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红外荧光成像技术分析DNA-蛋白复合物电泳迁移率的变动
被引量:
3
1
作者
王毅飞
蔡德鸿
+3 位作者
陈宏
莫永炎
伊娜
邢飞跃
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期289-291,共3页
目的通过红外荧光技术研究糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)与过氧化物酶体增殖物活化受体γ2(PPARγ2)启动子寡核苷酸的结合,了解一种非放射性研究电泳迁移率变动分析的新方法。方法原核表达制备GILZ蛋白,与红外荧光染料IRDye800标...
目的通过红外荧光技术研究糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)与过氧化物酶体增殖物活化受体γ2(PPARγ2)启动子寡核苷酸的结合,了解一种非放射性研究电泳迁移率变动分析的新方法。方法原核表达制备GILZ蛋白,与红外荧光染料IRDye800标记的PPARγ2启动子寡核苷酸结合,丙烯酰胺非变性胶电泳分离,Odyssey红外荧光成像系统扫描分析。结果一条DNA-蛋白结合复合物图像清晰直观,信号强度随着蛋白量的增加而增加。结论红外荧光技术可用于DNA-蛋白复合物电泳迁移率变动的分析,具有灵敏度高、操作方便的优点。
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关键词
红外荧光
电泳迁移率
DNA-
蛋白
复合物
糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白
过氧化物酶体增殖物活化受体γ2
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职称材料
吡格列酮对前脂肪细胞分化及GILZ蛋白表达的影响
被引量:
2
2
作者
王毅飞
伊娜
+2 位作者
吴琳英
黄晓淳
梁思虹
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期1122-1126,共5页
目的:探讨吡格列酮在3T3-L1前脂肪细胞分化及糖皮质激素诱导亮氨酸拉链(GILZ)蛋白表达调节方面的作用。方法:形态观察3T3-L1细胞分化过程,不同浓度吡格列酮(1×10^(-4)mmol/L^1×10^(-2)mmol/L)处理细胞48 h,然后于分化的第2、4...
目的:探讨吡格列酮在3T3-L1前脂肪细胞分化及糖皮质激素诱导亮氨酸拉链(GILZ)蛋白表达调节方面的作用。方法:形态观察3T3-L1细胞分化过程,不同浓度吡格列酮(1×10^(-4)mmol/L^1×10^(-2)mmol/L)处理细胞48 h,然后于分化的第2、4、6天用油红O染色测定细胞甘油三酯相对含量,实时荧光定量PCR法检测过氧化物增殖活化受体(PPAR)γ2和脂蛋白酶(LPL)的mRNA表达。不同浓度药物处理细胞48 h后,Western blot检测GILZ蛋白表达。结果:油红O法显示甘油三酯相对含量随药物处理浓度的增加而增加,与对照组比,1×10^(-3)mmol/L和1×10^(-2)mmol/L组甘油三酯含量显著性增加(P<0.05)。实时荧光定量PCR检测显示PPARγ2、LPL的mRNA表达也是随着药物处理浓度的增加而增加。与对照组比,吡格列酮高于1×10^(-3)mmol/L浓度时,PPARγ2、LPL的mRNA表达显著性增加(P<0.01)。Western blot显示GILZ蛋白表达随着药物处理浓度的增加而降低。结论:吡格列酮可下调GILZ表达,上调PPARγ2及下游LPL的表达。
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关键词
吡格列酮
糖皮质
激素
诱导
亮
氨
酸
拉链
脂肪细胞分化
过氧化物增殖活化受体γ2
3T3-L1细胞
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职称材料
GILZ真核表达载体的构建及其表达定位
被引量:
1
3
作者
王毅飞
邢飞跃
+3 位作者
蔡德鸿
陈宏
莫永炎
伊娜
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期618-621,共4页
目的:克隆、构建HA标签的糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白GILZ表达载体,观察其在细胞中表达与定位,为研究GILZ在脂肪细胞分化中的作用提供工具。方法:采用逆转录PCR(RT-PCR)法从C3H10T1/2细胞中扩增带有HA标签的GILZcDNA编码区,并将其重...
