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美国白蛾HcSID-1基因的克隆、表达模式分析及其在幼虫中的功能验证
被引量：
2
1
作者
王越
张苏芳
+3 位作者
徐瑶
刘福
孔祥波
张真
《林业科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2019年第10期48-56,共9页
【目的】克隆美国白蛾系统性RNA干扰缺失基因序列,对该基因进行序列特征分析和时空表达模式检测,并研究其在美国白蛾幼虫系统性RNA干扰中的功能。【方法】通过RT-PCR和RACE技术从美国白蛾幼虫中进行基因克隆,并进行生物信息学分析;利用q...
【目的】克隆美国白蛾系统性RNA干扰缺失基因序列,对该基因进行序列特征分析和时空表达模式检测,并研究其在美国白蛾幼虫系统性RNA干扰中的功能。【方法】通过RT-PCR和RACE技术从美国白蛾幼虫中进行基因克隆,并进行生物信息学分析;利用qPCR技术检测该基因在美国白蛾不同发育阶段和幼虫不同组织中的相对表达量;利用RNAi和qPCR技术验证外源dsRNA对该基因的干扰效率,以及干扰该基因表达后对其他靶标基因干扰效率的影响。【结果】从美国白蛾幼虫中克隆得到一个美国白蛾系统性RNA干扰缺失基因并命名为HcSID-1(GenBank登陆号:MG696730)。该基因全长2761 bp,开放阅读框(ORF)2613 bp,编码870个氨基酸,预测蛋白分子量为97.08 kD,理论等电点(pI)6.81,有1个19 aa的信号肽。氨基酸序列分析表明,HcSID-1蛋白有1个长N末端(308 aa),序列中后段309—855位氨基酸之间具有典型的11个跨膜结构域;系统进化分析表明HcSID-1与鳞翅目昆虫同源性较高,和家蚕的BmSID-3亲缘关系最近;时空表达分析表明,HcSID-1在美国白蛾各发育阶段和幼虫各组织中均有表达,在幼虫中肠组织表达量最高。注射HcSID-1 dsRNA可显著降低该基因在转录水平的相对表达量,且该基因的下调能降低HcChi dsRNA在美国白蛾幼虫中的RNA干扰效率。【结论】获得具有典型家族特征的美国白蛾SID-1基因序列,该基因的下调能够影响其他靶标基因dsRNA的RNAi效率,表明该基因可能具有与其他SID基因在系统性RNAi过程中相同的功能。
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关键词
美国白蛾
系统性rna干扰缺失基因
克隆表达
rna
干扰
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职称材料
腺病毒介导的shRNA下调PTEN表达对体外活化肝星状细胞增殖与凋亡的影响
被引量：
4
2
作者
郭剑
刘小娟
+7 位作者
张国尊
孙慧聪
刘林力
郭金波
刘蕾
姚冬梅
宋梅
张晓岚
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第9期1627-1632,共6页
目的:探讨腺病毒介导的shRNA下调第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)表达对体外培养的大鼠活化肝星状细胞(HSCs)增殖和凋亡的影响及其信号转导机制。方法:体外培养活化HSCs,以腺病毒为载体将靶向PTEN的shRNA干扰重组...
目的:探讨腺病毒介导的shRNA下调第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)表达对体外培养的大鼠活化肝星状细胞(HSCs)增殖和凋亡的影响及其信号转导机制。方法:体外培养活化HSCs,以腺病毒为载体将靶向PTEN的shRNA干扰重组体转染至体外活化的大鼠HSCs;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HSCs增殖;末端转移酶标记技术(TUNEL)及流式细胞术测定HSCs凋亡;Western blotting方法检测PTEN、Bax、Bcl-2、Akt、p-Akt、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达情况;实时荧光定量PCR方法检测PTEN、Akt及ERK1 mRNA表达情况。结果:(1)靶向PTEN的RNA干扰重组腺病毒成功感染体外活化HSCs,并在一定范围内呈时间依赖性地促进HSCs增殖,腺病毒感染HSCs后72 h,HSCs凋亡率显著下降(P<0.05);(2)Bax表达降低,Bcl-2表达增加(P<0.05);(3)p-Akt和p-ERK1/2蛋白表达显著增加(P<0.05);而Akt蛋白及其mRNA、ERK1蛋白及其mRNA表达均无显著改变(P>0.05)。结论:RNA干扰下调PTEN基因表达可能通过Bcl-2/Bax途径促进体外活化HSCs增殖并抑制其凋亡,此外,RNA干扰下调PTEN基因表达促进p-Akt和p-ERK1/2表达增多,提示PTEN可能通过影响PI3K/Akt和ERK1/2信号通路而在调控HSCs增殖和凋亡中发挥重要作用。
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关键词
肝星状细胞
第10号染色体
缺失
的磷酸酶和张力蛋白同源物
基因
rna
干扰
细胞增殖
细胞凋亡
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职称材料
题名
美国白蛾HcSID-1基因的克隆、表达模式分析及其在幼虫中的功能验证
被引量：
2
1
作者
王越
张苏芳
徐瑶
刘福
孔祥波
张真
机构
中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所
国家林业和草原局森林和草原病虫害防治总站
出处
《林业科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2019年第10期48-56,共9页
基金
林业公益性行业科研专项(201504302)
