α1(Tα1)目的基因 ,在下游组装有rbcSpolyA终止子。此外 ,还组装了一个完整的卡那霉素抗性基因作为筛选标记基因。这样 ,就构建了完整的蓝藻的基因表达系统。经转化蓝藻Synechococcussp .PCC794 2细胞 ,在 4 2℃热诱导 30min后 ,目的基因UB Tα1得到较高水平表达 ,表达量约占可溶性蛋白的 8.7% 展开更多
关键词 蓝藻 热休克诱导 基因表达 基因工程 表达系统 卡那霉素抗性基因
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乳酸乳球菌表达系统及其启动子的研究进展 被引量：3
17
作者 王慧 劳晓 +4 位作者 黄琳琳 方以诚 熊智强 艾连中 宋馨 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第11期330-336,共7页
乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)是工业应用中一种重要的模式菌株,具有非致病性、分泌蛋白能力强、容易分离培养等特性,是异源蛋白表达和分泌的理想宿主。高效可控的启动子是实现外源蛋白高效表达的关键因素之一。根据诱导机制,启动子... 乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)是工业应用中一种重要的模式菌株,具有非致病性、分泌蛋白能力强、容易分离培养等特性,是异源蛋白表达和分泌的理想宿主。高效可控的启动子是实现外源蛋白高效表达的关键因素之一。根据诱导机制,启动子可分为组成型和诱导型。本文阐述了乳酸乳球菌表达系统及其启动子结构,总结了生物信息学预测启动子及筛选克隆新启动子的方法,并对乳酸乳球菌启动子未来的研究方向进行了展望,可为深入研究启动子的结构和功能并进一步在工业上生产外源蛋白提供参考。 展开更多
关键词 乳酸乳球菌 表达系统 启动子
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可诱导的shRNAs表达系统对HeLa细胞SMYD3基因表达的抑制 被引量：2
18
作者 王淑珍 罗学刚 +3 位作者 丁艳 申静 陆云华 奚涛 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期369-374,共6页
目的:探讨可诱导的shRNAs表达载体介导的RNA干扰技术对HeLa细胞SMYD3基因的抑制作用。方法:设计和构建由强力霉素调控产生针对SMYD3基因的shRNAs表达质粒,转染至HeLa细胞,倒置显微镜下观察细胞形态学变化,RT-PCR检测SMYD3基因的表达,MT... 目的:探讨可诱导的shRNAs表达载体介导的RNA干扰技术对HeLa细胞SMYD3基因的抑制作用。方法:设计和构建由强力霉素调控产生针对SMYD3基因的shRNAs表达质粒,转染至HeLa细胞,倒置显微镜下观察细胞形态学变化,RT-PCR检测SMYD3基因的表达,MTT法检测对细胞增殖的影响。结果:酶切鉴定、测序分析证实shRNAs表达质粒构建成功。转染HeLa细胞后,在强力霉素诱导下,受到特异SMYD3 shRNAs干扰的HeLa细胞发生了典型的凋亡形态学改变。同时SMYD3 mRNA表达下调,细胞生长受抑制。而阴性对照组和空白对照组无明显变化。结论:针对SMYD3基因的可诱导的shRNAs表达质粒转染HeLa细胞后,在强力霉素的作用下,可阻断SMYD3基因的表达,抑制HeLa细胞的增殖,并能诱导HeLa细胞凋亡。 展开更多
关键词 可诱导 shRNAs表达系统 SMYD3 抑制
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食品级乳酸菌表达系统的研究进展 被引量：11
19
作者 王莹 胡桂学 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第7期80-83,共4页
乳酸菌以其安全、操作简单等优点被广泛用于表达外源基因,在食品、农业及医药工程领域,具有广阔的应用前景,开发了一系列乳酸菌食品级基因表达系统。目前已建立了糖诱导表达系统、噬菌体φ31暴发式诱导表达系统、乳链球菌素调控表达系... 乳酸菌以其安全、操作简单等优点被广泛用于表达外源基因,在食品、农业及医药工程领域,具有广阔的应用前景,开发了一系列乳酸菌食品级基因表达系统。目前已建立了糖诱导表达系统、噬菌体φ31暴发式诱导表达系统、乳链球菌素调控表达系统、温控表达系统等。随着基因工程技术的发展,以重组乳酸菌作为基因工程菌的时代将要到来。 展开更多
关键词 乳酸菌 食品级 表达系统 基因工程
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基因表达系统研究进展 被引量：19
20
作者 孙柏欣 刘长远 +3 位作者 陈彦 赵华 赵彤华 李柏宏 《现代农业科技》 2008年第2期205-207,209,共4页
随着世界分子生物学的研究不断发展,基因表达技术有了很大的提高。到目前为止,人们已经研究出多种原核和真核表达系统用以生产重组蛋白。原核生物表达系统主要有大肠杆菌表达系统、枯草芽孢杆菌表达系统等;真核生物表达系统主要包括酵... 随着世界分子生物学的研究不断发展,基因表达技术有了很大的提高。到目前为止,人们已经研究出多种原核和真核表达系统用以生产重组蛋白。原核生物表达系统主要有大肠杆菌表达系统、枯草芽孢杆菌表达系统等;真核生物表达系统主要包括酵母表达系统、丝状真菌表达系统等。各种表达系统各具优缺点,对其进行了详细介绍。 展开更多
关键词 基因表达 原核表达系统 真核表达系统
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