目的:克隆、构建HA标签的糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白GILZ表达载体,观察其在细胞中表达与定位,为研究GILZ在脂肪细胞分化中的作用提供工具。方法:采用逆转录PCR(RT-PCR)法从C3H10T1/2细胞中扩增带有HA标签的GILZcDNA编码区,并将其重组于真核表达载体pcDNA3中。经酶切、序列鉴定分析后,将该重组质粒通过Lipofectamine2000脂质体和CaCl2方法,分别转染C3H10T1/2和293T细胞,用HA抗体免疫荧光和免疫印迹法检测GILZ在细胞内的表达、分布及分子量大小。结果:HA-GILZ表达载体经酶切鉴定和测序分析确认构建成功,并在C3H10T1/2和293T细胞中获得了高效表达。在荧光显微镜下,GILZ主要表达于细胞质内,分子量约20kD。结论:成功构建HA-GILZ基因表达载体并表达于C3H10T1/2细胞质中,为GILZ的功能研究奠定了基础。
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关键词
糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白
C3H10T1/2细胞
真核表达载体
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职称材料
玉米HD-Zip转录因子基因ZmHOX32的克隆及功能探究
被引量:
1
4
作者
张新
曹丽茹
+5 位作者
张军
魏良明
张前进
魏昕
王振华
鲁晓民
《河南农业科学》
北大核心
2019年第11期34-39,共6页
同源异型域-亮氨酸拉链蛋白(HD-Zip)可通过与其他蛋白质互作参与激素信号传导途径,进而调控植物对逆境胁迫的应答和生长发育等过程。为验证及探究HD-Zip蛋白对干旱胁迫和ABA诱导的响应模式,从玉米抗旱自选系郑D58M中克隆了1个HD-Zip转...
同源异型域-亮氨酸拉链蛋白(HD-Zip)可通过与其他蛋白质互作参与激素信号传导途径,进而调控植物对逆境胁迫的应答和生长发育等过程。为验证及探究HD-Zip蛋白对干旱胁迫和ABA诱导的响应模式,从玉米抗旱自选系郑D58M中克隆了1个HD-Zip转录因子基因,暂时命名为ZmHOX 32。ZmHOX32蛋白包含856个氨基酸,属于亲水性蛋白质,定位于细胞核内。进化树和保守基序分析发现,ZmHOX32蛋白序列与谷子、胡桃木的同源蛋白序列高度相似且保守基序完全一致。ZmHOX 32基因启动子序列含有响应激素、非生物胁迫及光刺激的结合元件。qRT-PCR结果显示,ZmHOX 32基因属于组成型表达基因,在营养分生组织中高表达,且受干旱胁迫和外源ABA的正向诱导,表明ZmHOX 32基因参与干旱胁迫和ABA信号传导途径。
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关键词
玉米
同源异型域-
亮
氨
酸
拉链
蛋白
干旱胁迫
外源ABA
正向
诱导
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职称材料
题名
红外荧光成像技术分析DNA-蛋白复合物电泳迁移率的变动
被引量:
3
1
作者
王毅飞
蔡德鸿
陈宏
莫永炎
伊娜
邢飞跃
机构
南方医科大学珠江医院内分泌科
南方医科大学病理生理学教研室
广州市中医院内分泌科
暨南大学组织移植与免疫中心
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期289-291,共3页
文摘
目的通过红外荧光技术研究糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)与过氧化物酶体增殖物活化受体γ2(PPARγ2)启动子寡核苷酸的结合,了解一种非放射性研究电泳迁移率变动分析的新方法。方法原核表达制备GILZ蛋白,与红外荧光染料IRDye800标记的PPARγ2启动子寡核苷酸结合,丙烯酰胺非变性胶电泳分离,Odyssey红外荧光成像系统扫描分析。结果一条DNA-蛋白结合复合物图像清晰直观,信号强度随着蛋白量的增加而增加。结论红外荧光技术可用于DNA-蛋白复合物电泳迁移率变动的分析,具有灵敏度高、操作方便的优点。
关键词
红外荧光
电泳迁移率
DNA-
蛋白
复合物
糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白
过氧化物酶体增殖物活化受体γ2
Keywords
infrared imaging system
electrophoretic mobility shift assay
DNA-protein complex
glucocorticoid induced leucine zipper
peroxisome proliferator-activated receptor-gamma 2
分类号
Q51-33 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
吡格列酮对前脂肪细胞分化及GILZ蛋白表达的影响
被引量:
2
2
作者
王毅飞
伊娜
吴琳英
黄晓淳
梁思虹
机构
广州医科大学附属第一医院内分泌科
广州市中医院内分泌科
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期1122-1126,共5页
基金
广东省科技计划(No.2013B021800195)
广东省医学科学技术研究基金资助项目(No.A2014291)
文摘
目的:探讨吡格列酮在3T3-L1前脂肪细胞分化及糖皮质激素诱导亮氨酸拉链(GILZ)蛋白表达调节方面的作用。方法:形态观察3T3-L1细胞分化过程,不同浓度吡格列酮(1×10^(-4)mmol/L^1×10^(-2)mmol/L)处理细胞48 h,然后于分化的第2、4、6天用油红O染色测定细胞甘油三酯相对含量,实时荧光定量PCR法检测过氧化物增殖活化受体(PPAR)γ2和脂蛋白酶(LPL)的mRNA表达。不同浓度药物处理细胞48 h后,Western blot检测GILZ蛋白表达。结果:油红O法显示甘油三酯相对含量随药物处理浓度的增加而增加,与对照组比,1×10^(-3)mmol/L和1×10^(-2)mmol/L组甘油三酯含量显著性增加(P<0.05)。实时荧光定量PCR检测显示PPARγ2、LPL的mRNA表达也是随着药物处理浓度的增加而增加。与对照组比,吡格列酮高于1×10^(-3)mmol/L浓度时,PPARγ2、LPL的mRNA表达显著性增加(P<0.01)。Western blot显示GILZ蛋白表达随着药物处理浓度的增加而降低。结论:吡格列酮可下调GILZ表达,上调PPARγ2及下游LPL的表达。