中国林科院森环森保所基本科研业务费专项资金(CAFRIFEEP201406)
文摘
【目的】克隆美国白蛾系统性RNA干扰缺失基因序列,对该基因进行序列特征分析和时空表达模式检测,并研究其在美国白蛾幼虫系统性RNA干扰中的功能。【方法】通过RT-PCR和RACE技术从美国白蛾幼虫中进行基因克隆,并进行生物信息学分析;利用qPCR技术检测该基因在美国白蛾不同发育阶段和幼虫不同组织中的相对表达量;利用RNAi和qPCR技术验证外源dsRNA对该基因的干扰效率,以及干扰该基因表达后对其他靶标基因干扰效率的影响。【结果】从美国白蛾幼虫中克隆得到一个美国白蛾系统性RNA干扰缺失基因并命名为HcSID-1(GenBank登陆号:MG696730)。该基因全长2761 bp,开放阅读框(ORF)2613 bp,编码870个氨基酸,预测蛋白分子量为97.08 kD,理论等电点(pI)6.81,有1个19 aa的信号肽。氨基酸序列分析表明,HcSID-1蛋白有1个长N末端(308 aa),序列中后段309—855位氨基酸之间具有典型的11个跨膜结构域;系统进化分析表明HcSID-1与鳞翅目昆虫同源性较高,和家蚕的BmSID-3亲缘关系最近;时空表达分析表明,HcSID-1在美国白蛾各发育阶段和幼虫各组织中均有表达,在幼虫中肠组织表达量最高。注射HcSID-1 dsRNA可显著降低该基因在转录水平的相对表达量,且该基因的下调能降低HcChi dsRNA在美国白蛾幼虫中的RNA干扰效率。【结论】获得具有典型家族特征的美国白蛾SID-1基因序列,该基因的下调能够影响其他靶标基因dsRNA的RNAi效率,表明该基因可能具有与其他SID基因在系统性RNAi过程中相同的功能。
关键词
美国白蛾
系统性rna干扰缺失基因
克隆表达
rna
干扰
Keywords
Hyphantria cunea
SID-1
gene expression
rna
interference
分类号
S758 [农业科学—森林经理学]
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职称材料
题名
腺病毒介导的shRNA下调PTEN表达对体外活化肝星状细胞增殖与凋亡的影响
被引量：
4
2
作者
郭剑
刘小娟
张国尊
孙慧聪
刘林力
郭金波
刘蕾
姚冬梅
宋梅
张晓岚
机构
河北医科大学第二医院消化内科
河北医科大学第二医院心脏外科
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第9期1627-1632,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30872513)
河北省自然科学基金资助项目(No.C2010000565)
河北省科技厅课题平台处项目(No.09966108D)
文摘
目的:探讨腺病毒介导的shRNA下调第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)表达对体外培养的大鼠活化肝星状细胞(HSCs)增殖和凋亡的影响及其信号转导机制。方法:体外培养活化HSCs,以腺病毒为载体将靶向PTEN的shRNA干扰重组体转染至体外活化的大鼠HSCs;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HSCs增殖;末端转移酶标记技术(TUNEL)及流式细胞术测定HSCs凋亡;Western blotting方法检测PTEN、Bax、Bcl-2、Akt、p-Akt、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达情况;实时荧光定量PCR方法检测PTEN、Akt及ERK1 mRNA表达情况。结果:(1)靶向PTEN的RNA干扰重组腺病毒成功感染体外活化HSCs,并在一定范围内呈时间依赖性地促进HSCs增殖,腺病毒感染HSCs后72 h,HSCs凋亡率显著下降(P<0.05);(2)Bax表达降低,Bcl-2表达增加(P<0.05);(3)p-Akt和p-ERK1/2蛋白表达显著增加(P<0.05);而Akt蛋白及其mRNA、ERK1蛋白及其mRNA表达均无显著改变(P>0.05)。结论:RNA干扰下调PTEN基因表达可能通过Bcl-2/Bax途径促进体外活化HSCs增殖并抑制其凋亡,此外,RNA干扰下调PTEN基因表达促进p-Akt和p-ERK1/2表达增多,提示PTEN可能通过影响PI3K/Akt和ERK1/2信号通路而在调控HSCs增殖和凋亡中发挥重要作用。
关键词
肝星状细胞
第10号染色体
缺失
的磷酸酶和张力蛋白同源物
基因
rna
干扰
细胞增殖
细胞凋亡
Keywords
Hepatic stellate cells
Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10
rna
interference
Cell proliferation
Apoptosis
分类号
R363 [医药卫生—病理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
美国白蛾HcSID-1基因的克隆、表达模式分析及其在幼虫中的功能验证
王越
张苏芳
徐瑶
刘福
孔祥波
张真
《林业科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2019
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
腺病毒介导的shRNA下调PTEN表达对体外活化肝星状细胞增殖与凋亡的影响
郭剑
刘小娟
张国尊
孙慧聪
刘林力
郭金波
刘蕾
姚冬梅
宋梅
张晓岚
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
4
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职称材料
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