关键词
吡格列酮
糖皮质
激素
诱导
亮
氨
酸
拉链
脂肪细胞分化
过氧化物增殖活化受体γ2
3T3-L1细胞
Keywords
Pioglitazone
Glucocorticoid-induced leucine zipper
Adipocytes differentiation
peroxisome proliferator-activated receptor γ2
3T3-L1 cells
分类号
R363 [医药卫生—病理学]
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职称材料
题名
GILZ真核表达载体的构建及其表达定位
被引量:
1
3
作者
王毅飞
邢飞跃
蔡德鸿
陈宏
莫永炎
伊娜
机构
南方医科大学珠江医院内分泌科
暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心
南方医科大学病理生理教研室
广州市中医院内分泌科
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期618-621,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30470829)
文摘
目的:克隆、构建HA标签的糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白GILZ表达载体,观察其在细胞中表达与定位,为研究GILZ在脂肪细胞分化中的作用提供工具。方法:采用逆转录PCR(RT-PCR)法从C3H10T1/2细胞中扩增带有HA标签的GILZcDNA编码区,并将其重组于真核表达载体pcDNA3中。经酶切、序列鉴定分析后,将该重组质粒通过Lipofectamine2000脂质体和CaCl2方法,分别转染C3H10T1/2和293T细胞,用HA抗体免疫荧光和免疫印迹法检测GILZ在细胞内的表达、分布及分子量大小。结果:HA-GILZ表达载体经酶切鉴定和测序分析确认构建成功,并在C3H10T1/2和293T细胞中获得了高效表达。在荧光显微镜下,GILZ主要表达于细胞质内,分子量约20kD。结论:成功构建HA-GILZ基因表达载体并表达于C3H10T1/2细胞质中,为GILZ的功能研究奠定了基础。
关键词
糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白
C3H10T1/2细胞
真核表达载体
Keywords
Glucocorticoid induced leucine zipper
C3H10T1/2 cells
Eukaryotic expression vector
分类号
R318.15 [医药卫生—生物医学工程]
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职称材料
题名
玉米HD-Zip转录因子基因ZmHOX32的克隆及功能探究
被引量:
1
4
作者
张新
曹丽茹
张军
魏良明
张前进
魏昕
王振华
鲁晓民
机构
河南省农业科学院粮食作物研究所
河南省蚕业科学研究院
出处
《河南农业科学》
北大核心
2019年第11期34-39,共6页
基金
国家重点研发计划项目(2016YFD0101205-4)
国家玉米产业技术体系项目(CARS-02-08)
文摘
同源异型域-亮氨酸拉链蛋白(HD-Zip)可通过与其他蛋白质互作参与激素信号传导途径,进而调控植物对逆境胁迫的应答和生长发育等过程。为验证及探究HD-Zip蛋白对干旱胁迫和ABA诱导的响应模式,从玉米抗旱自选系郑D58M中克隆了1个HD-Zip转录因子基因,暂时命名为ZmHOX 32。ZmHOX32蛋白包含856个氨基酸,属于亲水性蛋白质,定位于细胞核内。进化树和保守基序分析发现,ZmHOX32蛋白序列与谷子、胡桃木的同源蛋白序列高度相似且保守基序完全一致。ZmHOX 32基因启动子序列含有响应激素、非生物胁迫及光刺激的结合元件。qRT-PCR结果显示,ZmHOX 32基因属于组成型表达基因,在营养分生组织中高表达,且受干旱胁迫和外源ABA的正向诱导,表明ZmHOX 32基因参与干旱胁迫和ABA信号传导途径。
关键词
玉米
同源异型域-
亮
氨
酸
拉链
蛋白
干旱胁迫
外源ABA
正向
诱导
Keywords
Zea mays
HD-Zip
Drought stress
Exogenous ABA
Positive induction
分类号
S513 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
红外荧光成像技术分析DNA-蛋白复合物电泳迁移率的变动
王毅飞
蔡德鸿
陈宏
莫永炎
伊娜
邢飞跃
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
吡格列酮对前脂肪细胞分化及GILZ蛋白表达的影响
王毅飞
伊娜
吴琳英
黄晓淳
梁思虹
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
GILZ真核表达载体的构建及其表达定位
王毅飞
邢飞跃
蔡德鸿
陈宏
莫永炎
伊娜
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
玉米HD-Zip转录因子基因ZmHOX32的克隆及功能探究
张新
曹丽茹
张军
魏良明
张前进
魏昕
王振华
鲁晓民
《河南农业科学》
北大核心
2019
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
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引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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